國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口血細(xì)胞處理機(jī)制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的質(zhì)量對(duì)比

時(shí)卉麗，李玉秋，程 菲，李建民，何路軍

(河北省血液中心質(zhì)量法規(guī)處，河北 石家莊 050071)

國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口血細(xì)胞處理機(jī)制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的質(zhì)量對(duì)比

時(shí)卉麗，李玉秋，程 菲，李建民，何路軍

(河北省血液中心質(zhì)量法規(guī)處，河北 石家莊 050071)

目的通過對(duì)比國(guó)產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)及配套耗材與美國(guó)ACP215血細(xì)胞處理機(jī)洗滌制備的效果，評(píng)價(jià)國(guó)產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)的性能及應(yīng)用可行性。方法抽取40袋全血,先甘油化,冰凍解凍后隨機(jī)分為2組，實(shí)驗(yàn)組應(yīng)用國(guó)產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞，對(duì)照組應(yīng)用美國(guó)ACP215血細(xì)胞處理機(jī)洗滌制備，對(duì)制備的產(chǎn)品按照GB18469-2012版《全血及成分血質(zhì)量要求》相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)分析。結(jié)果2組血紅蛋白含量、游離血紅蛋白含量均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)組甘油殘留量、白細(xì)胞殘留量高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但均能達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求。結(jié)論國(guó)產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)制備的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞產(chǎn)品指標(biāo)符合國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；其耗材價(jià)格相對(duì)較低，維護(hù)相對(duì)方便，可以為血站節(jié)約成本，值得大力推廣和應(yīng)用。

紅細(xì)胞；去甘油化；對(duì)比研究

10.3969/j.issn.1007-3205.2017.11.025

在我國(guó)，Rh(D)陰性獻(xiàn)血者稀少，造成相應(yīng)的血液品種庫(kù)存嚴(yán)重不足，在臨床稀有血型患者輸血救治特別是大量失血患者搶救輸血時(shí)，如何保障Rh(D)陰性血患者醫(yī)療急救用血是一個(gè)十分迫切的問題[1]。深低溫冰凍保存可大幅度延長(zhǎng)紅細(xì)胞的體外存活時(shí)間和存活率[2]，故國(guó)內(nèi)許多血站均采取甘油化Rh陰性紅細(xì)胞后，-80 ℃低溫保存。美國(guó)FDA在上世紀(jì)80年代初批準(zhǔn)冰凍保存紅細(xì)胞的有效期為10年[3]。冰凍可延長(zhǎng)紅細(xì)胞的保存期，且具有可靠的質(zhì)量，在經(jīng)過洗滌后，紅細(xì)胞的生理形態(tài)及生化特性均無明顯改變，適合應(yīng)用于稀有血型患者的輸血治療[4]。近些年，國(guó)內(nèi)大多血站采用手工法和ACP215血細(xì)胞處理機(jī)對(duì)冰凍的紅細(xì)胞進(jìn)行解凍洗滌，但是傳統(tǒng)的手工開放式洗滌法操作步驟相對(duì)復(fù)雜，制備時(shí)間較長(zhǎng)，受人為因素影響較大[5]。我中心最早購(gòu)置的美國(guó)ACP215血細(xì)胞處理機(jī)近幾年也因?yàn)榫S修保養(yǎng)的不便以及進(jìn)口耗材的昂貴、消費(fèi)者多有怨言而利用度下降[6]。血細(xì)胞處理機(jī)的國(guó)產(chǎn)化正處于逐漸摸索投入使用階段，其洗滌效果如何，是否符合質(zhì)量要求標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)際制備效果和產(chǎn)品質(zhì)量有待探討。我中心現(xiàn)試用一種新型國(guó)產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)，本研究將其制備的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞與美國(guó)ACP215血細(xì)胞處理機(jī)制備的產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行比較，以評(píng)價(jià)其可行性，報(bào)告如下。

1 材 料 與 方 法

1.1 主要材料 去白懸浮紅細(xì)胞(2 U/袋，由本中心提供)，智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)(型號(hào)：ZHXD)配套耗材(成都佳穎)，ACP215 血細(xì)胞處理機(jī)配套耗材(美國(guó)血液技術(shù)公司)，無菌熔接片(日本泰爾茂公司)，復(fù)方甘油溶液(石家莊四藥有限公司)，9% NaCl溶液(北京博得桑特輸血技術(shù)公司)，0.9%NaCl溶液(四川南格爾生物醫(yī)學(xué)股份有限公司)，甘油測(cè)定試劑(自制)。所有材料、試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.2 主要設(shè)備 智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)(型號(hào)：ZHXD)，ACP215血細(xì)胞處理機(jī)，無菌接駁機(jī)(泰爾茂)，血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(COULTER)，765型分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器公司)，-80 ℃低溫冰箱(日本三洋SANYO)，恒溫水浴箱(上海發(fā)瑞儀器科技)，全自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)儀(生物梅里埃)。

