譚陽陽 牛 墨 田 紅

（牡丹江出入境檢驗(yàn)檢疫局 黑龍江牡丹江 157022）

固相萃取-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測定蔬菜和食用菌中6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留

譚陽陽 牛 墨 田 紅

（牡丹江出入境檢驗(yàn)檢疫局 黑龍江牡丹江 157022）

建立了一種同時檢測蔬菜和食用菌中滅多威、克百威、速滅威、甲萘威、仲丁威和抗蚜威6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法。樣品通過乙腈提取，固相萃取小柱凈化，選用選擇離子掃描方式測定。6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在0.006～0.400mg/kg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2為0.995～0.9991），空白基質(zhì)樣品在添加3個水平0.020、0.050、0.100mg/kg的回收率為77.2%～96.5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=3）為2.7%～7.9%，方法檢出限可達(dá)0.002～0.004mg/kg。該方法靈敏度高，操作方便、快速，適用于實(shí)際樣品的測定。

蔬菜；食用菌；氨基甲酸酯類農(nóng)藥；固相萃?。籊C-MS

1 前言

氨基甲酸酯類農(nóng)藥是一類廣譜殺蟲劑，是以甲酸酯為前體化合物發(fā)展而來，具有分解快、殘留期短、高效、選擇性強(qiáng)等特點(diǎn)，主要應(yīng)用于糧食、蔬菜和水果上。20世紀(jì)70年代以來，由于有機(jī)氯農(nóng)藥相繼被不同國家禁用或者限制使用，以及抗有機(jī)磷農(nóng)藥的昆蟲品種日益增多，氨基甲酸酯類農(nóng)藥的使用量逐年增加[1]。國家標(biāo)準(zhǔn)中幾種主要氨基甲酸酯類農(nóng)藥在蔬菜中的限量為：滅多威0.2mg/kg、克百威0.02mg/kg、甲萘威1mg/kg、仲丁威0.05mg/kg和抗蚜威0.01mg/kg。

國內(nèi)外對氨基甲酸酯類農(nóng)藥的分析多采用液相柱后衍生法[2]、GC-MS[3-5]和LC-MS/MS[6，7]法。液相色譜柱后衍生法選擇性較差，易產(chǎn)生假陽性，且需衍生試劑，實(shí)驗(yàn)過程相對復(fù)雜；LC-MS/MS是檢測氨基甲酸酯類農(nóng)藥較好的方法，但是儀器價格太高，不利于普及；GC-MS法兼顧其他兩種方法的優(yōu)點(diǎn)，采用SIM法，不漏掉陽性樣品，能夠準(zhǔn)確定性和定量。但目前用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀同時測定蔬菜和食用菌中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的文獻(xiàn)較少。

本研究采用固相萃取和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，建立了同時測定蔬菜和食用菌中6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥（滅多威、克百威、速滅威、甲萘威、仲丁威和抗蚜威）殘留的方法，實(shí)際應(yīng)用效果良好，可滿足進(jìn)出口蔬菜和食用菌中多種氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量檢測的需要。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 試驗(yàn)樣品

白菜、黃瓜、胡蘿卜、金針菇、平菇、杏鮑菇：購自超市或農(nóng)貿(mào)市場。

2.1.2 試劑

乙腈、二氯甲烷、丙酮：均為色譜純，科密歐公司；氯化鈉、無水硫酸鈉：均為分析純，科密歐公司；6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥（滅多威、克百威、速滅威、甲萘威、仲丁威和抗蚜威）標(biāo)準(zhǔn)品：農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測所。

2.1.3 儀器

GCMS-QP2010PLUS氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀：日本Shimadzu公司；AL204-IC電子分析天平：瑞士梅特勒-托利多公司；T-25均質(zhì)器：德國IKA公司；NEVAP氮吹儀：美國Organomation公司；5804高速離心機(jī)：德國艾本德公司；RV10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：德國IKA公司。

2.2 方法

2.2.1 色譜條件

色譜柱：毛細(xì)管柱，HP-5 ms，30 mm×0.25 mm× 0.25 μm；進(jìn)樣口壓力：65.2 KPa；色譜柱溫度：80℃（3min）120℃（0min）260℃（3min）；進(jìn)樣口溫度：280℃；載氣：高純氦；進(jìn)樣量：1 μL。

2.2.2 質(zhì)譜條件

離子源：EI源；接口溫度：280℃；離子源溫度：230℃；溶劑延遲：6min；掃描方式：SIM。

2.2.3 操作步驟

2.2.3.1 制備與提取

新鮮樣品取500 g左右，初步切碎混勻（四分法取樣，蔬菜無需切得太碎，以免組織液汁流失）；取樣品20.0g（精確至0.01 g）于80mL離心管中，加40mL乙腈，用均質(zhì)器15 000 rpm勻漿提取1min；加入5～ 7 g氯化鈉，再勻漿提取1min；在8 000 rpm條件下離心5min，取上清液20mL，40℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約1mL，待凈化。

