楊麗萍 侯俊德 馮海芹 劉彩茹 張麗娜

IGF-1、PLGF水平與早發(fā)型子癇前期的關(guān)系研究

楊麗萍 侯俊德 馮海芹 劉彩茹 張麗娜

目的探討早發(fā)型子癇前期孕婦血清及胎盤組織胰島素樣生長因子-1（IGF-1）和胎盤生長因子（PLGF）水平與早發(fā)型子癇前期的關(guān)系及臨床意義。方法 選取早發(fā)型子癇前期孕婦50例（觀察組），按子癇前期的病情程度診斷標(biāo)準(zhǔn)分為重度組（27例）和輕度組（23例）。選取同期行規(guī)范產(chǎn)前檢查并住院分娩的正常晚期孕婦25例作為對照組。采用ELISA法檢測孕婦血清IGF-1、PLGF水平，采用免疫組化SP法檢測胎盤組織IGF-1、PLGF水平。比較觀察組與對照組孕婦IGF-1、PLGF水平，并分析觀察組孕婦IGF-1水平與PLGF水平相關(guān)性。結(jié)果 觀察組孕婦血清及胎盤組織IGF-1、PLGF水平均低于對照組（均P＜0.05），且重度組孕婦血清及胎盤組織IGF-1、PLGF水平均低于輕度組（均P＜0.05）。觀察組孕婦血清、胎盤組織IGF-1水平與相應(yīng)的PLGF水平均呈正相關(guān) （r=0.639、0.576,均P＜0.05）。結(jié)論 孕婦血清及胎盤組織IGF-1、PLGF水平可作為預(yù)測早發(fā)型子癇前期發(fā)病和疾病嚴(yán)重程度的指標(biāo)。

胰島素樣生長因子-1 胎盤生長因子 早發(fā)型子癇前期

子癇前期是妊娠期高血壓疾病發(fā)展的嚴(yán)重階段，是妊娠期特有的并發(fā)癥，依據(jù)孕周可分為早發(fā)型和晚發(fā)型。早發(fā)型子癇前期指孕34周前發(fā)病[1]，其危害性遠(yuǎn)大于晚發(fā)型，可引起全身多臟器的損害，是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦及圍生兒病死率升高的主要疾病之一[2-3]。早發(fā)型子癇前期病因和發(fā)病機(jī)制迄今尚未明確，故有效預(yù)測早發(fā)型子癇前期的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)并及早干預(yù)成為婦產(chǎn)科臨床研究的重點(diǎn)。目前研究認(rèn)為，胎盤淺著床和血管重鑄障礙是其發(fā)生的中心環(huán)節(jié)[4]，同時(shí)妊娠過程中滋養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)行為也受細(xì)胞因子影響，具有促進(jìn)血管生成及增加血管通透性作用。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，胰島素樣生長因子-1（IGF-1）與胎盤生長因子（PLGF）能促進(jìn)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞的侵入及遷移，降低血管重鑄障礙，維持血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，改善血管通透性及胎盤缺血缺氧狀態(tài)?；诖?，本研究通過檢測孕婦血清及胎盤組織中IGF-1、PLGF水平，探討兩者與早發(fā)型子癇前期的關(guān)系及臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2014年3月至2015年4月在本院產(chǎn)科行規(guī)范產(chǎn)前檢查并住院分娩的早發(fā)型子癇前期孕婦50例（觀察組），按子癇前期的病情程度診斷標(biāo)準(zhǔn)分為重度組（27例）和輕度組（23例）。選取同期在本院行規(guī)范產(chǎn)前檢查并住院分娩的正常晚期孕婦25例作為對照組。3組孕婦均為單胎初產(chǎn)婦，3組孕婦年齡、孕周比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表1。

表1 3組孕婦年齡、孕周比較

1.2 標(biāo)本采集及處理 3組孕婦均在清晨空腹抽取肘正中靜脈血5ml，于4℃下以3 000r/min離心15min，分離血漿，取上清液，置于EP管，-20℃低溫冰箱保存待用。3組孕婦均在胎盤娩出后，即刻在無菌狀態(tài)下取母面中央近臍帶處避開鈣化區(qū)的胎盤組織2份，大小約1.5cm×1.5cm×1.5cm，漂洗干凈后，置入10%中性甲醛溶液固定24h以上，隨后常規(guī)石蠟包埋，制成蠟塊切成4μm切片備用。

