廖興春

·臨床研究·

分泌性中耳炎患者自然殺傷細胞比例、白介素4和干擾素γ表達水平的變化分析

廖興春

目的探討分泌性中耳炎(SOM)患者自然殺傷(NK)細胞比例、白介素4(IL-4)、干擾素γ(IFN-γ)表達水平的變化及意義。方法選取2014年2月～2016年3月在我院治療的SOM 患者91例(觀察組)，同時選取100例健康志愿者作為對照組，檢測2組NK細胞比例、IL-4、IFN-γ水平。結(jié)果觀察組外周血NK細胞為(16.80±7.10)%，明顯低于對照組(P<0.05)；觀察組IL-4和IFN-γ分別為(310.01±50.81)pg/L和(1 904.66±150.12)pg/L，明顯高于對照組(P<0.05)。急性SOM患者外周血NK細胞比例為(18.20±5.11)%，明顯高于慢性SOM患者(P<0.05)，而IL-4和IFN-γ分別為(260.22±40.13)pg/L和(1 705.81±150.43)pg/L，明顯低于慢性SOM患者(P<0.05)。病程≥3個月的患者外周血NK細胞為(14.81±4.10)%，明顯高于病程<1個月和1～3個月患者(P<0.05)，IL-4和IFN-γ分別為(352.14±60.21)pg/L和(2 081.88±190.16)pg/L，明顯高于病程<1個月和1～3個月患者(P<0.05)。觀察組患者中耳積液IFN-γ為(2 109.41±142.60)pg/L，明顯高于外周血(P<0.05)。結(jié)論SOM 患者NK細胞比例低，IL-4和IFN-γ高表達，可能在疾病的發(fā)病過程中發(fā)揮一定的作用。(中國眼耳鼻喉科雜志，2017，17：342-344, 350)

分泌性中耳炎；自然殺傷細胞；白介素4；干擾素γ；外周血；中耳積液

分泌性中耳炎(secretory otitis media, SOM)是臨床上較為常見的耳鼻喉科疾病。有研究[1]顯示SOM 的發(fā)病率可達123/10萬人以上。疾病長期發(fā)展，可以導致患者聽力功能受損，嚴重者會導致遠期聽功能喪失[2]。對于SOM 發(fā)病過程中相關(guān)生物學機制的研究，可以為揭示其發(fā)病機制提供參考，并為臨床上的綜合治療提供理論依據(jù)。白介素4(interleukin-4, IL-4)及干擾素γ(interferon-γ，IFN-γ)是反映Th1/Th2細胞免疫平衡的重要細胞因子，其升高可以通過加劇自身免疫性紊亂、炎癥損傷等，促進SOM 病情的進展[3-5]。本研究選取2014年2月～2016年3月在我院治療的SOM 患者91例，探討NK細胞的比例變化及IL-4、IFN-γ在SOM患者血清、局部分泌物中的表達。

1 資料與方法

1.1 一般資料 SOM 患者91例(觀察組)，年齡20～38歲；男性57例、女性34例。納入標準：①經(jīng)電耳鏡、聲導抗等確診為SOM；②均為初次治療，病程>1個月；③患者及家屬知情同意并簽署同意書。排除標準：①有變應性鼻炎、濕疹等過敏性疾病史；②合并惡性腫瘤、糖尿病、結(jié)核、病毒性肝炎等疾病；③近期服用過免疫抑制劑。同時選取100例健康志愿者作為對照組，年齡19～40歲，男性60例、女性40例。2組受試者性別、年齡等差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)(表1)。

表1 2組一般資料比較

1.2 檢測方法 清晨采集空腹靜脈血，按照10 000 r/min的速度進行離心，-20 ℃保存待測。采集標本后1周內(nèi)檢測IL-4、IFN-γ水平。采用瑞士羅氏全自動生化分析儀E170模塊進行檢測。檢測試劑盒購自上海泰康生物科技有限公司。具體檢測方法參照試劑盒說明書，試劑盒內(nèi)配有質(zhì)控血清或質(zhì)控標準品，所有操作嚴格按照操作說明完成。

