丹芪祛瘀止痛顆?？箤?shí)驗(yàn)性胃潰瘍的作用

姜 山 楊亞彬 宋亞娟

（黑龍江省中醫(yī)研究院·哈爾濱 150036）

丹芪祛瘀止痛顆粒抗實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的作用

姜 山 楊亞彬*宋亞娟

（黑龍江省中醫(yī)研究院·哈爾濱 150036）

目的：觀察丹芪祛瘀止痛顆粒對(duì)于胃潰瘍（GU）的防治作用。方法：雄性SD大鼠分為5組：CDB高、中、低劑量組（1，0.5，0.25g·kg-1），陽(yáng)性對(duì)照組（雷尼替丁，0.027g·kg-1）和空白組（純水，10mL·kg-1）。復(fù)制應(yīng)激性胃潰瘍和醋酸灼傷胃潰瘍模型，分別觀察藥物對(duì)于潰瘍發(fā)生的防治作用，同時(shí)測(cè)定動(dòng)物血清中表皮生長(zhǎng)因子（EGF）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-α）水平。結(jié)果：丹芪祛瘀止痛顆粒能夠降低潰瘍指數(shù)，減少潰瘍面積，并明顯降低胃液總酸度（P＜0.01或P＜0.05）。丹芪祛瘀止痛顆粒高、中劑量可以顯著提高胃兩種潰瘍模型動(dòng)物血清中EGF和TGF-α水平（P＜0.01或P＜0.05），但是對(duì)胃蛋白酶活性無(wú)明顯影響（P＞0.05）。結(jié)論：丹芪祛瘀止痛顆?？梢酝ㄟ^(guò)抑制胃酸分泌和增強(qiáng)保護(hù)因子來(lái)起到抗實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的作用。

胃潰瘍 丹芪祛瘀止痛顆粒 表皮生長(zhǎng)因子 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子

丹芪祛瘀止痛顆粒全方由黃芪，丹參，白芍，烏藥，北沙參，地榆，莪術(shù)，苦參，枸杞子，厚樸，三七，柴胡，黃連，桂枝，丁香，大黃組成，具有活血生肌，祛瘀止痛。用于脾胃虛弱，氣虛血瘀型萎縮性胃炎、淺表型胃炎，胃及十二指腸潰瘍。

本課題組通過(guò)實(shí)驗(yàn)考查丹芪祛瘀止痛顆粒對(duì)于大鼠胃潰瘍的預(yù)防和治療作用，從而為臨床的合理應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SD大鼠，SPF級(jí)，雄性，體重220～240g，購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK-（軍）2007-004。

1.2 藥物和試劑

丹芪祛瘀止痛顆粒由黑龍江省中醫(yī)藥藥房提供，批號(hào)：110101；乙酸：北京市化工廠，批號(hào)20110812；水合氯醛：天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)20111212；

大鼠TGF-α、EGF試劑盒，美國(guó)R&D公司。

1.3 儀器

TN-LCD游標(biāo)卡尺（南通華泰實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；HERAEUSLabofuge400 R型離心機(jī)（德國(guó)）Tecan M1000酶標(biāo)儀（瑞士）。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組及給藥劑量

大鼠使用北京維通利華公司提供的標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)；壞境：室內(nèi)溫度20～24℃，濕度40%～70%，12h光照明暗交替。

大鼠隨機(jī)分為丹芪祛瘀止痛顆粒高、中、低劑量組（1，0.5，0.25g·kg-1），陽(yáng)性對(duì)照組（雷尼替丁0.027g·kg-1）和空白組（純水10mL·kg-1）。

2.2 預(yù)防應(yīng)激性胃潰瘍

連續(xù)給藥10天禁食24h，給藥后1h，將各組大鼠裝入特制的水浸鐵絲籠固定，垂直浸入24℃水中，液面保持在大鼠胸骨劍突水平，8h后取出，脫臼處死，剖腹，腹主動(dòng)脈取血，結(jié)扎胃賁門(mén)和幽門(mén)并經(jīng)胃壁向胃腔內(nèi)注入4%甲醛溶液8mL，將胃取出浸入4%甲醛溶液中10min后沿胃大彎剪開(kāi)；對(duì)胃壁采用雙盲法測(cè)量胃黏膜損傷長(zhǎng)度(如為針尖大小的潰瘍點(diǎn)，10個(gè)相當(dāng)于潰瘍長(zhǎng)度1mm)，每只動(dòng)物損傷長(zhǎng)度的總和代表該鼠的潰瘍指數(shù)，同時(shí)計(jì)算潰瘍抑制百分率：潰瘍抑制率/%=(對(duì)照組潰瘍指數(shù)-給藥組潰瘍指數(shù))/對(duì)照組潰瘍指數(shù)×100%，比較各組間差異。

2.3 治療醋酸灼傷胃潰瘍

大鼠禁食24h后，麻醉狀態(tài)下，腹部開(kāi)口暴露胃壁，0.02mL30%(v/v)醋酸注射于胃體與胃竇交界處中點(diǎn)胃壁粘膜下層[1]，使用鹽水沖洗胃部表面，避免胃與周?chē)M織粘連，然后縫合傷口。空白組大鼠胃暴露后，不用醋酸進(jìn)行處理。

連續(xù)給藥7天，禁食24h，禁水2h，麻醉大鼠，取血，結(jié)扎胃賁門(mén)和幽門(mén)后沿胃大彎剪開(kāi)收集胃內(nèi)容物后1500r·min-1離心10min測(cè)定上清液體積后用滴定法和改良Mett法[2]測(cè)定胃液總酸度和胃蛋白酶活性，觀察胃內(nèi)壁潰瘍形成情況，測(cè)量潰瘍縱橫徑，以潰瘍最長(zhǎng)徑和最短徑的均值表示潰瘍指數(shù)。

