王云峰

[摘要]目的 建立穿心蓮注射液中穿心蓮內(nèi)酯的高效液相色譜法含量測定方法。方法 采用高效液相色譜法測定含量，色譜柱：Agilent TC-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（50∶50）；檢測波長：224 nm；流速：1.0 ml/min。結(jié)果 穿心蓮內(nèi)酯在0.02 022～0.1011 mg/ml（r=0.9999）內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率（n=6）為99.1%（RSD=1.1%）。結(jié)論 建立的測定穿心蓮內(nèi)酯的方法準(zhǔn)確有效，有助于進(jìn)一步完成穿心蓮注射液的質(zhì)量控制方法。

[關(guān)鍵詞]高效液相色譜法；穿心蓮注射液；穿心蓮內(nèi)酯；含量

[中圖分類號] R917 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）09（c）-0073-03

[Abstract]Objective To establish the HPLC method for determination of Andrographolide content in Chuanxinlian Injection.Methods HPLC was used in content determination，the chromatographic column was Agilent TC-C18 （4.6 mm×150 mm，5 μm），the mobile phase consisted of methanol-water （50：50），the detection wavelength was 224 nm and the flow rate was 1.0 ml/min.Results The good linear relation was maintained when Andrographolide was from 0.02 022 to 0.1011 mg/ml （r=0.9999）.The average recovery was 99.1% （n=6，RSD=1.1%）.Conclusion The method of determination of Andrographolide is accurate and effective，which can help to complete the quality control method of Andrographolide Injection.

[Key words]HPLC method；Chuanxinlian Injection；Andrographolide；Content

穿心蓮注射液是由穿心蓮的乙醇提取物制成的注射液，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十九冊，具有清熱解毒的功效，主要用于咽喉腫痛、肺熱咳嗽、熱痢，亦可用于上呼吸道感染、細(xì)菌性痢疾等。穿心蓮注射液中的主要有效成分穿心蓮內(nèi)酯（Andrographolide），是爵床科植物穿心蓮Andrographis paniculata （Burm.f.）Nees的有效成分之一，具有抗菌、消炎、止咳平喘、清熱解毒、涼血消腫等作用，廣泛用于上呼吸道、消化道細(xì)菌感染所引起的各種疾病[1-6]。現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用紫外分光光度法測定穿心蓮內(nèi)酯含量，操作繁瑣，且顯色時(shí)間的長短對測定結(jié)果影響較大。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法對穿心蓮注射液中有效成分穿心蓮內(nèi)酯的含量進(jìn)行測定，通過大量實(shí)驗(yàn)研究，建立了穿心蓮內(nèi)酯的HPLC分析方法，方法準(zhǔn)確有效，現(xiàn)報(bào)道如下。

1儀器與試藥

Agilent1100型高效液相色譜儀含真空脫氣機(jī)、低壓四元泵、自動進(jìn)樣器和VWD檢測器（美國安捷倫公司）；AUW120D型電子天平（日本島津公司）；SK8200LH型超聲儀（昆山超聲儀器有限公司）；穿心蓮內(nèi)酯對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110797-201509）；穿心蓮注射液（海南制藥廠有限公司，批號：150104、150201、150914）。甲醇（色譜純），水（超純水）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Agilent TC-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相∶甲醇-水（50∶50）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：224 nm；進(jìn)樣量：10 μl[7-12]。

2.2線性關(guān)系

精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對照品10.11 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液，分別精密量取對照品貯備液1、2、3、4、5 ml，置10 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1～2）。以濃度（mg/ml）為橫坐標(biāo)，峰面積（mAU）為縱坐標(biāo)，得穿心蓮內(nèi)酯的線性回歸方程為：Y=23822X-15.01（n=5），r=0.9999，結(jié)果表明穿心蓮內(nèi)酯在0.02 022～0.1011 mg/ml線性關(guān)系良好。

2.3空白試驗(yàn)

按照藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下的制備工藝，自制不含穿心蓮藥材的產(chǎn)品作為陰性樣品，并按供試溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，結(jié)果顯示陰性樣品溶液在穿心蓮內(nèi)酯的樣品峰處無干擾峰，表明本實(shí)驗(yàn)建立的方法對穿心蓮內(nèi)酯的含量測定無干擾（圖3）。

2.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，在0、3、6、9、12 h內(nèi)重復(fù)進(jìn)樣5次，每次10 μl，峰面積的RSD=0.6%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號樣品，按樣品含量測定測定項(xiàng)下方法重復(fù)測定5份，得穿心蓮內(nèi)酯含量的RSD=0.8%，表明重復(fù)性良好。

2.6精密度試驗(yàn)

精密吸取線性關(guān)系范圍項(xiàng)下對照品溶液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄對照品峰面積，計(jì)算峰面積的RSD=0.7%，表明精密度良好。endprint

2.7加樣回收試驗(yàn)

精密量取已知含量的供試品2 ml六份，分別置10 ml量瓶中，分別精密加入標(biāo)準(zhǔn)曲線對照品貯備液0.5、0.5、1.5、1.5、2.5、2.5 ml，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算平均回收率（表1）。

2.8樣品測定

分別精密量取3個(gè)批號的穿心蓮注射液（批號：150104、150201、150914）各2 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對照品10 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3 ml，置10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。分別精密量取10 μl注入液相色譜儀，測定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算穿心蓮內(nèi)酯的含量，結(jié)果分別為1.2、1.1、0.9 mg。

3討論

3.1本文建立的方法與原檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的比較

在穿心蓮注射液現(xiàn)行檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中，通常采用紫外分光光度法，通過顯色反應(yīng)來測定穿心蓮內(nèi)酯含量，操作繁瑣，且吸光度值不穩(wěn)定，通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)，吸光度會隨著時(shí)間推移呈迅速下降趨勢，這樣必然會造成測定結(jié)果的不準(zhǔn)確。并且比色法專屬性不強(qiáng)，容易給一些不法分子提供造假機(jī)會。本研究提出的HPLC法可直接測定注射液中穿心蓮內(nèi)酯的含量，方法簡便、快速、準(zhǔn)確，可作為該制劑的含量控制方法。

3.2穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯含量的動態(tài)變化

穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯在制劑生產(chǎn)過程中會出現(xiàn)動態(tài)變化，且不同的提取和生產(chǎn)工藝對穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的轉(zhuǎn)移率有較大的影響[13-16]，本研究組計(jì)劃在下一步實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步考察本制劑中脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量及兩者的關(guān)系[17-18]。

3.3方法耐用性考察

經(jīng)過更換色譜柱Sunfire C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）和Agilent Eclipse XDB C18（4.6 mm×250 nm，5 μm）試驗(yàn)，結(jié)果得到良好的色譜圖及重現(xiàn)性，且所得含量一致。

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