于廣秋

（遼寧省建昌縣畜牧獸醫(yī)局125300）

羊布氏桿菌病陰道免疫法推廣

于廣秋

（遼寧省建昌縣畜牧獸醫(yī)局125300）

采用陰道免疫法與常規(guī)免疫法進(jìn)行免疫效果對(duì)比試驗(yàn)，結(jié)果顯示，新型免疫法免疫效果明顯高于常規(guī)免疫法，且無(wú)不良反應(yīng)，通過(guò)區(qū)域性推廣，產(chǎn)生很好的保護(hù)率，值得進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

羊布氏桿菌;陰道免疫法;試驗(yàn);推廣

布氏桿菌病是人畜共患病,近年來(lái)發(fā)病率較高,疫苗免疫是控制該病的重要途徑,但由于常規(guī)免疫途徑存在免疫效果不確實(shí)等問(wèn)題,特需探討一種操作簡(jiǎn)便對(duì)人畜安全,免疫效果確實(shí)的免疫方法。2014年開(kāi)始,筆者帶領(lǐng)技術(shù)團(tuán)隊(duì)通過(guò)技術(shù)創(chuàng)新,研究出了安全高效的免疫方法--陰道免疫法,并用兩年時(shí)間推廣到全市,快速控制了羊群布氏桿菌病的傳播,取得很好的效果。

1 項(xiàng)目設(shè)計(jì)理念

傳統(tǒng)免疫法主要是口服和注射法,布氏桿菌病在羊體內(nèi)主要侵害生殖系統(tǒng),在生殖道容易定植,因此,嘗試陰道免疫法對(duì)母羊進(jìn)行免疫,并與其他常規(guī)免疫法作對(duì)照,評(píng)價(jià)免疫效果和安全性。

2 試驗(yàn)方法

選擇未做過(guò)布病免疫的羊群,要求試驗(yàn)羊健康,飼養(yǎng)環(huán)境一致。首先對(duì)所有羊采血編號(hào),用平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)布病血凝試驗(yàn)均為陰性者方可作為試驗(yàn)羊。將羊群分成A、B兩群,每群均有不同產(chǎn)期的孕羊,A群為常規(guī)劑量免疫群、B群為高劑量免疫群,將每群各分5組,分別采用公羊頸部肌肉注射法、母羊口腔噴注法、陰道噴注法、全群拌料法、全群飲水免疫法。A群各組采用的劑量是常規(guī)量。B組采用的劑量是A組的倍量。抓羊時(shí)盡量采用擋板圍靠法,動(dòng)作要輕,防止機(jī)械性流產(chǎn)。免疫后正常飼喂,注意觀察,有過(guò)敏者立即注射腎上腺素,有流產(chǎn)跡象時(shí)注射黃體酮。免疫后7d和14d、 21d、 60d、 90d、 180d進(jìn)行采血,做平板凝集試驗(yàn),評(píng)價(jià)體液免疫效果。

3 所用材料

3.1 布氏桿菌活疫苗（S2株）

中牧實(shí)業(yè)股份有限公司蘭州生物藥廠生產(chǎn),生產(chǎn)批號(hào)：1401003；有效期：2015.1；以羊口服劑量規(guī)格80頭份/瓶,每瓶含活菌不少于80×100cfu。

3.2 消毒藥

百盛30,北京中農(nóng)奧美生物制藥有限公司生產(chǎn)。

3.3 陰道免疫專用噴注器

自行研制。

3.4 平板凝集試驗(yàn)診斷液

虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原,檢測(cè)方法按照GB/T18646-2002進(jìn)行。

3.5 基礎(chǔ)設(shè)備

防護(hù)服、手套、口罩、鞋套

4 篩選試驗(yàn)羊

選定養(yǎng)羊戶10戶,存欄羊569只,全部采血做平板凝集試驗(yàn),全陰性戶作為免疫試驗(yàn)。

5 試驗(yàn)結(jié)果

5.1 對(duì)比試驗(yàn)