2.4 血清處理

血液室溫靜置1h后，3000r·min-1離心10min，取上清液-80℃凍存，用于ELISA法測(cè)定。

2.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)量資料使用單因素方差分析中SNK-q檢驗(yàn)進(jìn)行多組間比較，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 丹芪祛瘀止痛顆粒預(yù)防應(yīng)激性胃潰瘍結(jié)果

表1 丹芪祛瘀止痛顆粒對(duì)水浸法胃潰瘍大鼠潰瘍指數(shù)、血清TGF-α、EGF含量影響

丹芪祛瘀止痛顆粒高劑量組和中劑量組潰瘍指數(shù)均明顯降低，血清中TGF-α和EGF含量升高，與模型組比較，差異具有顯著性意義（P＜0.01或P＜0.05）。

3.2 丹芪祛瘀止痛顆粒治療醋酸灼傷胃潰瘍療效

表2 丹芪祛瘀止痛顆粒對(duì)醋酸灼傷胃潰瘍潰瘍指數(shù)，胃液蛋白酶活性、酸度影響

丹芪祛瘀止痛顆粒高劑量組、中劑量藥物可以明顯降低潰瘍指數(shù)，降低胃液總酸度，與模型組比較，差異具有顯著性意義（P＜0.01或P＜0.05）；但是對(duì)于胃蛋白酶活性沒(méi)有明顯影響。

表3 丹芪祛瘀止痛顆粒對(duì)醋酸灼傷胃潰瘍大鼠血清TGF-α和EGF含量的影響

丹芪祛瘀止痛顆粒高劑量和中劑量組大鼠血清中TGF-α和EGF含量明顯升高，與模型組比較差異具有顯著性意義（P＜0.01）。

4 討論

實(shí)驗(yàn)中，水浸束縛法誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生應(yīng)激性胃潰瘍，潰瘍?yōu)樽厣珬l索狀，多沿著血管走向。為了防止取材過(guò)程中，胃粘膜變形影響結(jié)果觀察，采用注射甲醛固定后測(cè)量潰瘍長(zhǎng)度的方法以減少誤差。由漿膜層下注射醋酸導(dǎo)致的潰瘍?yōu)椴灰?guī)則圓形，潰瘍大小易受注射位置影響，因此操作時(shí)所有造模動(dòng)物選取相同位置注射。

胃潰瘍是一種常見(jiàn)疾病，主要表現(xiàn)為胃粘膜缺失，粘膜肌層暴露[3]，是由胃粘膜保護(hù)因子和攻擊因子平衡失調(diào)，胃粘膜保護(hù)屏障被破壞所致。可導(dǎo)致胃粘膜損傷的因子包括胃酸、粘膜缺血、自由基和乙醇等等[4]。對(duì)于兩種胃潰瘍模型，丹芪祛瘀止痛顆粒均表現(xiàn)出較好的抑制潰瘍作用，對(duì)于胃蛋白酶無(wú)抑制作用，但能降低胃液總酸度，減少對(duì)胃粘膜的損傷。

EGF是一種具有抑制胃酸分泌，促進(jìn)上皮增殖，組織修復(fù)和細(xì)胞保護(hù)作用的內(nèi)源性物質(zhì)，TGF-α參與胃粘膜損傷后修復(fù)的主要調(diào)節(jié)肽，產(chǎn)生于整個(gè)胃腸道,具有對(duì)多種細(xì)胞的促有絲分裂作用。實(shí)驗(yàn)中，模型動(dòng)物胃潰瘍發(fā)生血清TGF-α和EGF含量增加，與報(bào)道[5]一致。與雷尼替丁相比，CBD給藥組在抑制胃酸分泌和蛋白酶活性方面表現(xiàn)較差，但是能明顯提高模型動(dòng)物血清TGF-α和EGF含量，證明CBD對(duì)于胃潰瘍具有預(yù)防和治療作用，其機(jī)制主要是增加TGF-α和EGF水平，增強(qiáng)保護(hù)因子的作用，促進(jìn)潰瘍愈合和胃粘膜的修復(fù)，而且可能通過(guò)提高EGF含量，進(jìn)而降低胃液總酸度。

[1] Belagihally M. Srikanta, Upparahally V. Sathisha,Shylaja M. Dharmesh. Alterations of matrix metalloproteinases, gastric mucin and prostaglandin E2 levels by pectic polysaccharide of swallow root(Decalepis hamiltonii) during ulcer healing[J].Biochimie 92 (2010) :94-103.

[2] 王海燕，劉亞明，牛欣，等.高良姜油抗實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍作用及其機(jī)制研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2011,19(2):71-73.

[3] Yeomans, N.D., Naesdal. Systematic review: ulcer definition in NSAID ulcer prevention trials[J].Aliment.Pharmacol. Ther. 2008,27 (6): 465–472.

[4] Ham M., Kaunitz, J 2007. Gastroduodenal defense. Curr.Opin. Gastroenterol. 23 (6): 607–616.

[5] 劉建平，卜濤，白建樂(lè)，等.EGF、TGF-α及EGFR在大鼠胃潰瘍自愈過(guò)程中的表達(dá)及意義[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2003,19(10):1085-1088.

* 西雙版納州人民醫(yī)院·云南 景洪 666100