1.3 紅細(xì)胞甘油化 隨機(jī)抽取6 d內(nèi)2～6 ℃保存的全血(400 mL/袋)，制備成懸浮紅細(xì)胞，放置于PVC血液保存袋內(nèi)，用無菌接駁機(jī)接駁,其紅細(xì)胞轉(zhuǎn)移到空袋中。將血袋接駁于甘油化管路,再與甘油袋相連接。將濃度57%左右的甘油緩慢加入到去白懸浮紅細(xì)胞中,邊加邊振蕩,以使紅細(xì)胞充分、均勻甘油化。室溫靜置30 min，離心去除多余的液體,將其置于-80 ℃低溫冰箱保存。

1.4 紅細(xì)胞去甘油化 將冰凍保存1年后的紅細(xì)胞從-80 ℃低溫冰箱中迅速取出,放入37 ℃恒溫水浴箱(不斷晃動(dòng)至紅細(xì)胞完全融化)，解凍后隨機(jī)分為2組，每組20袋。對(duì)照組用美國(guó)ACP215血細(xì)胞處理機(jī)及配套耗材(REF 235)洗滌，按照去甘油化程序相關(guān)操作規(guī)程[7]進(jìn)行處理(運(yùn)行程序已預(yù)先設(shè)定)。實(shí)驗(yàn)組用國(guó)產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)，將已解凍的冰凍紅細(xì)胞血袋與配套的去甘油化管路無菌接駁，放置在搖擺機(jī)上，啟動(dòng)機(jī)器，自檢完成后選擇去甘油化程序，安裝耗材，連接洗液袋并打開所有管路夾子，開始自動(dòng)洗滌。根據(jù)不同制備階段加入相應(yīng)的羥乙基淀粉和氯化鈉溶液，為了保證紅細(xì)胞滲透能力的穩(wěn)定性，應(yīng)在去甘油的洗滌過程中分別加入9%NaCl高滲溶液和0.9%NaCl等滲溶液，否則易促使紅細(xì)胞發(fā)生形態(tài)、功能的改變，增加紅細(xì)胞的破壞率。最后加入100 mL的紅細(xì)胞保存液保存紅細(xì)胞。2組分別記錄洗滌制備時(shí)間，國(guó)產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)用時(shí)50 min左右，ACP215血細(xì)胞處理機(jī)用時(shí)60 min左右。

1.5 質(zhì)量檢測(cè) 參照普通洗滌紅細(xì)胞的要求稱質(zhì)量、留樣，對(duì)樣品進(jìn)行無菌接種，在全自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)儀內(nèi)培養(yǎng)觀察7 d，應(yīng)用COULTER AcT.5diff全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀檢測(cè)紅細(xì)胞的血紅蛋白含量，用Trinder法進(jìn)行體外溶血試驗(yàn)檢測(cè)游離血紅蛋白值，用Neubaue計(jì)數(shù)板檢測(cè)殘余白細(xì)胞數(shù)，用過碘酸鈉滴定法測(cè)定甘油殘余量[8-10]。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料比較采用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

實(shí)驗(yàn)組白細(xì)胞殘留量、甘油殘留量均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；2組血紅蛋白含量、游離血紅蛋白含量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

組別白細(xì)胞殘留量(×107個(gè))甘油殘留量(g/L)血紅蛋白含量(g)游離血紅蛋白含量(g/L)實(shí)驗(yàn)組0．95±0．183．98±1．2341．60±3．230．43±0．65對(duì)照組0．71±0．172．93±0．9642．75±4．410．41±0．66t4．2763．0360．9400．960P0．0000．0040．3530．343

