郭正兵，韓柏明，郭 強(qiáng)

(1.江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 句容212400； 2.句容虎耳山無花果專業(yè)合作社，江蘇 句容212400)

SSR熒光標(biāo)記毛細(xì)管電泳法分析30份無花果品種的遺傳多樣性

郭正兵1，韓柏明1，郭 強(qiáng)2

(1.江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 句容212400； 2.句容虎耳山無花果專業(yè)合作社，江蘇 句容212400)

為了分析從國內(nèi)外搜集的無花果品種的遺傳多樣性，利用SSR熒光標(biāo)記毛細(xì)管電泳檢測(cè)法構(gòu)建了30份無花果品種的指紋鑒定平臺(tái)。以15對(duì)SSR熒光引物對(duì)30份無花果品種資源進(jìn)行分析，結(jié)果共檢測(cè)到79個(gè)等位變異。15個(gè)位點(diǎn)的PIC值在0.332 8～0.875 7，平均為0.530 3；各位點(diǎn)的 Shannon 信息指數(shù)(I) 為0.604 9～2.127 3，平均為 1.136 0。30份品種資源的遺傳距離在0.025 4～1.123 4。其中引物FCUP038-6的雜合度、PIC 值分別高達(dá)0.846 8、0.861 1，可考慮作為以后區(qū)試雜交種純度鑒定的核心標(biāo)記。30份無花果品種資源表現(xiàn)出比較豐富的遺傳多樣性，聚類分析結(jié)果顯示，30份資源被分為兩組，來源不同的品種被分散聚類。同時(shí)，無花果品種的親緣關(guān)系與其來源和表型特征并不存在明顯的相關(guān)性。

無花果；遺傳多樣性；SSR

無花果(FicuscaricaL.)屬于?？?Moraceae)，亞熱帶落葉果樹，多數(shù)為小喬木，也有灌木和大喬木，是人類馴化最早的經(jīng)濟(jì)作物[1]。我國無花果栽培歷史悠久，但一直以來發(fā)展緩慢，只有零星栽培，直到最近20年來才得到迅速發(fā)展，已經(jīng)成為一種新興特色水果。無花果適應(yīng)性強(qiáng)，栽培容易，投資少、見效快、病蟲害少，并具有很高的保健和藥用價(jià)值，是小雜果中極具開發(fā)前途的果樹，截至2014年底，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國無花果種植面積約為5 000 hm2[2]。因此，我國無花果產(chǎn)業(yè)具有較大的發(fā)展?jié)摿Α３诵陆?、山東栽培較為集中外，江蘇、北京、遼寧等地紛紛開展無花果的引種和試驗(yàn)栽培，并開展了無花果設(shè)施栽培試驗(yàn)。我國無花果栽培品種除了早期引進(jìn)的新疆早黃、新疆晚黃、青皮、布蘭瑞克及紫果等品種外，自20世紀(jì)80年代以來從美國、日本等國相繼引入了一些果大、品質(zhì)優(yōu)、產(chǎn)量高的新品種，極大地豐富了我國無花果的品種資源，并開展了育種研究，陸續(xù)培育了十幾個(gè)新品種。國外已經(jīng)開展了較多的關(guān)于無花果品種資源方面的研究[3-7]，但目前我國對(duì)無花果種質(zhì)資源遺傳多樣性和系譜關(guān)系方面的研究還極其缺乏，相關(guān)報(bào)道較少[8-10]。目前在我國無花果生產(chǎn)上，許多栽培品種名稱混淆、來源不清、品種分類工作基礎(chǔ)較弱，使得我國無花果栽培品種無法與世界栽培體系相銜接，不利于國內(nèi)無花果種質(zhì)資源保護(hù)與開發(fā)利用，從而造成該樹種在新品種選育等方面存在諸多困難[11-12]。種質(zhì)資源遺傳多樣性、親緣關(guān)系和系譜關(guān)系的研究是無花果資源的搜集保存和利用的理論基礎(chǔ)，開展這方面的研究是非常必要和迫切的。