2 結(jié)果

2.1 2組外周血NK細胞、IL-4、IFN-γ比較 觀察組外周血NK細胞比例明顯低于對照組(P<0.05)，而IL-4和IFN-γ明顯高于對照組(P<0.05)(表2)。

2.2 觀察組急慢性患者外周血NK細胞、IL-4、IFN-γ比較 以病程≥3個月為慢性，<3個月為急性。急性患者外周血NK細胞比例明顯高于慢性患者，而IL-4和IFN-γ水平明顯低于慢性患者(P<0.05)(表3)。

表2 2組外周血NK細胞、IL-4和IFN-γ比較

表3 觀察組急、慢性患者外周血NK細胞、IL-4、IFN-γ比較

2.3 觀察組不同病程患者外周血NK細胞、IL-4、IFN-γ比較 病程≥3個月患者外周血NK細胞比例明顯高于病程<1個月和1～3個月患者(P<0.05)，而IL-4和IFN-γ明顯高于病程<1個月和1～3個月患者(P<0.05)(表4)。

表4 不同病程患者外周血NK細胞、IL-4、IFN-γ比較

注：a示與<1個月組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；b示與1～3個月組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)

2.4 不同年齡段患者外周血NK細胞、IL-4、IFN-γ比較 20～25歲、26～30歲和>30歲組患者外周血NK細胞、IL-4和IFN-γ分別為(16.83±6.22)%、(305.82±43.28)pg/L和(1 895.20±132.48)pg/L，(16.73±7.01)%、(312.38±50.10)pg/L和(1 913.22±140.01)pg/L、(16.70±6.22)%、(311.19±52.43)pg/L和(1 993.22±147.22)pg/L，差異均無統(tǒng)計學意義(F=1.894、2.193和3.011，P值均>0.05)。

2.5 觀察組外周血與中耳積液IL-4和IFN-γ比較 觀察組患者外周血與中耳積液IL-4差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，而中耳積液IFN-γ水平明顯高于外周血(P<0.05)(表5)。

表5 觀察組外周血與中耳積液IL-4和IFN-γ比較

3 討論

自身免疫功能紊亂、遺傳因素及感染等，均可以促進SOM的發(fā)生、發(fā)展，特別是在具有感染性疾病史、免疫功能下降的人群中，SOM的發(fā)病率更高，可較普通對照人群上升3～4倍[6]。臨床上SOM 病情的進展，嚴重影響了患者的生活質(zhì)量。一項匯集了119例樣本量的臨床前瞻性研究顯示，現(xiàn)階段臨床上抗感染等綜合措施治療SOM 的總有效率不足35%，且治療后的復發(fā)率較高，病情緩解率也不足40%，臨床治療具有一定的局限性[7-8]。

T細胞免疫在調(diào)節(jié)局部組織損傷、免疫復合物沉積及氧化應激損傷等方面均發(fā)揮一定的作用，Th1/Th2細胞可以通過分泌相應的細胞因子，參與疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中。IL-4是Th2細胞分泌的炎癥因子，其羧基末端的多重巰基結(jié)構(gòu)，可以通過誘導下游單核細胞、巨噬細胞等浸潤或者損傷咽鼓管，進而加劇SOM 患者聽功能的減退[9- 10]；IFN-γ是Th1細胞分泌的炎癥因子，IFN-γ上升可以加劇下游NK細胞對于咽鼓管上皮細胞的吞噬或者促凋亡作用，并通過加劇局部缺血-再灌注損傷，進而影響到咽鼓管的功能[11-13]。

