梔子苷鼻用溫敏凝膠制劑的制備及藥代動力學(xué)研究

陳曉燕+姜雯雯

【中圖分類號】R944 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】2095-6851（2017）10--01

梔子苷（Geniposide）為中藥梔子果實(shí)的主要指標(biāo)成分之一，近期研究表明[1]，梔子苷對腦缺血級聯(lián)反應(yīng)過程具有多個藥物靶點(diǎn)作用，能較好的改善腦缺血損傷。鼻腔給藥能有效使得鼻-腦傳遞藥物得以實(shí)現(xiàn)，故治療改善腦缺血損傷是一種優(yōu)選的給藥方式。但一般的藥物溶液鼻腔給藥具有流失率大，滯留時間短，且容易刺激到氣管等缺點(diǎn)，一般臨床上很難接受。溫敏凝膠制劑具有鼻腔黏附性能延長其在鼻豁膜的滯留時間，大大減少藥液流失，故能提高生物利用率，減少藥液對咽部的刺激，提高患者的依從性。故本文將梔子苷為模型藥物制備成溫敏凝膠制劑，鼻腔給藥后對其體內(nèi)的血藥濃度進(jìn)行監(jiān)測，考察其生物利用度。

1 儀器與材料

1.1 藥品、試劑梔子苷（四川雙子葉生物科技有限公司，含量≧95%）；梔子苷對照品：中國藥品生物制品檢定所（批號110749-201512）；乙腈（色譜純，德國默克集團(tuán)公司）；泊洛沙姆407（BASF公司，NO.00860）；P188（德國BASF公司）；尼泊金酯（純度99%）；其余試劑（分析純，市售）；雙蒸水（自制）

1.2 儀器PHYSICAMCR101流變儀（奧地利安東帕有限公司）；Agilent1200高效液相色譜儀（包括G1322A脫氣器、G1310A四元泵、G1316A柱溫箱、G1321AFLD檢測器、Agilent–Chemistry工作站，安捷倫科技有限公司）；TSK-GEL，ODS-100S色譜柱（4.6mm×150mm，日本-株式會社）；SIGMA3-18K型高速冷凍離心機(jī)（廈門精藝興業(yè)科技有限公司）；BT–2000氮?dú)獯蹈蓛x（北京八方世紀(jì)科技有限公司）；XW-80A微型旋渦混合儀（上海滬西分析儀器廠）；生物利用度研究數(shù)據(jù)處理通用程序DAS2.0。

1.3 動物 雌性SD大鼠10只，體重（200±10）g，由江西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號：SCXK（贛）2005-0001，實(shí)驗(yàn)期間飼以固體飼料，自由飲水。實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水。

2 方法與結(jié)果

2.1 梔子苷溫敏凝膠的制備

將處方量的梔子苷、Nacl溶于蒸餾水中，用磁力攪拌器攪拌并加入適量的P407及P188，使其均勻分散，放置24小時，使凝膠充分溶脹，即得。

2.2 膠凝溫度的測定

鼻用熱敏凝膠是一種在室溫下液體，而接觸鼻腔膜后能產(chǎn)生膠凝變化的制劑。鼻腔內(nèi)溫度為32-33℃，故制劑的膠凝溫度應(yīng)選擇在33℃以下。

測定方法：取凝膠樣品溶液1mL置流變儀樣品臺上，平臺起始溫度設(shè)置為10℃，再以1℃·min-1的速率緩慢升溫至40℃，每半分鐘測量一次粘度。以粘度的改變來監(jiān)測其膠凝及膠融溫度。

2.3 處方設(shè)計(jì)

2.3.1 處方中P407濃度對膠凝相變溫度的影響

有研究表明[2]當(dāng)泊洛沙姆407的濃度高于16%時能可逆地形成形成澄明的水晶狀凝膠，其膠凝溫度隨P407濃度增大而降低。故實(shí)驗(yàn)中設(shè)定14%、16%、18%、20%的P407，以相變溫度為指標(biāo)，考察其對膠凝溫度影響。其結(jié)果見圖1：

由圖1可知P407為14%時基本成不了凝膠，16%時其膠凝溫度為（28.5±0.1）℃，16%以上時隨著P407濃度的增大其膠凝溫度依次減小，故選用P407濃度為16%時最優(yōu)。

2.3.2 不同濃度梔子苷與膠凝溫度的關(guān)系

藥物的含量有可能會影響其膠凝溫度，故設(shè)定濃度為0%、1.6%、3.2%的梔子苷，以膠凝溫度為指標(biāo)，考察其不同濃度對16%P407膠凝溫度影響。結(jié)果梔子苷的加入對制劑的膠凝溫度并無影響，見圖2。

2.3.2 P188對制劑膠凝溫度的影響

一定濃度的P188加入到P407溫敏凝膠中對膠凝溫度具有一定的調(diào)節(jié)作用，本研究考察了P188濃度對16%P407的影響，結(jié)果P188濃度為0%，2.5%，5%時，膠凝溫度分別為（25.3±0.2）℃ ，（30.7±0.1）℃，（35.5±0.3）℃ 。結(jié)果表明，P188可以使膠凝溫度升高，隨著P188濃度的增加同一濃度P407下膠凝溫度升高，最佳用量為2.5%。見圖3。