1.3 血清IGF-1、PLGF水平檢測 采用ELISA法檢測，檢測試劑盒均購自深圳晶美生物公司，先將試劑盒室溫復(fù)溫平衡30min；用蒸餾水稀釋成原倍的洗滌液；加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl；待測樣本孔中先加入待測樣本10μl，再加樣本稀釋液40μl；37℃恒溫箱溫育30min；反復(fù)洗板5次；每孔加入酶標(biāo)工作液50μl；37℃恒溫箱溫育30min；重復(fù)洗板5次；每孔加入顯色劑 A液50μl，再加入顯色劑B液50μl，平板混勻器混勻 30s，37℃ 避光顯色 15min；每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)；在終止后 15min內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光度值（OD值）；以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，作相應(yīng)的曲線，樣本的相應(yīng)濃度可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出。

1.4 胎盤組織IGF-1、PLGF水平檢測 采用免疫組化法SP檢測，免疫組化染色步驟嚴(yán)格按照兔SP檢測試劑盒（北京中杉生物技術(shù)公司）說明書進(jìn)行。將石蠟切片置入60℃烤片機(jī)中烘烤20min，PBS充分洗滌后，二甲苯脫蠟，不同濃度乙醇（100%、95%、90%、85%、70%）水化，浸于枸鹽酸鈉緩沖液（pH值為6.0）中，置于沸水（100℃）中孵育20min，室溫20min，3%過氧化氫溶液中室溫下孵育20min，封閉20min，PBS洗滌，分別滴加兔抗人IGF-1多克隆抗體（美國Proteintech公司，批號(hào)：10924-2-AP；）和兔抗人PLGF多克隆抗體（美國Proteintech公司，批號(hào)：10424-1-AP），濕盒 4℃過夜。PBS 清洗，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG抗體（北京中杉生物技術(shù)公司，批號(hào)：ZDR-5401）室溫孵育30min，DAB試劑盒（北京中杉生物技術(shù)公司，批號(hào)：PV-9000-D）顯色。以PBS液代替一抗作為陰性對照。蘇木素復(fù)染、脫水、透明、封片，鏡下觀察。結(jié)果判定：IGF-1及PLGF陽性細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有棕黃色顆粒，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)不重復(fù)的高倍視野（×400），用Powersite顯微圖像分析系統(tǒng)計(jì)算每高倍視野滋養(yǎng)細(xì)胞的平均光密度值，以光密度值作為反映IGF-1、PLGF水平的指標(biāo)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件；計(jì)量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；IGF-1水平與相應(yīng)部位PLGF水平進(jìn)行直線相關(guān)分析；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組孕婦血清IGF-1、PLGF水平比較 見表2。

表2 3組孕婦血清IGF-1、PLGF水平比較（μg/L）

由表2可見，3組孕婦血清IGF-1、PLGF水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），觀察組孕婦血清IGF-1、PLGF水平均低于對照組（均P＜0.05），且重度組孕婦血清IGF-1、PLGF水平均低于輕度組（均P＜0.05）。

2.2 3組孕婦胎盤組織IGF-1、PLGF水平比較 見表3。

表3 3組孕婦胎盤組織IGF-1、PLGF水平比較（光密度值）

由表3可見，3組孕婦胎盤組織IGF-1、PLGF水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），觀察組孕婦胎盤組織IGF-1、PLGF水平均低于對照組（均P＜0.05），且重度組孕婦胎盤組織IGF-1、PLGF水平均低于輕度組（均 P＜0.05）。

2.3 觀察組孕婦IGF-1水平與PLGF水平相關(guān)性分析觀察組孕婦血清、胎盤組織IGF-1水平與相應(yīng)的PLGF水平均呈正相關(guān)（r=0.639、0.576，均 P＜0.05）。

3 討論

早發(fā)型子癇前期是孕產(chǎn)婦及圍生兒死亡最常見的原因之一，也是導(dǎo)致醫(yī)源性早產(chǎn)最常見的原因，因母兒雙方的利益難以平衡，臨床處理非常棘手。早發(fā)型子癇前期病因與發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，多系統(tǒng)功能參與其中，至今具體情況不甚明了。