DNA分子標(biāo)記是DNA水平上遺傳變異的直接反應(yīng)，它們是能穩(wěn)定遺傳的，而且信息量大，許多多態(tài)性標(biāo)記在非編碼區(qū)，表現(xiàn)選擇 “中性”，不受環(huán)境因素的影響，且與基因表達(dá)無關(guān)，檢測(cè)迅速方便快捷，其在果樹分類、品種鑒定、遺傳圖譜構(gòu)建和分子輔助選擇育種等方面應(yīng)用廣泛，極大地推動(dòng)了果樹遺傳研究[13]。因此，本文運(yùn)用熒光SSR技術(shù)，對(duì)近年來江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院在國內(nèi)搜集的無花果種質(zhì)資源進(jìn)行了遺傳多樣性方面的初步研究，旨在為無花果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供一些有益參考。

1 材料與方法

1.1 材料

本試驗(yàn)所用30份無花果資源由江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院近年來從國內(nèi)外搜集，品種名稱及其來源見表1。

1.2方法

表1試驗(yàn)材料的來源

Table1Sources of test materials

編號(hào)No.品種Cultivar果實(shí)顏色Fruitcolor來源Origin編號(hào)No.品種Cultivar果實(shí)顏色Fruitcolor來源Origin1華麗Hali黃綠色Yellowgreen美國America16B110 B110黃綠色Yellowgreen日本Japan2布蘭瑞克Branrki黃綠色Yellowgreen法國France17哈代Hadai棕褐色Sepia來源不祥Ominousorigin3白熱那亞WhiteGenoa黃色Yellow日本Japan18以色列Isreal黃綠色Yellowgreen以色列Isreal4香蕉Banana黃綠色Yellowgreen日本Japan19羅伊爾Lonie黃色Yellow日本Japan5中國紫果Chinesepurplefruit棕紫色Brownishpurple中國China20新疆早黃Xinjiangearlyyellow黃色Yellow中國China6B1011 B1011黃色Yellow美國America21金傲芬Jinaofen黃色Yellow美國America7白馬賽Barmas黃綠色Yellowgreen法國France22美麗亞Maliya黃色Yellow日本Japan8青皮Qingpi綠色Green中國China23A1213 A1213黃色Yellow美國America9格萊斯Glace紅黃色Reddishyellow日本Japan24杜魯DUlu黃底紅暈Yellowblush日本Japan10日本紫果Japanesepurplefruit紫色Purple日本Japan25亞當(dāng)Yadang粉紅色Rosehermosa日本Japan11豐產(chǎn)黃Fencahn黃色Yellow意大利Italy26白蜜Baimi黃綠色Yellowgreen中國China12波姬紅Bpjihon紫紅色Amaranth美國America27紫淘芬Zitafen紫色Purple美國America13加州黑Jazhehi棕褐色Sepia美國America28紫寶Zibao棕紫色Brownishpur-ple中國China14紫色波爾多ViolettedeBordeaux紫色Purple西班牙Spain29麗莎Lisa粉紅色Rosehermosa新西蘭NewZealand15果王Fruitking綠色Green美國America30瑪斯義陶芬Mristf紫紅色Amaranth美國America

1.2.1 DNA提取

2015年春季取無花果幼嫩葉片作為材料，進(jìn)行DNA提取，利用改進(jìn)的植物DNA抽提液(添加多種針對(duì)植物特點(diǎn)的多糖、多酚去除成分)迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，氯仿抽提后通過離心清除多糖、多酚和蛋白質(zhì)(根據(jù)需要，上清中還加入異丙醇離心沉淀基因組 DNA，進(jìn)一步去除其他各種雜質(zhì))，然后在高離子鹽狀態(tài)下基因組 DNA通過選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜中，經(jīng)過一系列的快速漂洗、離心等步驟，進(jìn)一步去除蛋白、多糖、多酚和細(xì)胞代謝物等雜質(zhì)，最后用低濃度鹽的洗脫緩沖液從硅基質(zhì)膜上將純凈基因組 DNA洗脫干凈(CTAB法植物基因組DNA快速提取試劑盒，南京鐘鼎生物技術(shù)有限公司)。提取的DNA用于SSR熒光標(biāo)記分析。