2.4 溫敏凝膠的流變學(xué)評價

2.4.1 P407濃度的影響

P407濃度低于10%的稀溶液不能表現(xiàn)出豁度的明顯變化，呈現(xiàn)牛頓流體狀態(tài)，15%P407溶液在20℃以上黏度會發(fā)生輕微的增加[3]。本研究中發(fā)現(xiàn)P407濃度大于16%（w/w）時，在某溫度黏度會有明顯的增加，也就存在一個黏度突變的溫度，本文中定義為凝膠溶液的黏度突變點(diǎn)，加有0.9%的NaCl的P407濃度分別為16%、18%、20%黏度突變點(diǎn)分別為28℃、24℃、22℃。14%時，凝膠基本沒形成，故黏度也沒太大改變，見圖4。

2.4.2 藥物的影響

取0%、1.6%、3.2%的梔子苷，觀察其對0.9NaCl+16%P407凝膠突變溫度的影響，結(jié)果顯示，隨著梔子苷藥物濃度的增加，其對凝膠溶液的黏度突變點(diǎn)無影響，見圖5。

3 初步藥動學(xué)實(shí)驗(yàn)

3.1 色譜條件的選擇

按2015年版《中國藥典》中梔子藥材的梔子苷含量測定方法[4]， 色譜柱：TSK-GEL，ODS-100S（4.6 mm×150mm，5μm），流動相：乙腈-水（15∶85），流速：1.0 mL·min-1，檢測波長：238 nm，柱溫：25℃，進(jìn)樣量：20μL。

3.2 對照品溶液的制備

精密稱取梔子苷對照品1.29mg，用甲醇溶解并定容至50mL，制成25.8μg·mL-1的對照品貯備溶液，備用。endprint

3.3 血漿樣品的預(yù)處理

經(jīng)眼眶取血0.5mL于肝素化的試管中，輕輕混勻，4000 r·min-1離心15min，分離血漿200?L，加入800?L的乙腈（溶液）沉淀蛋白，漩渦混勻，4000 r·min-1離心15min，吸取上清液，40℃水浴通氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?00μL甲醇溶解，18000r·min-1離心15min，吸取上清液進(jìn)樣檢測。

3.4 給藥及采血方法

選擇200±10g♀大鼠10只，分兩組，禁食12h，分別鼻腔給予梔子苷溶液（8mg·kg-1）及溫敏凝膠制劑（2 mg·kg-1）。梔子苷溶液組給藥后于5，15，30，45，60，90，120，180，240，360，480，600min后取血；制劑組給藥后于5，15，30，45，60，90，120，180，240，360，480，600min后取血。余按上述血漿樣品預(yù)處理方法處理。檢測其藥物濃度。

3.5 藥物動力學(xué)數(shù)據(jù)分析

不同時間點(diǎn)的血藥濃度，經(jīng)DAS統(tǒng)計(jì)擬合后，以AIC和R判斷房室模型和選擇參數(shù)，兩者都為二室模型，藥代動力學(xué)參數(shù)見下表1：

根據(jù)F制劑相對溶液=AUC制劑*8/AUC溶液*2= 5.231

由結(jié)果可得溫敏凝膠制劑具有明顯的緩釋作用，t1/2延長了186.45min，其相對生物利用度為5.231。

4 討論

對于鼻腔給藥方式預(yù)防或治療腦部疾病的研究越來越多，經(jīng)鼻給藥后藥物吸收快，同時可以避免肝臟首過效應(yīng)，故是一個新型的給藥方式。但由于鼻腔內(nèi)部的結(jié)構(gòu)，具體異物清除作用，一般藥液滴入鼻腔后滯留時間會很短，且藥物容易流失，從而藥物的吸收及療效會有很大的影響。溫敏凝膠是一種高度的三維網(wǎng)絡(luò)親水性結(jié)構(gòu)，其組織相容性良好，與鼻粘膜親和力強(qiáng)、能吸附于鼻腔膜上，延長滯留時間，且在一定溫度下能實(shí)現(xiàn)溶液—凝膠的轉(zhuǎn)變，故在鼻腔給藥制劑上應(yīng)用非常廣泛。

本文以泊洛沙姆407（P407）為基質(zhì)，加入適量的防腐劑及P188，以凝膠溫度及凝膠的流變學(xué)評價為考察指標(biāo)，篩選出最優(yōu)處方為：梔子苷（主藥）2g；泊洛沙姆407（凝膠基質(zhì)）16g；泊洛沙姆188（膠凝溫度調(diào)節(jié)）2.5g；尼泊金酯（抑菌劑）2g；氯化鈉（調(diào)等滲并促釋放）0.9g；加水至全量使成100g。同時對其藥代動力學(xué)進(jìn)行評價，在藥代動力學(xué)劑量的選擇上，根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)摸索，藥液滴鼻給藥8mg·kg-1能夠達(dá)到藥效濃度而溫敏凝膠制劑滴鼻給藥2 mg·kg-1就也能夠達(dá)到藥效濃度，考慮到溫敏凝膠制劑可能有提高生物利用度，故先采取小劑量濃度進(jìn)行制劑的制備，并對其藥代學(xué)與溶液的進(jìn)行初步對比。從藥代動力學(xué)實(shí)驗(yàn)證明，梔子苷溫敏凝膠劑型在體內(nèi)具有明顯的緩釋作用，與梔子苷溶液體內(nèi)吸收代謝相比其t1/2明顯延長，AUC值明顯升高，延長了體循環(huán)時間，說明凝膠制劑具有一定的緩釋作用，能夠延長其藥效。

參考文獻(xiàn)

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