3 討 論

眾所周知，Rh(D)陰性血型是稀有血型，在Rh血型者中所占比率不到1%。而我國(guó)Rh (D)陰性血型者大約為0.59%，給臨床急診用血帶來一定的困難，存在耽誤患者搶救時(shí)機(jī)的風(fēng)險(xiǎn)。目前國(guó)內(nèi)許多血站采取甘油化Rh陰性紅細(xì)胞，于-80 ℃低溫保存，保存期可達(dá)10年，且具備較好的保存質(zhì)量，在臨床輸注前經(jīng)過洗滌去甘油化后再應(yīng)用于患者，是自身輸血及稀有血型輸血不可缺少的手段[11]。冷凍保存紅細(xì)胞，既爭(zhēng)取了搶救時(shí)間，又極大方便了臨床用血，冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞是不可或缺的血液制品。目前這種紅細(xì)胞制品在國(guó)內(nèi)相當(dāng)一部分血站仍沿用手工方法制備，工藝較繁瑣，容易受離心機(jī)轉(zhuǎn)速、溫度等因素影響，且開放式制備存在被污染的安全隱患，對(duì)操作人員的技術(shù)要求也較高,整個(gè)添加過程受人為因素影響較大，操作稍有不慎將會(huì)直接影響到本類制品的質(zhì)量，即對(duì)患者的用血安全造成威脅[12]。機(jī)器替代手工是近幾年發(fā)展的方向，機(jī)器制備是有效保證血液質(zhì)量的前提，探討機(jī)器標(biāo)準(zhǔn)化制備冰凍紅細(xì)胞,可減少人為誤差,提高效率和產(chǎn)品質(zhì)量。我國(guó)從1998年開始逐漸開展了機(jī)器洗滌紅細(xì)胞技術(shù)，應(yīng)用紅細(xì)胞洗滌機(jī)制備出冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞，制備時(shí)間短，縮短了臨床患者等待搶救的時(shí)間，減少了人工制備的勞動(dòng)力及血液被污染的機(jī)會(huì)。但該技術(shù)的研發(fā)一直存在困難，很多公司生產(chǎn)的儀器并不能達(dá)到《全血及成分血質(zhì)量要求》[13]相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，在儀器質(zhì)量評(píng)估方面也存在很大空白[14]。

本研究實(shí)驗(yàn)組應(yīng)用儀器是我中心新引進(jìn)的一種國(guó)產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)(型號(hào):ZHXD)，與美國(guó)較成熟的ACP215血細(xì)胞處理機(jī)進(jìn)行對(duì)比研究，結(jié)果顯示，2種機(jī)型制備的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)組白細(xì)胞殘留量、甘油殘留量雖高于對(duì)照組，但其他各項(xiàng)指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明國(guó)產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)(型號(hào)：ZHXD)與美國(guó)ACP215血細(xì)胞處理機(jī)比較，其制備的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞除有小部分的不足(白細(xì)胞、甘油殘留量高)，其余指標(biāo)均無明顯差異。目前有些大中城市的血液中心和中心血站應(yīng)用的是美國(guó)進(jìn)口的ACP215血細(xì)胞處理機(jī)，但該儀器價(jià)格昂貴，給患者帶來一定的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，故在國(guó)內(nèi)廣泛推廣應(yīng)用存在一定困難。

本研究結(jié)果顯示，在甘油殘留量方面國(guó)產(chǎn)機(jī)器略遜于進(jìn)口機(jī)器，但無菌試驗(yàn)等各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的要求，其安全性和有效性是可靠的。有文獻(xiàn)報(bào)道美國(guó)ACP215血細(xì)胞處理機(jī)的工序耗時(shí)為50～60 min[7]。而國(guó)產(chǎn)機(jī)器去甘油化進(jìn)程要快于進(jìn)口機(jī)器，符合冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞用于臨床急救用血的要求；另一優(yōu)勢(shì)就是節(jié)省了資金成本，由于ACP215進(jìn)口機(jī)器必須使用美方配套的一次性耗材，而這些耗材比國(guó)產(chǎn)的價(jià)格高好幾倍，無形中增加了生產(chǎn)成本，致使許多血站不得不又重新拾起手工開放式洗滌法。國(guó)產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)在洗滌標(biāo)準(zhǔn)達(dá)標(biāo)的前提下，提高了洗滌速度，符合臨床急救用血的迫切需求；另外，其配套耗材價(jià)格較低，為血站節(jié)約了成本，也能減輕患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。本研究中國(guó)產(chǎn)機(jī)器的良好表現(xiàn)，有利于刺激國(guó)內(nèi)更多生產(chǎn)廠家加入到國(guó)產(chǎn)紅細(xì)胞洗滌機(jī)的自主研發(fā)行列。