1.2.2 SSR引物

篩選的15對(duì)無花果引物來源于前人研究，本研究所用熒光引物均由上海生工生物技術(shù)有限公司合成，正向引物加注FAM(藍(lán)) 的熒光染料。

1.2.3 PCR擴(kuò)增

SSR 熒光引物體系(共 25 μL)：ddH2O 14.8 μL，dNTP 0.4 μL，Buffer 2 μL，上游引物 0.3 μL(20 μmol·L-1)，下游引物 0.3 μL(20 μmol·L-1)，DNA 模板2 μL，Taq0.2 μL。94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，54 ℃(退火溫度在54 ℃上下波動(dòng))復(fù)性35 s，72 ℃延伸40 s，共35個(gè)循環(huán)；最終72 ℃延伸3 min。

表2十五對(duì)引物序列

Table2Sequence of 15 primers

引物名稱Primersname序列Sequence(5'-3')片段大小Fragmentsize/bpM13FAM-CTGTAAAACGACGGCCAGTFCUP038-6F:CTGTAAAACGACGGCCAGTCAATGTATCATTTCATCTCACGAAR:*AGTTCCCATGTTTGGTTACTGA169-193FCUP044-6F:CTGTAAAACGACGGCCAGTGCTCGCCTTTCTAACATGGAR:AACTTTCATTCATTGCGGAAA208-218FCUP045-6F:CTGTAAAACGACGGCCAGTTTCCAAGGCATATTATGTTGAAAR:*GTCCAAGGCAAATGATGAA133-143FCUP066-7F:CTGTAAAACGACGGCCAGTCCCTCTCGAAGAAGAAGCAR:CTACAGGAAATGGGCCTCAA161-183FCUP069-6F:CTGTAAAACGACGGCCAGTCCGGAAACACACAAATTCAAR:CAAAGCGTCGACTCACTGAA192-202MFC2F:CTGTAAAACGACGGCCAGTGCTTCCGATGCTGCTCTTAR:TCGGAGACTTTTGTTCAAT173-187MFC7F:CTGTAAAACGACGGCCAGTCACAATCAAAATAGTTACCGR:AGCGAAGACAGTTACAAAGC161-175MFC8F:CTGTAAAACGACGGCCAGTGTGGCGTCGTCTCTAATAATR:TATTCTATGCTGTCTTATGTCA190-194LMFC17F:CTGTAAAACGACGGCCAGTTTAAGAATACGTCCTTGGTATR:GAGATTTCGTTGACTTCATT202-210LMFC19F:CTGTAAAACGACGGCCAGTCTTATGAAAACTCGGTAGAAGR:AATGAATGGAAATGATCTTG314-326LMFC27F:CTGTAAAACGACGGCCAGTATTTCTTCAACTTTTGTAATGAR:CCTTTTGTCTACATATACCTTT202-214LMFC28F:CTGTAAAACGACGGCCAGTTGATTCCTTTTACTTGTAGATTR:AAGACATTGAGACATACCAG209-221LMFC30F:CTGTAAAACGACGGCCAGTTTGTCCGTTTCTTATACAATR:TCTTTTTAGGCAGATGTTAG249-279LMFC37F:CTGTAAAACGACGGCCAGTAAGTACATCTTCACCATTGAR:ATTAAACTCTTCATTCATCAGT223-229LMFC38F:CTGTAAAACGACGGCCAGTCTCAACGTCCGTACTAACTAR:CTAAGGAATAAAAGGAGAAAA230-240

1.2.4 毛細(xì)管電泳方法

將甲酰胺與分子量內(nèi)標(biāo)按100∶1的體積比混勻后，取9 μL加入上樣板中，再加入1 μL稀釋10倍的PCR產(chǎn)物。然后使用3730XL測(cè)序儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳，利用Genemarker 中的Fragment(Plant)片段分析軟件對(duì)測(cè)序儀得到的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，將各泳道內(nèi)分子量內(nèi)標(biāo)的位置與各樣品峰值的位置做比較分析，得到片段大小。

1.3 數(shù)據(jù)處理

一個(gè)引物為一個(gè)等位基因位點(diǎn)。按照Convert 1.31軟件要求的格式錄入到EXCEL中，然后用Convert 1.31軟件轉(zhuǎn)化成POPGENE軟件所要求格式。使用POPGENE1.32軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)算等位基因數(shù)(A)、觀測(cè)雜合度(Ho) 、期望雜合度(He)和Shannon信息指數(shù)(I) ，采用UPGMA法進(jìn)行聚類分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 SSR標(biāo)記的多態(tài)性分析

