馬 瑜，申堅定，宋君鋒，馬琳靜，蘆春艷，王栓成，王滿盈

（1.南陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，河南 南陽 473083；2.新野縣農(nóng)業(yè)局，河南 新野 473550；3.南陽國家農(nóng)業(yè)科技園區(qū)，河南 南陽 473000；4.西峽縣食用菌辦公室，河南 西峽 474550）

羊肚菌不同栽培品種間拮抗試驗反應(yīng)

馬 瑜1，申堅定1，宋君鋒2，馬琳靜1，蘆春艷3，王栓成4，王滿盈4

（1.南陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，河南 南陽 473083；2.新野縣農(nóng)業(yè)局，河南 新野 473550；3.南陽國家農(nóng)業(yè)科技園區(qū)，河南 南陽 473000；4.西峽縣食用菌辦公室，河南 西峽 474550）

利用拮抗試驗對子囊菌屬的羊肚菌栽培品種進(jìn)行初步區(qū)分鑒別，反應(yīng)型大多為色素沉積、隆起型或隔離型，證明拮抗試驗對羊肚菌品種間區(qū)分是可行的。

羊肚菌；拮抗；栽培品種

拮抗現(xiàn)象（antagonism）是由多基因控制的異源不親合反應(yīng)。控制2個菌株雙核菌絲體不親合性的多個基因位點只要有一處不同，菌絲體相互接觸時不親合反應(yīng)就會發(fā)生，并在接觸區(qū)出現(xiàn)色素、菌絲隆起、菌絲稀疏等現(xiàn)象[1]。常見的拮抗反應(yīng)有隆起型、隔離型、溝型，拮抗試驗操作簡單，結(jié)果容易辨別分析，常用于擔(dān)子菌的菌種鑒別研究。但是對于子囊菌是否適用，拮抗試驗?zāi)芊駥Σ煌贩N進(jìn)行區(qū)分鑒別，值得探討。

羊肚菌（Morchella spp.），又稱美味羊肚菌，別名羊肚菜、羊肚蘑、地羊肚子、木耳蘑菇、編笠菌、陽雀菌、蜂窩落等，因其菌蓋表面生有許多小凹坑，外觀極似羊肚而得名，它是1種野生名貴食（藥）用真菌之一，有“食用菌皇后”之美譽(yù)[2]。羊肚菌隸屬于子囊菌亞門 （Ascomycotina） 盤菌綱 （Discomycetes） 盤菌目 （Pezizales） 羊肚菌科 （Morchellacea）。

研究表明，不同來源的羊肚菌其最佳碳、氮源不同，因為不同種 (株)的羊肚菌對營養(yǎng)條件和環(huán)境條件的要求不同；即使同一菌株在不同的營養(yǎng)條件下，菌絲的形態(tài)、顏色等培養(yǎng)特征也不完全相同，這些差異反映了羊肚菌生理特性的多樣性。一般情況下，在生長初期，羊肚菌菌絲呈現(xiàn)白色或淡黃色，絨毛狀，有光澤，尖端分泌有針尖大小的無色露珠狀液體，隨后菌絲尖端出現(xiàn)樹枝狀或多指狀分枝，分枝逐漸增多并交織成網(wǎng)格狀，構(gòu)成一個復(fù)合的整體。生長中期，菌落會分泌1種深褐色色素至培養(yǎng)基中，色素由菌落中心較老的菌絲分泌，使菌絲呈棕黃色。隨著菌絲的老化，菌絲分泌的色素擴(kuò)散到平皿四周，使菌落由深棕色轉(zhuǎn)為褐色，光澤隨之消失[3]。值得注意的是不同種的羊肚菌菌株具有不同的培養(yǎng)特征，包括生長速度、生長習(xí)性、菌核發(fā)育、菌絲和菌核的顏色等都有明顯的差異。即使是羊肚菌的同一菌株在不同的培養(yǎng)基中的培養(yǎng)特征也不完全一致[4]。

1 材料與方法

2015年4月，筆者結(jié)合南陽國家農(nóng)業(yè)科技園區(qū)、西峽縣食用菌辦公室對河南南陽羊肚菌栽培進(jìn)行考察，收集了15個不同栽培點羊肚菌子實體進(jìn)行分離（表1），經(jīng)室內(nèi)培養(yǎng)后進(jìn)行拮抗試驗，具體試驗方法如下。

試驗用培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA），pH自然。

試驗方法：PDA培養(yǎng)基室內(nèi)斜面培養(yǎng)，菌絲長滿后接種至培養(yǎng)皿（直徑90 cm，20 mLPDA培養(yǎng)基），每皿接種2種菌株，25℃培養(yǎng)10 d后觀察反應(yīng)型。