結(jié)果見(jiàn)附表。

5.2 結(jié)果顯示

免疫后7d,注射法和陰道噴注法陽(yáng)轉(zhuǎn)率分別為90%和80%,倍量注射法的比例更高達(dá)95.8%,但注苗后的反應(yīng)較大,口腔噴注、飲水、拌料法都沒(méi)有產(chǎn)生抗體。21d后注射法和陰道噴注法陽(yáng)轉(zhuǎn)率達(dá)到近90%,口腔噴注和拌料法達(dá)到60%,倍量口腔噴注法和飲水法達(dá)到50%,說(shuō)明注射法和陰道噴注法產(chǎn)生抗體快,陽(yáng)轉(zhuǎn)率高,抗體水平高,倍量注射法雖然陽(yáng)轉(zhuǎn)率高達(dá)100%,但是疫苗反應(yīng)較重,沒(méi)有推廣意義,口服法不論哪個(gè)途徑陽(yáng)轉(zhuǎn)率出現(xiàn)的較晚,抗體水平低,3周后達(dá)到50～60%,各種口服方法基本上相近。

5.3 小尾寒羊試驗(yàn)

疫苗說(shuō)明書(shū)上說(shuō)明注射法不能應(yīng)用于小尾寒羊,但沒(méi)有理由說(shuō)明為什么不能,筆者特意選擇一批小尾寒羊,公羊8只采用1/2量注射法,母羊213只采用1/2量陰道噴注法,做苗后無(wú)任何異常反應(yīng),未出現(xiàn)流產(chǎn)現(xiàn)象。21d后采血做抗體檢測(cè),公羊陽(yáng)轉(zhuǎn)率100%,母羊陽(yáng)轉(zhuǎn)率80%。

5.4 孕羊注射法安全性試驗(yàn)

推廣過(guò)程中部分防疫員應(yīng)用注射法給妊娠中后期母羊注射,導(dǎo)致流產(chǎn)率100%。

5.5 抗體滴度試驗(yàn)

通過(guò)省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心配合繼續(xù)做試管凝集試驗(yàn)和環(huán)境散菌檢測(cè)試驗(yàn),試驗(yàn)結(jié)果表明,陰道免疫法的抗體水平比口服法明顯高。

6 結(jié)果分析與討論

6.1 試驗(yàn)結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明,母羊自然感染條件下,對(duì)陰道黏膜更敏感,而且疫苗免疫最佳途徑就是接近自然感染的途徑,因此,對(duì)孕羊最佳的免疫途徑是陰道噴注法。公羊和空懷母羊或小羊可以采取注射法。效果確實(shí)無(wú)不良反應(yīng)。飲水法和拌料法都能產(chǎn)生一定的抗體,但陽(yáng)轉(zhuǎn)率不高,且公羊明顯高于母羊,說(shuō)明搶料和水要多些,有劑量不均的因素?？谇粐娮⒎▌┝侩m準(zhǔn)但陽(yáng)轉(zhuǎn)率不高,說(shuō)明疫苗菌株進(jìn)入消化道后受消化道溶菌酶或胃酸等屏障的殺滅較多,產(chǎn)生抗體變少,免疫效果不理想,陰道噴注法和口腔噴注法操作方法和速度近似,幾秒內(nèi)就能完成操作,方便高效,建議普遍采納母羊陰道噴注法。

附表 不同免疫法免疫效果對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果（單位：只、%）

6.2 小尾寒羊和其他羊免疫無(wú)差異

小尾寒羊應(yīng)用公羊注射,母羊陰道免疫法效果顯著,無(wú)不良反應(yīng),不要受疫苗說(shuō)明書(shū)限制。

6.3 陰道免疫法需按專用器具和規(guī)程方可靠

陰道免疫法應(yīng)用我們開(kāi)發(fā)的專用免疫器具（已獲專利）和特有的操作規(guī)程方可安全有效。

參與試驗(yàn)人員：鄭文金、林懷明、盛曉輝、張國(guó)成、羅洪明、韓維群、馬成立、安麗華。

于廣秋（1963-），男，漢族，大學(xué)本科，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病防制工作。