從60對(duì)無花果SSR引物中 選出15對(duì)譜帶清晰、多態(tài)性高的引物。利用選出的15對(duì)無花果引物對(duì)30個(gè)無花果品種材料進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過毛細(xì)管電泳檢測(cè)。PIC還是用來衡量某個(gè)基因位點(diǎn)等位變異程度高低的指標(biāo)。試驗(yàn)中15對(duì)SSR引物的擴(kuò)增帶型均清晰穩(wěn)定，多態(tài)性較高且明顯，適合用于無花果SSR 分析。如圖1所示，在30份材料中共檢測(cè)出79個(gè)等位變異，每對(duì)引物檢測(cè)出2～10個(gè)等位變異，平均每個(gè)位點(diǎn)等位基因數(shù)為5.27個(gè)，最高為10(FCUP038-6和 LMFC30)，最低為2(MFC8)。15對(duì)引物PIC值變化范圍在各位點(diǎn)0.332 8～0.875 7，平均為0.5303。其中最高的為0.846 8(FCUP038-6)，最低的為0.310 3 (LMFC37)。所有引物中PIC含量高于0.5的SSR占到60%。15個(gè)位點(diǎn)擴(kuò)增的片段長度在133～326 bp。觀測(cè)雜合度(Ho) 0.166 7～0.866 7，平均為 0.476 8；期望雜合度(He) 0.332 8～0.875 7，平均為0.592 9；各位點(diǎn)的Shannon信息指數(shù)(I)0.604 9～2.127 3，平均為1.136 0。因此，引物FCUP038-6可作為最佳引物用于鑒定無花果的遺傳多樣性，而其他8條引物FCUP044-6、FCUP066-7、FCUP069-6、LMFC28、LMFC30、LMFC38、MFC2、MFC7同時(shí)具備較高的雜合率以及多態(tài)性，可考慮作為備選引物。以上結(jié)果表明所選取的引物多態(tài)性均較高，有很好的鑒別能力，SSR標(biāo)記在參試無花果材料中可反映較豐富的遺傳多樣性信息。

圖1 華麗(A)和布蘭瑞克(B)品種在位點(diǎn)FCUP069-6的電泳圖譜Fig.1 The electrophoretic patterns of FCUP069-6 in the gorgeous (A) and Blin Rick (B) cultivars

2.2 遺傳相似性和聚類分析

經(jīng)過聚類分析30份無花果品種資源在遺傳相似系數(shù)0.77處，可以分別兩個(gè)類群，類群Ⅰ和類群Ⅱ，在類群Ⅰ中，只有3個(gè)無花果品種，分別是華麗、以色列和新疆早黃；其他27個(gè)無花果品種聚為類群Ⅱ。

在類群Ⅱ中，在遺傳相似系數(shù)0.82處又可分為A、B、C三個(gè)亞類，其中A亞類包括布蘭瑞克、白熱那亞、香蕉、紫色波爾多等19個(gè)無花果品種，其中布蘭瑞克和白熱那亞被聚在一起；香蕉、紫色波爾多、加州黑、瑪斯義陶芬、亞當(dāng)、羅伊爾、杜魯?shù)绕贩N被聚在一起，其中香蕉和紫色波爾多，加州黑和瑪斯義陶芬，羅伊爾和杜魯，分別被聚在一起，表現(xiàn)出更緊密的親緣關(guān)系；B1011、波姬紅、白馬賽、D110、美麗亞、金傲芬、A1213、豐產(chǎn)黃、國王、麗莎等品種被聚在一起，其中B1011和波姬紅，D110和美麗亞，國王和麗莎，分別被聚在一起，表現(xiàn)出更緊密的親緣關(guān)系。在B亞類中只有哈代一個(gè)品種。在C亞類中，包括中國紫果、青皮、紫淘芬、格萊斯、日本紫果、白蜜、紫寶等品種，其中青皮和紫淘芬，格萊斯和日本紫果，分別被聚在一起，表現(xiàn)出更緊密的親緣關(guān)系。