2 結(jié)果與分析

觀察培養(yǎng)皿內(nèi)菌株菌絲交界處是否有拮抗反應(yīng)，具體結(jié)果見表2。

表1 羊肚菌栽培品種采集記錄和編號

表2 羊肚菌品種間拮抗反應(yīng)記錄表

羊肚菌菌絲在培養(yǎng)皿內(nèi)生長迅速，不同時期菌絲形態(tài)差異較大，3 d左右氣生菌絲即可布滿培養(yǎng)皿表面，但是不同品種間不表現(xiàn)出任何拮抗反應(yīng)型；5 d左右氣生菌絲消退，不同品種羊肚菌菌絲形態(tài)表現(xiàn)差異，顏色主要為白色或淡褐色；7 d～10 d菌絲形態(tài)差異顯著，菌絲顏色從白色至深褐色，部分品種產(chǎn)生菌核，不同品種間拮抗反應(yīng)型表現(xiàn)明顯，主要表現(xiàn)為色素沉積為明顯特征的隔離線，反應(yīng)型為隔離型或隆起型（圖1、圖2）。

圖1YD7與YD9間拮抗反應(yīng)

圖2YD8與YD9間拮抗反應(yīng)

而未表現(xiàn)出拮抗的品種表現(xiàn)為菌絲顏色、形態(tài)一致，菌絲表面平整，無色素沉積或菌絲隆起等現(xiàn)象 （圖 3）。

圖3 YD3與YD10間無拮抗反應(yīng)

羊肚菌品種之間拮抗反應(yīng)會出現(xiàn)菌絲顏色、形態(tài)差異性，說明羊肚菌品種間存在生理特異性，例如圖1中YD7與YD9顏色差異明顯，而YD8與YD9間顏色區(qū)分不明顯，但是色素沉積帶和拮抗隆起明顯。

羊肚菌品種間拮抗反應(yīng)可區(qū)分不同的品種，但未表現(xiàn)出拮抗現(xiàn)象卻不可確定為同一品種且拮抗僅作為品種間兩兩區(qū)分，不具備關(guān)聯(lián)性，如YD3與YD7、YD10、YD14均無拮抗反應(yīng)，YD14與YD3、YD7無拮抗反應(yīng)，但是 YD7與 YD10、YD10與YD14之間均有拮抗反應(yīng)，這表明羊肚菌品種間存在較大的變異性。

筆者挑取不同羊肚菌品種菌絲在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察見圖4、圖5。

圖4 YD10光學(xué)顯微鏡下羊肚菌菌絲及菌核形態(tài)

圖5 YD12光學(xué)顯微鏡下羊肚菌菌絲形態(tài)

從圖4、圖5可以看出，YD10與YD12存在拮抗反應(yīng)（表2），光鏡下YD10和YD12菌絲雖存在差異，但不能作為品種區(qū)分鑒別的依據(jù)，因此建議結(jié)合食用菌品種真實性鑒定國家標(biāo)準(zhǔn)，如同工酶電泳、SSR、ISSR、RAPD等方法，對羊肚菌品種間進(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定區(qū)分。

3 小結(jié)

利用拮抗試驗對羊肚菌不同品種進(jìn)行區(qū)分鑒定是可行的，表現(xiàn)拮抗反應(yīng)的可區(qū)分為不同的品種，未表現(xiàn)出拮抗現(xiàn)象的不可確定為同一品種且拮抗僅作為品種間兩兩區(qū)分，不具備關(guān)聯(lián)性。建議結(jié)合同工酶電泳、SSR、ISSR、RAPD等方法，對羊肚菌品種進(jìn)行鑒定更加科學(xué)。

[1]沈?qū)W香，尚曉冬，汪虹，等.十株香菇菌株間的營養(yǎng)體不親合性[J].食用菌學(xué)報，2008，13（2）：1-5.

[2]楊芳，王新風(fēng)，李剛，等.不同碳、氮源對羊肚菌生長與胞內(nèi)多糖的影響[J].食品科學(xué)，2007，28（11）：396-400.

[3]Jacobs ME.Beta-alanine and tanning polymorphisms[J].Comparative Biochemistry and Physiology,1982,72 （2）：173-177.

[4]熊川，李小林.羊肚菌生活史周期、人工栽培及功效研究進(jìn)展[J].中國食用菌，2015，34（1）：7-12.

S646.9

A

1003-8310（2017）05-0080-03

10.13629/j.cnki.53-1054.2017.05.020

馬瑜（1972-），男，本科，農(nóng)藝師，主要從事食用菌栽培及育種研究。E-mail:648223024@qq.com

2017-07-05