HPLC法測定雪梨止咳糖漿中苦杏仁苷的含量

秦宇芬 陳宗良 施麗霞

1 浙江省湖州市中醫(yī)院 浙江 湖州 313000 2 浙江省金華市食品藥品檢驗所 浙江 金華 321000

中藥研究

HPLC法測定雪梨止咳糖漿中苦杏仁苷的含量

秦宇芬1陳宗良2施麗霞1

1 浙江省湖州市中醫(yī)院 浙江 湖州 313000 2 浙江省金華市食品藥品檢驗所 浙江 金華 321000

目的：建立雪梨止咳糖漿中苦杏仁苷的含量測定方法。方法：采用Zorbax SB-C18（250×4.6，5μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）；檢測波長為207nm；柱溫35℃。結(jié)果：苦杏仁苷進樣量在0.1536～3.072μg范圍內(nèi)呈良好的線性關系（r=0.9996），樣品平均回收率為98.36%，RSD=0.91%。結(jié)論：此方法操作簡便，準確可靠，可用于雪梨止咳糖漿中苦杏仁苷的含量控制。

HPLC法 雪梨止咳糖漿 苦杏仁苷 含量測定

雪梨止咳糖漿收載于《衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十五冊》，由桔便、苦杏仁、前胡、紫菀等7味中藥組成，具有潤肺、止咳、化痰的作用，用于支氣管炎、咳嗽、咳痰等，臨床上用于氣逆咳嗽、肺虛久咳等癥，方中苦杏仁為止咳平喘要藥，能宣發(fā)肺氣、止咳平喘[1]。原標準中只有前胡與桔梗的薄層色譜鑒別，文獻只有關于紫菀酮含量的報道[2]，苦杏仁中指標成分苦杏仁苷的含量測定未見報道。本文建立了雪梨止咳糖漿中苦杏仁苷的含量測定方法，為更好地控制雪梨止咳糖漿的質(zhì)量提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：Agi lent 1200高效液相色譜儀（帶DAD檢測器），梅特勒XS105DU分析天平，密里博DQ5超純水制水機。

1.2 試藥：苦杏仁苷對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號為110820-201004，含量按93.6%計算）；雪梨止咳糖漿（標示為湖北武當金鼎制藥有限公司生產(chǎn)）。水為超純水，甲醇為色譜純（默克公司），其余為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：色譜柱為Zorbax SB-C18（250×4.6，5μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）；檢測波長為 207nm[3]；柱溫 35℃。流速 1.0ml/min，理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計算大于5000。

2.2 對照品溶液的制備：精密稱取苦杏仁苷對照品0.01641g，置100ml量瓶中，加50%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備：取本品混勻，精密量取20ml，置具塞錐形瓶中，加甲醇約30ml，超聲處理30min，放冷，濾過，用甲醇20ml分次洗滌濾器，合并濾液，蒸干，殘渣加50%甲醇溶液溶解，移至10ml量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.4 線性關系考察：精密量取上述對照品溶液1、2、5、10、15、20μl，分別注入液相色譜儀（每份重復進樣2次），按上述色譜條件測得峰面積。以峰面積為縱坐標，以苦杏仁苷對照品進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：Y=963.9X－10.78（r=0.9996），表明進樣地量在0.1536～3.072μg范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

2.5 精密度：以重復性試驗考察，分別量取同一供試品6份，按“2．3”項下方法制備并測定含量，結(jié)果RSD=2.02%；再分別精密吸取對照品貯備液1μl重復進樣5次，結(jié)果其峰面積RSD=0.77%，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性：取供試品溶液于制備后2、4、8、16、48h分別進樣5μl，峰面積值的RSD=1.14%，表明樣品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率：精密量取已知苦杏仁苷含量（0.044mg/ml）的供試品6份，每份10ml，置具塞錐形瓶中，分別精密加入對照品溶液 1、1、3、3、5、5ml，加甲醇約30ml，超聲處理30min，放冷，濾過，用甲醇20ml分次洗滌濾器，合并濾液，蒸干，殘渣加50%甲醇溶液溶解，移至10ml量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。按上述色譜條件測定含量，計算樣品加樣回收率（結(jié)果見表1）。平均加樣回收率為98.36%，RSD=0.91%。

2.8 陰性空白試驗：取處方中缺苦杏仁的另外藥味按制法制成陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液，并按上述色譜條件測定。結(jié)果在苦杏仁苷對照品峰相應的位置未見其它的干擾峰（見圖1）。

圖1 雪梨止咳糖漿HPLC色譜圖

表1 回收率試驗結(jié)果

2.9 樣品的含量測定：3批樣品按“2．3”項下方法和上述色譜條件，以峰面積計算苦杏仁苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品中苦杏仁苷的含量測定結(jié)果（n=4）

3 討論

3.1 檢測波長的選擇：用DAD檢測器采集苦杏仁苷對照品溶液在200～400nm波長范圍數(shù)據(jù)，光譜顯示在268、258nm波長處有最大吸收，與《植物藥有效成分手冊》[4]中記載的一致，但吸收較弱。文獻報道有210、225、215nm為檢測波長測定苦杏仁苷[5-6]，參照藥典苦杏仁和桃仁項下的檢測波長[3]，實驗采用207nm，結(jié)果顯示供試品溶液在此波長下苦杏仁苷峰響應值最佳，干擾峰最少，得到較大的峰面積，故選此波長為檢測波長。

3.2 流動相的選擇：曾選用甲醇－水系統(tǒng)、乙腈－水系統(tǒng)及乙腈－0.1%磷酸溶液系統(tǒng)的不同比例進行分離比較。由于采用207nm檢測，小于甲醇的截止吸收波長，所以甲醇－水系統(tǒng)出現(xiàn)基線噪聲偏大、雜峰較多等現(xiàn)象。參照藥典苦杏仁項下乙腈—0.1%磷酸溶液，因為供試品溶液干擾峰較少，比例改為（14∶86）為作為流動相，苦杏仁苷分離效果良好，可得到較對稱的峰形，且保留時間適中，故采用本流動相。

3.3 提取方法的選擇：根據(jù)苦杏仁苷極溶于沸水，溶于水、乙醇，幾乎不溶于乙醚的特征，比較了乙醚脫脂前后的效果，結(jié)果幾無影響，與制備過程中苦杏仁等用70%乙醇浸漬提取有關，脂溶性成分較少；比較了不同濃度甲醇提取效果，由于糖漿劑含糖量高，故首先加甲醇使其含醇量達60%以上，超聲提取，過濾除去析出的糖等成分，最后用50%甲醇溶解樣品效果最佳，無溶劑效應產(chǎn)生?？疾炝顺曁崛r間以30min為宜。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典臨床用藥須知（中藥飲片卷）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2011：879.

[2]韓建國，郭迎霞，宋俊麗，等.雪梨止咳糖漿質(zhì)量標準研究[J].中國藥房，2008，19（12）：931-933.

[3]國家藥典委員會.中國藥典一部[M].北京：化學工業(yè)出版社，2010：187，260.

[4]國家醫(yī)藥管理局中草藥情報中心站.植物藥有效成分手冊[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1986：50.

[5]蘇廣珠，路向陽.HPLC法測銀拗合劑中苦杏仁苷的含量[J].中國現(xiàn)代藥物應用，2009，3（7）：27-28.

[6]覃麗酈，熊佐章.RP-HPLC法測定復方百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量[J].中國藥事，2009，23（6）：573-574.

2017-03-09