表3無花果品種十五對(duì)引物的擴(kuò)增產(chǎn)物及多態(tài)性分析

Table3Polymorphism analysis of the amplified products of 15 primers

SSR引物SSRprimer等位基因數(shù)Allelenumber多態(tài)位點(diǎn)比率Polymorphiclociratio有效雜合度Effectiveheterozygosity觀察雜合度Observedheterozygosity期望雜合度ExpectedheterozygosityShannon信息指數(shù)ShannoninformationindexPICFCUP038-6100.86117.20000.16670.87572.12730.8468FCUP044-640.72393.62170.33330.73621.33040.6726FCUP045-630.51282.05250.36670.52150.76280.3974FCUP066-770.60222.51400.33330.61241.20300.5436FCUP069-640.61942.62770.36670.62991.12210.5611LMFC1740.34281.52160.73330.34860.69230.3206LMFC1980.32721.48640.86670.33280.81490.3195LMFC2730.51172.04780.56670.52030.79530.4105LMFC2860.68223.14690.36670.69381.29480.6230LMFC30100.78114.56850.46670.79441.81860.7565LMFC3740.35221.54370.66670.35820.63880.3103LMFC3850.75284.04490.40000.76551.48510.7125MFC240.66282.96540.33330.67401.23010.6145MFC750.59832.48960.63330.60851.11930.5368MFC820.41441.70760.55170.42170.60490.3285平均5.270.58302.90260.47680.59291.13600.5303

表4遺傳距離與遺傳相似系數(shù)

Table4Genetic distance and genetic similarity coefficient

1234567891011121314151617181920212223242526272829301**0.330.350.440.440.560.310.470.670.580.540.400.520.440.460.590.400.600.680.530.620.620.540.480.570.490.510.670.580.4821.12**0.820.830.350.570.700.650.390.410.680.750.880.630.730.550.480.410.560.160.490.490.540.560.480.360.440.620.490.6731.050.20**0.850.480.600.780.650.520.460.650.630.820.700.730.800.590.360.590.230.620.650.650.700.580.340.520.590.630.7040.820.190.16**0.540.640.800.700.590.580.910.780.940.930.700.670.640.630.650.360.670.640.720.750.880.530.590.700.650.8650.821.050.740.61**0.540.390.780.780.730.670.450.580.470.670.620.540.480.480.680.480.460.640.580.490.630.540.720.560.6460.570.560.520.440.62**0.640.590.560.490.720.860.880.720.690.700.440.490.450.500.750.780.720.530.670.550.310.610.750.7271.170.360.250.220.950.44**0.780.460.450.700.800.850.830.810.830.520.300.650.270.780.830.830.800.570.460.480.720.630.6780.760.430.430.360.250.530.25**0.860.800.720.700.760.670.930.800.540.380.650.440.640.640.750.780.470.700.640.970.610.7290.400.940.660.530.250.590.790.15**0.910.670.570.570.560.660.640.510.470.600.580.560.530.640.600.510.750.780.890.580.67100.550.890.780.550.320.710.800.220.10**0.700.650.500.530.790.600.520.600.630.520.520.490.650.590.500.850.620.810.660.62110.610.390.430.100.400.320.360.320.400.36**0.780.850.750.840.720.710.600.650.460.800.800.830.750.700.740.510.750.800.78120.920.290.460.250.800.160.220.360.560.430.25**0.790.780.840.680.460.510.610.380.730.730.700.700.630.700.440.700.770.73130.660.130.190.060.550.130.160.270.570.690.160.23**0.910.820.760.690.560.660.430.760.720.910.770.880.520.540.750.660.94140.820.470.360.070.760.320.190.400.570.640.290.250.09**0.700.670.640.530.700.290.700.700.780.820.850.510.510.640.650.86150.770.310.310.360.400.370.210.070.410.240.170.170.200.36**0.810.740.450.680.460.750.750.840.820.520.760.540.880.930.75160.520.600.220.400.480.360.190.220.440.510.320.390.270.400.21**0.570.380.680.390.940.960.880.750.540.490.510.720.780.64170.920.740.520.450.610.820.660.610.670.650.350.790.370.450.300.57**0.410.620.400.540.490.710.730.540.460.340.530.600.76180.510.891.010.470.740.711.200.980.760.500.510.680.580.640.800.980.89**0.520.490.440.390.520.420.730.470.390.460.590.52190.390.570.530.420.720.790.420.420.510.460.420.490.420.350.380.390.480.66**0.300.700.680.700.910.560.480.530.730.550.73200.631.811.451.010.390.691.320.830.550.660.780.980.851.230.770.950.920.711.22**0.400.380.500.340.560.500.430.550.520.45210.480.710.470.400.730.290.250.440.590.660.220.320.280.360.280.060.620.820.350.91**1.110.940.780.640.510.390.610.750.67220.480.710.430.440.790.250.190.440.640.710.220.320.320.360.280.040.720.940.390.980.05**0.890.730.590.510.390.640.750.61230.620.610.430.320.440.330.190.290.450.430.190.360.090.250.170.120.350.660.350.690.060.12**0.800.700.650.530.750.700.81240.720.570.350.290.540.640.220.250.510.530.290.350.260.190.200.290.320.860.101.080.250.320.22**0.650.570.450.650.640.90250.560.740.550.130.710.400.560.760.670.690.360.470.130.160.650.610.610.320.580.580.440.530.360.42**0.490.480.500.650.75260.721.021.090.630.470.590.770.360.290.160.300.360.660.670.280.720.770.750.740.690.680.680.430.570.72**0.510.800.670.60270.670.820.660.530.621.190.730.440.250.470.670.820.620.670.610.671.070.940.640.850.940.940.640.790.730.68**0.840.400.44280.400.480.520.360.320.500.320.030.110.210.280.360.280.450.130.320.630.780.310.600.500.450.290.430.690.220.18**0.650.66290.540.710.460.420.580.280.460.500.550.420.220.260.420.420.080.250.520.530.610.650.280.280.350.450.420.390.910.43**0.55300.730.390.360.150.440.330.400.320.410.470.250.320.060.150.280.440.280.660.320.790.410.490.220.100.290.510.810.410.59**