FDA已經(jīng)批準(zhǔn)使用ACP215血細(xì)胞處理機(jī)制備去甘油紅細(xì)胞，可于AS-3中保存2周。國(guó)內(nèi)馮博等[15]嘗試用MAP來延長(zhǎng)產(chǎn)品的保存時(shí)間，觀察其質(zhì)量的變化情況。本研究結(jié)果顯示國(guó)產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)在洗滌后仍殘留部分白細(xì)胞和其他細(xì)胞碎片，說明國(guó)產(chǎn)機(jī)器分離技術(shù)還不夠成熟完善；甘油殘存量相對(duì)較高，說明在去甘油化的過程中還存在需要繼續(xù)完善的地方。但整體上已經(jīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，給我國(guó)從人工洗滌紅細(xì)胞到機(jī)器洗滌帶來重大變革。

綜上所述，國(guó)產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)具有我國(guó)的自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)，在成本核算和機(jī)器的后期維護(hù)保養(yǎng)方面更具優(yōu)勢(shì)，開發(fā)和使用國(guó)產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)及配套耗材勢(shì)在必行，是實(shí)現(xiàn)血站自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化的必經(jīng)之路，由人工制備轉(zhuǎn)化為機(jī)器制備模式，應(yīng)該有廣闊的應(yīng)用前景和市場(chǎng)價(jià)值，值得大力推廣。

[1] 梁世艷，張支鳳，李華領(lǐng)，等.Rh(D)陰性冰凍紅細(xì)胞庫(kù)的建立及臨床應(yīng)用[J].衛(wèi)生職業(yè)教育,2012,30(22):134-135.

[2] 馬慶，張嘉敏，李勤，等.深低溫長(zhǎng)期保存方法延緩紅細(xì)胞衰老的研究[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2013，15(2):112-115.

[3] 張玉華，徐雷，周虹，等.現(xiàn)代戰(zhàn)爭(zhēng)條件下美軍野戰(zhàn)輸血保障情況分析與思考[J].軍事醫(yī)學(xué)，2014，38(6)：474-477.

[4] 熊少歡，侯滿意，李婉儀，等.RH(D)陰性冰凍紅細(xì)胞質(zhì)量及臨床分析[J].現(xiàn)代醫(yī)院，2015,15(11)：66-67.

[5] 盧少芬，陳志忠，李潔敏，等.BBS 926全自動(dòng)醫(yī)用低速離心機(jī)制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的質(zhì)量評(píng)價(jià)[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2014,21(30)：87-91.

[6] 梁艷.手工密閉式制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的可行性研究[J].貴州醫(yī)藥,2016,40(6):592-593.

[7] 揚(yáng)麗,張靜，陳健.ACP215處理機(jī)制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞與手工制備的對(duì)比研究[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2012，14(2)：156-157.

[8] 冀慧，陳保民.兩種方法測(cè)定解凍紅細(xì)胞甘油殘留量結(jié)果比較[J].中國(guó)輸血雜志，2014,27(8)：835-838.

[9] 夏紅英,任芙蓉,陳小林,等.滲透壓法檢測(cè)冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞甘油殘留量的可行性[J].北京醫(yī)學(xué),2015,37(6):588-591.

[10] 時(shí)卉麗,趙倩,楊鳳霞,等.國(guó)產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)及配套耗材制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的質(zhì)量觀察[J].臨床合理用藥雜志,2016,9(22):168-169.

[11] 王林，唐玉清，閆曉鵬，等.冰凍亞型紅細(xì)胞制備及使用的全程質(zhì)量控制[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)，2014,4(17)：136-138.

[12] 肖樂宇，任明臣，馬振芳，等.機(jī)器法和手工法制備的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的質(zhì)量比較[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014,41(11)：3201-3203.

[13] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2012：8-9.

[14] 時(shí)卉麗，牛宏偉，楊鳳霞，等.一種國(guó)產(chǎn)紅細(xì)胞洗滌機(jī)的性能評(píng)價(jià)[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊，2017，19(1)：79-80.

[15] 馮博，段瀾，龔曉燕，等.MAP液保存的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞可保存天數(shù)的研究[J].中國(guó)輸血雜志，2014,27(11)：1170-1172.

·論著·

2017-07-24；

2017-08-24

河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題(20130134)

時(shí)卉麗(1978-)，女，河北元氏人，河北省血液中心副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事血液質(zhì)量安全、血站質(zhì)量管理研究。

R331.122

B

1007-3205(2017)11-1344-04

(本文編輯：劉斯靜)