金絲桃苷對(duì)誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞成骨分化的影響*

謝躍鵬 周志虹 張孝靜

浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院 浙江 杭州 310005

金絲桃苷對(duì)誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞成骨分化的影響*

謝躍鵬 周志虹#張孝靜

浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院 浙江 杭州 310005

金絲桃苷 骨肉瘤 成骨分化

骨肉瘤是一種惡性結(jié)締組織腫瘤，據(jù)統(tǒng)計(jì)其發(fā)病率在原發(fā)性惡性骨腫瘤中占據(jù)首位。該腫瘤惡性程度甚高，預(yù)后極差，特點(diǎn)是肺部轉(zhuǎn)移早[1]。金絲桃苷（Hyperoside）又名槲皮素[2]，屬于黃酮醇苷類化合物，廣泛存在于各種植物體內(nèi)。研究發(fā)現(xiàn)，金絲桃苷能夠抑制多種腫瘤細(xì)胞。本研究進(jìn)一步探討金絲桃苷在抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖后對(duì)骨肉瘤誘導(dǎo)分化的影響。

1 資料與方法

1.1 細(xì)胞和試劑：人骨肉瘤U2OS和MG63細(xì)胞株購(gòu)自上海生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所。細(xì)胞株在RPMI-1640或DMEM培養(yǎng)基中加10%加熱去活化的胎牛血清，并在5%CO2、37℃環(huán)境下培養(yǎng)。同時(shí)加入青霉素（100U/ml）和鏈霉素（100U/ml）。金絲桃苷從澤朗生物科技有限公司購(gòu)買，并且溶解在二甲基亞砜（DMSO）中。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法和觀察指標(biāo)：采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，將C50濃度金絲桃苷分別加入U(xiǎn)2OS和MG63兩組細(xì)胞中，采用蛋白質(zhì)印記（Western blotting）法測(cè)定骨橋蛋白、RUNX2蛋白在兩組細(xì)胞培養(yǎng)第3、5、7天的表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS16.0軟件錄入數(shù)據(jù)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組細(xì)胞中骨橋蛋白表達(dá)水平：加入C50濃度的金絲桃苷后，兩組細(xì)胞在開始和培養(yǎng)第3、5、7天骨橋蛋白表達(dá)均有明顯增長(zhǎng)，且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，U2OS組表達(dá)量呈上升趨勢(shì)，而MG63組在第5天之后表達(dá)量達(dá)到峰值并出現(xiàn)下降趨勢(shì)。兩者相比較，U2OS組中骨橋蛋白增長(zhǎng)趨勢(shì)明顯優(yōu)于MG63組（P＜0.05）。見圖1。

2.2 兩組細(xì)胞中RUNX2蛋白表達(dá)水平：加入金絲桃苷后，兩組在上述4個(gè)時(shí)段RUNX2蛋白表達(dá)均有明顯增長(zhǎng)，U2OS組在第7天時(shí)達(dá)到峰值，MG63組在第5天時(shí)已達(dá)到峰值并到第7天時(shí)維持穩(wěn)定水平。兩組比較，RUNX2蛋白最終表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖2。

圖1 兩組骨橋蛋白表達(dá)水平

圖2 兩組RUNX2蛋白表達(dá)水平

3 討論

低分化是骨肉瘤最主要的特征之一，針對(duì)這一特性，基于細(xì)胞非毒性誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞成骨分化的途徑可能是一個(gè)治療的新方向。骨橋蛋白存在于正常體液以及軟骨內(nèi)化骨、膜內(nèi)化骨區(qū)域。有研究表明，成骨細(xì)胞的分化和礦化組織的重建可被骨橋蛋白誘導(dǎo)和促進(jìn)[3]。Enomoto等[4]發(fā)現(xiàn)RUNX2缺陷的小鼠膜內(nèi)和軟骨內(nèi)骨化成骨均不能發(fā)生，證實(shí)RUNX2是成骨細(xì)胞分化所必需的因子。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，金絲桃苷能夠在多層次調(diào)控骨肉瘤增殖分化的信號(hào)調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮作用，可能是通過顯著激活骨橋蛋白和RUNX2蛋白的表達(dá)，從而誘導(dǎo)骨肉瘤向成骨方向分化。

[1]Tang N,Song W X,Luo J Y，et al.Osteosarcoma development and stem celldifferentiation[J].Cl in Or thop Relat Res,2008,466(9)：2114-2130.

[2]Li Z L,Hu J,Li Y L,et al.The effect of hyperoside on the functional recovery of the ischemic/reper fused isolated rat hear t:potential involvement of the ext racel lular signal-regulated kinase 1/2 signaling pathway[J].Free Radic Biol Med,2013，57（4）：132-140.

[3]王立平,黨耕町.骨橋蛋白在骨愈合過程中的基因表達(dá)[J].北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1998,30(4)：355-357.

[4]Enomoto H,Furuichit T,Zanma A,et al.Runx2 def iciency in chondrocytes causes adipogenic changes in vit ro[J].J CellSci,2004,117(3)：417-425.

2017-06-28

浙江省公益性技術(shù)應(yīng)用研究計(jì)劃建議項(xiàng)目金絲桃苷抗骨肉瘤細(xì)胞增殖的作用及其機(jī)制研究，編號(hào)：2014C33218

# 通訊作者：周志虹，E-mai l：421522908@qq.com