左上角是遺傳相似系數(shù)，右下角是遺傳距離。

The upper left is the genetic similarity coefficient， and the lower right is the genetic distance.

3 討論

SSR遺傳標(biāo)記具有試驗(yàn)操作簡(jiǎn)單、結(jié)果穩(wěn)定、重復(fù)性好、共顯性穩(wěn)等特點(diǎn)，成為研究植物遺傳資源多樣性的重要工具[13]。研究從60多對(duì)無花果SSR引物中篩選出15對(duì)穩(wěn)定性好、多態(tài)性高的引物，采用引物熒光標(biāo)記技術(shù)和毛細(xì)管電泳檢測(cè)技術(shù)，對(duì)近年來搜集的30份無花果品種資源開展了遺傳多樣性分析。試驗(yàn)結(jié)果表明，所搜集的無花果品種資源具有比較豐富的遺傳多樣性，這可能與我國無花果品種來源廣泛，是經(jīng)過長期從不同國家不斷引進(jìn)的結(jié)果有關(guān)。此外，無花果品種資源在果實(shí)顏色、果實(shí)大小、成熟期、開花結(jié)果習(xí)性以及抗逆性等形態(tài)學(xué)和生物學(xué)方面表現(xiàn)出非常豐富的多樣性，這與本試驗(yàn)中SSR標(biāo)記的豐富多樣性是一致的。

圖2 基于SSR標(biāo)記的30份無花果品種聚類圖Fig.2 Cluster diagram of 30 Ficus species based on SSR markers