本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組患者血清中NK細胞比例明顯下降，低于健康對照組，而IFN-γ及IL-4等細胞因子表達明顯上升，高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義，提示IFN-γ及IL-4等可能參與了SOM 的發(fā)病過程。IFN-γ及IL-4等上升，可以加劇局部組織中炎癥細胞的浸潤，促進單核細胞誘導的組織損傷，進而促進病情進展。Sylvester等[14-15]收集分析了74例急性SOM 的臨床資料，發(fā)現(xiàn)在病例組患者中，IFN-γ及IL-4等的表達可較普通對照人群上升3～4倍，且患者的病情越重，IFN-γ及IL-4等的表達越高，這與本研究的結(jié)論較為一致。在急性發(fā)病的患者中，NK細胞比例明顯上升，NK的上升可以發(fā)揮其對于下游抗原呈遞細胞或者樹突細胞等的上調(diào)作用，進而提高機體的細胞免疫應答功能，而IFN-γ及IL-4等細胞炎癥因子的表達卻明顯低于慢性組，主要考慮在急性發(fā)病早期，血清中IFN-γ及IL-4等細胞炎癥因子的分泌可能存在一定延遲。但Sylvester等[14]在急性發(fā)病的患者中發(fā)現(xiàn)，急性期SOM 患者血清中IFN-γ及IL-4的表達均明顯高于慢性組。這與本研究結(jié)論不完全一致，考慮臨床病例入組、排除標準的偏倚，檢測試劑盒的不同等，可能導致最終結(jié)論的差別。另外，在不同年齡階段的患者中，并未發(fā)現(xiàn)IFN-γ及IL-4的表達差異，而在不同病程中，表達差異較為明顯，且患者的病程越長，IFN-γ及IL-4的表達越高，差異性趨勢較為明顯。表明病程越差患者體內(nèi)的炎癥反應越嚴重，NK細胞免疫功能越差。最后，本研究并未發(fā)現(xiàn)觀察組患者中耳積液IL-4的表達差異，而IFN-γ可有一定程度的上升，主要考慮與局部咽鼓管腺體分泌亢進有關(guān)。

綜上所述，在SOM 患者血清中，NK細胞表達下降，而IFN-γ及IL-4等細胞炎癥因子表達明顯上升。同時局部中耳分泌物中的IFN-γ也呈現(xiàn)上升趨勢。在臨床治療過程中可以通過隨訪相關(guān)指標的變化，進而評估臨床效果。特別是對于治療后病情緩解程度不高的患者，此時血清學指標的參考價值更高。但本研究仍然存在一定的局限性：①對于IFN-γ及IL-4等指標與SOM 患者病情嚴重程度間的關(guān)系分析不足；②對于IFN-γ及IL-4等指標的診斷學價值分析不足。

[ 1 ] Pumarola F, ISDL Cueva, Sistiaga-Hernando A, et al. Etiología bacteriana de la otitis media aguda en Espaa en la era de la vacuna neumocócica conjugada[J]. Anales de Pediatría,2016,85(5):224-231.

[ 2 ] Kim HJ, Kim SY, Kwon JY, et al. Identification of potential novel biomarkers and signaling pathways related to otitis media induced by diesel exhaust particles using transcriptomic analysis in an in vivo system[J]. PLoS One,2016,11(11):6044-6051.

[ 3 ] 甄麗紅，蘇法仁，丁靜華，等. 綜合療法治療成人分泌性中耳炎分析[J]. 中華耳科學雜志,2015,24(3):508-510.

[ 4 ] 遲作華，劉振，肖平. NK細胞及IL-2、IL-4、IFN-γ在上呼吸道感染誘發(fā)急性分泌性中耳炎患者的表達[J]. 中國實驗診斷學,2014,22(6):973-975.

[ 5 ] 何光耀，唐安洲，譚頌華. 分泌性中耳炎中細胞因子的研究進展[J]. 廣西醫(yī)科大學學報,2012,32(4):650-652.

[ 6 ] Neff BA, Voss SG, Carlson ML, et al. Treatment of eosinophilic otitis media with pegylated interferon-α 2a and 2b[J]. Laryngoscope,2016,22(5):90-92.

[ 7 ] Son MJ, Choi S, Kim Y, et al. Herbal medicines for the treatment of otitis media with effusion: a systematic review of randomised controlled trials[J]. BMJ Open,2016,6(11):50-53.

[ 8 ] 萬學梅，楊軍，賈歡. 兒童分泌性中耳炎的手術(shù)療效比較、術(shù)后復發(fā)因素及對策[J]. 中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2014,49(11):964-967.