IGF-1是近年來發(fā)現(xiàn)的一種調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，由70個(gè)氨基酸組成，由胎盤組織中的合體滋養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞及胎膜的平滑絨毛層細(xì)胞合成，可調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細(xì)胞的侵入、遷移及舒張?zhí)ケP血管的作用，與滋養(yǎng)細(xì)胞的浸潤密切相關(guān)[5]。IGF-1可以使血管平滑肌細(xì)胞合成NO增加并增加Na+/K+ATPase活性，從而發(fā)揮舒張血管作用，參與血壓的調(diào)節(jié)[6]。本研究結(jié)果顯示，早發(fā)型子癇前期輕、重度孕婦血清及胎盤組織IGF-1水平均明顯低于正常孕婦，且伴隨疾病的嚴(yán)重程度加重而逐漸降低。這說明血清及胎盤組織IGF-1水平的異常與早發(fā)型子癇前期的發(fā)病相關(guān)，并在一定程度上反映了病情的輕重。母體血清IGF-1水平降低，導(dǎo)致其舒張血管作用下降，血管舒縮障礙，胎盤供血不足、缺血缺氧，導(dǎo)致胎盤局部IGF-1表達(dá)減少，使滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤能力下降，進(jìn)而引起子宮螺旋小動(dòng)脈重鑄障礙，促進(jìn)早發(fā)型子癇前期的發(fā)生和發(fā)展。本研究結(jié)果與Rohra等[7]及張海芬等[8]研究結(jié)論一致。

PLGF是一種血管內(nèi)皮生長因子，由合體滋養(yǎng)細(xì)胞和細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞分泌，通過與特異性血管內(nèi)皮生長因子受體相結(jié)合而發(fā)揮其生物功能，可促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞增殖、遷移及誘導(dǎo)血管生成的作用，并參與血管重鑄過程[9]。本研究結(jié)果顯示，早發(fā)型子癇前期輕、重度孕婦血清及胎盤組織PLGF水平均明顯低于正常孕婦，且隨著病情加重有逐漸下降趨勢。推測早發(fā)型子癇前期孕婦可能由于胎盤缺血缺氧，滋養(yǎng)細(xì)胞合成分泌PLGF下降，而PLGF生成減少后，使早發(fā)型子癇前期孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞增殖和浸潤能力受到限制，血管生成和形成受阻，導(dǎo)致胎盤淺著床和血管重鑄障礙，使胎盤缺血缺氧進(jìn)一步加重，引起惡性循環(huán)[10-11]，最終導(dǎo)致早發(fā)型子癇前期發(fā)生和發(fā)展。由此說果PLGF與早發(fā)型子癇前期的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，且其水平的變化對于預(yù)測早發(fā)型子癇前期的預(yù)后也具有重要意義。但也有學(xué)者得出的PLGF水平與本研究結(jié)果有差異，可能與不同條件下子癇前期的診斷、吸煙、藥物治療、不同公司的檢測試劑盒、孕齡及患者的種族起源等諸多因素有關(guān)[12]。

本研究還發(fā)現(xiàn)，早發(fā)型子癇前期孕婦血清及胎盤組織IGF-1水平與相應(yīng)的PLGF水平呈正相關(guān)。這提示可能是由于IGF-1水平降低而引起胎盤血管舒張功能障礙，導(dǎo)致胎盤組織缺血、缺氧，而胎盤缺血缺氧又進(jìn)一步抑制合體滋養(yǎng)細(xì)胞和細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞PLGF的表達(dá)；PLGF釋放的減少又加重了胎盤缺血缺氧，形成惡性循環(huán)，最終誘發(fā)或加重早發(fā)型子癇前期的發(fā)生。因此，及時(shí)監(jiān)測孕婦血清及胎盤組織IGF-1、PLGF水平的變化，對早發(fā)型子癇前期的早期預(yù)防及病情的評估具有重要的臨床意義。

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10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.19.2016-117

河北省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)科研基金項(xiàng)目（20140307）

056008 河北，邯鄲市中心醫(yī)院產(chǎn)科

楊麗萍，E-mail：1119673794@qq.com

2016-01-18）

（本文編輯：李媚）