我國不是無花果的原產(chǎn)地，目前我國栽培的無花果品種資源多數(shù)是從國外引進(jìn)的，少數(shù)是近年自主培育的新品種。無花果在長期的實(shí)生繁殖和無性繁殖過程中，會(huì)積累多種多樣的表型突變，這給品種的分類鑒定帶來更大的困難。我國多依據(jù)無花果的葉片形狀和果皮顏色、果形大小等表型進(jìn)行分類，經(jīng)常會(huì)發(fā)生品種資源的混淆和混亂，導(dǎo)致同物異名或同名異物。通過單純依靠形態(tài)學(xué)進(jìn)行品種鑒定和分類很可能是不可靠的，例如，我國生產(chǎn)上廣泛栽培的瑪斯義陶芬和波姬紅，葉型和果實(shí)形狀都非常相似，常常在生產(chǎn)上被混淆[14-16]；本研究的結(jié)果證實(shí)了這兩個(gè)品種親緣關(guān)系并不十分密切。在本研究中，通過SSR聚類分析的結(jié)果顯示，青皮和紫淘芬被緊密地聚在一起，表現(xiàn)出非常近的親緣關(guān)系。但兩者果實(shí)顏色、大小等形態(tài)學(xué)差異較大，青皮果實(shí)大小中等，為綠色，而紫淘芬果實(shí)紫色、較大。而中國紫果、日本紫果和紫色波爾多等紫色品種以及新疆早黃和豐產(chǎn)黃之間并未顯示很近的親緣關(guān)系。無花果品種紫淘芬和青皮之間的分化很可能是同一品種由于發(fā)生一系列芽變積累的結(jié)果，關(guān)于兩者之間的親緣演化關(guān)系還有待進(jìn)一步研究證實(shí)[17-18]，而某些形態(tài)學(xué)相近的品種其親緣關(guān)系可能很遠(yuǎn)。在本試驗(yàn)中，來源不同的無花果品種的聚類是混雜的，說明無花果品種資源在各國的長期相互引種和選種過程，導(dǎo)致品種系譜關(guān)系十分混亂。本研究初步解析了部分無花果資源間的親緣關(guān)系，為無花果育種工作提供了初步的理論依據(jù)，對(duì)于選育適用于水果市場(chǎng)的鮮食品種，可優(yōu)先選擇果皮同為紫色、紅色、黑棕色的基因型相似度較高的品種作為親本；對(duì)于選育適用于深加工的品種，可優(yōu)先選擇22號(hào)一族的品種作為親本。今后還需進(jìn)一步利用分子標(biāo)記技術(shù)并結(jié)合形態(tài)學(xué)和生物學(xué)特性來厘清無花果品種資源的系譜關(guān)系。

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(責(zé)任編輯張 韻)

Geneticdiversityanalysisof30figvarietiesusingcapillaryelectrophoresisdetectionwithfluorescentSSRmarkers

GUO Zhengbing1， HAN Baiming1， GUO Qiang2

(1.JiangsuPolytechnicalCollegeofAgricultureandForestry，Jurong212400，China; 2.JurongTigerhillFigProfessionalCooperatives，Jurong212400，China)

In order to analyze the genetic diversity of the fig species collected from home and abroad， the capillary electrophoresis detection with fluorescent SSR markers method was used to establish the fingerprint identification platform of 30 fig varieties. Analysis of 30 fig varieties was performed by using 15 pairs of SSR primers. The results showed that a total of 79 alleles were detected， the PIC value of 15 loci was between 0.332 8 and 0.875 7 with an average of 0.530 3 and the Shannon information index (I) of each point was between 0.604 9 to 2.127 3 with an average of 1.136 0. The genetic distance between the 30 varieties was 0.025 4-1.123 4. Among them， the heterozygosity and PIC value of primer FCUP038-6 were up to 0.846 8 and 0.861 1， respectively， which could be considered as the core marker of the purity of the hybrid test. Thirty fig varieties were rich in genetic diversity and were divided into two groups with different origins. There was no significant correlation between the genetic relationships and the origins of the varieties， as well as the phenotype feature.

FicuscaricaL; genetic diversity; SSR

S663.3

：A

：1004-1524(2017)09-1482-07

郭正兵，韓柏明，郭強(qiáng). SSR熒光標(biāo)記毛細(xì)管電泳法分析30份無花果品種的遺傳多樣性[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2017，29(9)： 1482-1488.

10.3969/j.issn.1004-1524.2017.09.09

2017-04-20

江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院院級(jí)項(xiàng)目(2015KJ030)；江蘇高校品牌專業(yè)建設(shè)工程資助項(xiàng)目(PPZY2015B173)

郭正兵(1976—)，男，江蘇高郵人，碩士，副教授，主要從事葡萄、草莓、無花果等果樹栽培生理、品源親緣鑒定等研究。E-mail: 260626813@qq.com