[ 9 ] 劉振，王躍健，肖平，等. 流式細胞術(shù)微球陣列法檢測多種細胞因子在分泌性中耳炎患者中的表達[J]. 中華耳科學雜志,2011,32(4):448-450.

[10] 馬慧琴，張治軍. 分泌性中耳炎相關(guān)細胞因子免疫機制研究進展[J]. 山東大學耳鼻喉眼學報,2012,24(4):78-81.

[11] 秦彩虹，趙守琴，楊琳，等. 干擾素γ及白細胞介素4在慢性分泌性中耳炎患者中耳積液及外周血中的表達及意義[J]. 中華醫(yī)學雜志,2013,93(20):1559-1562.

[12] 舒艷，羅浩，姚紅兵. 兒童分泌性中耳炎致骨導聽力下降的臨床特征分析[J]. 中華耳科學雜志,2011,25(1):24-27.

[13] 黃家軍, 王瓊蓮, 李智群, 等. 分泌性中耳炎患者外周血和中耳積液中 IFN-γ 和 IL-4 的檢測及意義[J]. 中國實驗診斷學, 2015 ,19(11): 1844-1846.

[14] Sylvester MJ, Sanghvi S, Patel V M, et al. Malignant otitis externa hospitalizations: analysis of patient characteristics[J]. Laryngoscope,2016,25(6):67-69.

[15] 馬翔宇. 分泌性中耳炎患兒手術(shù)治療前后炎性細胞因子的變化及其臨床意義[J]. 中國全科醫(yī)學,2014,22(9):1017-1020.

Expressionandsignificanceofnaturekillercells,interleukin-4andinterferon-γinsecretoryotitismedia

LIAOXing-chun.

DepartmentofOtorhinolaryngology,theSecondPeople’sHospitalofNeijianginSichuanProvince,Neijing641000,China

LIAO Xing-chun, Email: 330792417@qq.com

ObjectiveTo investigate the expression and significance of nature killer (NK) cells, interleukin-4(IL-4), interferon-γ (IFN-γ) in peripheral blood and middle ear effusion of secretory otitis media (SOM) patients.MethodsNinety-one cases of SOM treated from February 2014 to March 2016 were selected as the observation group. At the same time, 100 healthy volunteers were selected as the control group. The expression of NK cells, IL-4 and IFN-γ in the two groups were detected.ResultsPeripheral blood NK cells in the observation group were (16.80±7.10)%, significantly lower than those in the control group (P< 0.05). IL-4 and IFN-γ in the observation group were (310.01±50.81) pg/L and (1 904.66±150.12) pg/L, all significantly higher than those in the control group (P< 0.05). NK cells in the peripheral blood of patients with acute SOM were (18.20±5.11)%, significantly higher than those of chronic SOM patients (P<0.05), while IL-4 and IFN-γ were (260.22±40.13) pg/L and (1 705.81±150.43) pg/L, significantly lower than those in chronic SOM patients (P< 0.05). NK cells in the peripheral blood of patients with course ≥3 months were (14.81±4.10)%, significantly higher than course <1 month and 1～3 months patients (P< 0.05); IL-4 and IFN- γ were (352.14±60.21) pg/L and (2 081.88±190.16) pg/L, significantly higher than the course < 1 month and 1～3 months patients (P< 0.05). The IFN-γ of middle ear effusion in the observation group was (2 109.41±142.60) pg/L, significantly higher than that in the peripheral blood (P<0.05).ConclusionsSOM shows low expression of NK cells and high expression of IL-4 and IFN-γ, and may play a role in the pathogenesis of the disease. (Chin J Ophthalmol and Otorhinolaryngol,2017,17:342-344, 350)

Secretory otitis media; Nature killer cell; Interleukin-4; Interferon-γ; Peripheral blood; Middle ear effusion

2016-12-05)

(本文編輯 楊美琴)

四川省內(nèi)江市第二人民醫(yī)院耳鼻喉科 內(nèi)江 641000

廖興春(Email: 330792417@qq.com)

10.14166/j.issn.1671-2420.2017.05.008