云南龍竹種子無菌苗叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)研究

李云海+陳麗華++楊榮蓮++陳李梅

摘要 以云南龍竹種子無菌苗為試驗(yàn)材料，探究不同濃度的細(xì)胞分裂素6-BA對其叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的影響。試驗(yàn)在MS培養(yǎng)基中設(shè)置了6-BA 4個濃度梯度的處理，分別為1.0、1.5、2.0、2.5 mg/L。結(jié)果表明，云南龍竹種子無菌苗叢芽誘導(dǎo)初代培養(yǎng)較適宜的6-BA濃度為2.0 mg/L。在此培養(yǎng)基中培養(yǎng)40 d后，其芽的增殖倍數(shù)可達(dá)到4.9倍，苗長勢也較好。

關(guān)鍵詞 云南龍竹；組織培養(yǎng)；種子無菌苗；叢芽誘導(dǎo)

中圖分類號 S795 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）20-0135-01

云南龍竹（Dendrocalamus yunnanicus Hsuch et D.Z.Li）是世界上最大的2種竹類植物之一，為暖熱性喜溫怕寒竹種，主要分布于云南中部、東南部和越南等地區(qū)；云南龍竹的繁殖過去多采用母竹分蔸栽植法或其他無性繁殖方式[1]。從有報道的文獻(xiàn)資料來看，1996年譚宏超[2]報道了采用云南龍竹節(jié)間切口埋桿法育苗，成活率可達(dá)74%；在用ABT生根粉進(jìn)行處理和選好育苗季節(jié)情況下，主枝次生枝扦插成活率可達(dá)86%以上。2011年，牟光儀等[1]從種子收集及篩選、種子儲存、播種育苗、營養(yǎng)土配制、移栽管理等方面總結(jié)出了一套云南龍竹有性繁殖育苗及栽植培育技術(shù)。2012年，李春芳等[3]以云南龍竹的穎果為試驗(yàn)材料，通過種子萌發(fā)建成叢芽無菌無性系進(jìn)行快繁和離體保存研究；篩選出了叢芽誘導(dǎo)、生根和離體保存等較適宜的培養(yǎng)基激素組合和延長繼代時間的離體保存溫度等。2016年，李云海等[4]對云南龍竹種子外植體用升汞滅菌的適宜時間進(jìn)行了試驗(yàn)研究，獲得了污染率低和成活率較高的滅菌處理方法，并得到了一定數(shù)量的試管無菌小苗。本文即是在上述工作和獲得的無菌苗基礎(chǔ)上，從不同濃度的6-BA激素對云南龍竹種子外植體無菌苗叢芽誘導(dǎo)的影響方面進(jìn)行試驗(yàn)研究和觀察，初步結(jié)果現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為云南龍竹的種子。

1.2 試驗(yàn)方法

把在MS+6-BA 1 mg/L+瓊脂粉4.5 g/L+蔗糖30 g/L的培養(yǎng)基中培養(yǎng)2周后的種子無菌小苗，接種到6-BA濃度分別為1.0、1.5、2.0、2.5 mg/L的培養(yǎng)基中，每個處理接種6瓶，每瓶培養(yǎng)基中接種5株，置于25～28 ℃、光照強(qiáng)度1 500～2 000 lx、光照時間12 h/d的條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)40 d后，比較在培養(yǎng)基中不同6-BA濃度情況下叢芽的增殖情況。

2 結(jié)果與分析

培養(yǎng)40 d后，各處理培養(yǎng)基中叢芽增殖情況結(jié)果如表1所示。表中加號前面的數(shù)字表示原始接種的芽數(shù)，加號后面的數(shù)字表示增殖的芽數(shù)。從表1可以看出，6-BA濃度1.0～2.5 mg/L芽的增殖倍數(shù)分別為2.7、3.2、4.9和5.3倍。

根據(jù)表1的結(jié)果，把各處理中芽的總數(shù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果如表2所示。重復(fù)間的F=0.27F0.01，說明處理間差異極顯著。方差分析結(jié)果顯示，不同的6-BA濃度對云南龍竹種子無菌苗叢芽誘導(dǎo)的影響是顯著的。

通過多重比較可以得出，6-BA各濃度處理之間的差異極顯著；6-BA 1.0 mg/L處理與6-BA 1.5 mg/L處理之間、6-BA 2.0 mg/L處理與6-BA 2.5 mg/L處理之間差異不顯著。說明6-BA 2.0 mg/L處理、6-BA 2.5 mg/L處理中的6-BA濃度可以起到極顯著地促進(jìn)云南龍竹種子無菌苗叢芽增殖的良好效果。6-BA 2.0 mg/L處理與6-BA 2.5 mg/L處理之間差異不顯著，說明在6-BA 2.0 mg/L處理的基礎(chǔ)上再增加6-BA的濃度，從叢芽增殖效果來看，與6-BA 2.0 mg/L處理相比已經(jīng)沒有那么顯著。由此可得出，云南龍竹種子無菌苗叢芽誘導(dǎo)初代培養(yǎng)適宜的6-BA濃度為2.0 mg/L。

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)以云南龍竹種子為外植體，采用以芽繁芽的方式。將竹種用0.1%升汞溶液徹底消毒滅菌后，在MS基本培養(yǎng)基中培養(yǎng)萌發(fā)至獲得無菌小苗，并將無菌小苗在MS+6-BA 1 mg/L+瓊脂粉4.5 g/L+蔗糖30 g/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行過渡培養(yǎng)。2周后，將無菌苗轉(zhuǎn)接到含細(xì)胞分裂素6-BA濃度分別為1.0、1.5、2.0、2.5 mg/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行叢芽誘導(dǎo)初代培養(yǎng)。經(jīng)過40 d培養(yǎng)后，把從各處理中所得到的芽個數(shù)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，初步得出，在培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素6-BA濃度由1.0 mg/L按梯度逐漸增加到2.5 mg/L的過程中，側(cè)芽數(shù)也在逐漸增加。當(dāng)6-BA的濃度為2.5 mg/L時其芽的增殖倍數(shù)為5.3倍，但其增殖效果與處理6-BA濃度為2.0 mg/L時的增殖效果之間差異不顯著。因此，本試驗(yàn)篩選出了云南龍竹種子無菌苗叢芽誘導(dǎo)初代培養(yǎng)較適宜的6-BA激素的濃度為2.0 mg/L。

此次試驗(yàn)結(jié)果為初步得出的數(shù)據(jù)，其叢生芽雖較健壯，但它的增殖倍數(shù)仍然有較大提高空間。為了得到高倍快速增殖的叢芽，且能用于種苗的快速繁殖，在其繼代培養(yǎng)中有諸多因素值得深入試驗(yàn)研究。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 牟光儀，李霖，方洪剛.云南龍竹有性繁殖與栽培技術(shù)[J].世界竹藤通訊，2011，9（6）：23-25.

[2] 譚宏超.云南龍竹、大葉慈竹育苗技術(shù)研究[J].云南師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），1996，16（3）：69-75.

[3] 李春芳，程治英，楊俊波，等.云南龍竹的快速繁殖和離體保存研究[J].亞熱帶植物科學(xué)，2014，41（2）：27-31.

[4] 李云海，陳麗華，劉艷.云南龍竹種子外植體適宜滅菌時間篩選試驗(yàn)[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2016（6）：159.