2.2.3.2 凈化

用丙酮和二氯甲烷混合液（1∶1，v/v）作為淋洗液。先用5mL淋洗液活化裝有2 cm高無水硫酸鈉的Carb/NH2固相萃取小柱；當(dāng)液面到達(dá)硫酸鈉的頂部時，迅速將樣品濃縮液（2.2.3.1）轉(zhuǎn)移至凈化柱上，然后用3×1mL淋洗液洗滌樣液瓶，并分別把洗滌液轉(zhuǎn)移到Carb/NH2柱上，再加入淋洗液12mL；收集所有流出物于50mL雞心瓶中，40℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，氮?dú)獯蹈桑?mL丙酮準(zhǔn)確定容；取1mL裝入上機(jī)瓶中，供氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀測定。

3 結(jié)果與討論

3.1 前處理?xiàng)l件優(yōu)化

3.1.1 提取方式

參照多個相關(guān)文獻(xiàn)中對蔬菜和食用菌中氨基甲酸酯類農(nóng)藥進(jìn)行提取，比較了均質(zhì)、超聲和振蕩提取方式，結(jié)果表明超聲提取比較耗時，振蕩提取不充分，均質(zhì)提取效果最好，故選擇均質(zhì)提取，然后離心的方式。

3.1.2 提取溶劑

氨基甲酸酯類農(nóng)藥多具有極性，易溶于極性有機(jī)溶劑，且多數(shù)食用菌含有多糖、嘌呤、核酸等物質(zhì)，而蔬菜中一般含有大量色素，前處理難度較高。丙酮對絕大多數(shù)農(nóng)藥的溶解度大，易把農(nóng)藥從樣品基質(zhì)中提取出來，但大量雜質(zhì)也被提取出來，給凈化帶來困難；乙酸乙酯提取效果不能令人滿意；采用乙腈作為提取溶劑進(jìn)行提取時，加入氯化鈉分層效果較好。通過對丙酮、乙酸乙酯和乙腈3種常用有機(jī)溶劑在除雜質(zhì)、色譜與固相萃取柱的兼容性和毒性等方面進(jìn)行比較，選擇乙腈作為本實(shí)驗(yàn)的提取溶劑。

3.1.3 固相萃取柱

常用的固相萃取柱有Carb/NH2柱、C18柱和佛羅里硅土小柱，C18柱在稱樣量＞4 g時回收率開始下降，Carb/NH2柱對雜質(zhì)的去除比佛羅里硅土小柱效果好，因此選擇Carb/NH2固相萃取柱。

3.2 氣相色譜-質(zhì)譜條件的優(yōu)化

方法采用選擇離子監(jiān)測方式（SIM）大大提高了各農(nóng)藥靈敏度，每種農(nóng)藥選擇4種離子檢測，根據(jù)保留時間和離子豐度比定性，峰面積定量。圖1為優(yōu)化的氣相色譜-質(zhì)譜條件下質(zhì)量濃度為0.2mg/L的6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥（滅多威、克百威、速滅威、甲萘威、仲丁威和抗蚜威）混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（黃瓜基質(zhì)）的選擇離子色譜圖。表1為這6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的保留時間和特征離子。

3.3 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)是質(zhì)譜進(jìn)行藥物殘留分析檢測時必須注意的問題，研究了以白菜、黃瓜、胡蘿卜、金針菇、平菇、杏鮑菇為空白基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液與溶劑配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液中6種農(nóng)藥 （質(zhì)量濃度均為0.1mg/L）峰面積之比來考察基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果表明基質(zhì)對6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥均有較強(qiáng)的基質(zhì)效應(yīng)。因此，本項(xiàng)目以不同樣品空白溶液配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從一定程度上消除基質(zhì)效應(yīng)對定量的影響。

圖1 6種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)選擇離子掃描（SIM）色譜圖

表1 6種農(nóng)藥的保留時間和特征離子

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線、方法回收率、精密度及檢出限

向空白黃瓜樣品中分別添加系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個水平平行測定3次，測定方法回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。同時以空白黃瓜樣品提取液配制系列標(biāo)準(zhǔn)曲線并測定繪制，以產(chǎn)生的3倍信噪比（S/N）時各農(nóng)藥的濃度作為該農(nóng)藥的檢出限（LOD）。各農(nóng)藥的線性范圍、相關(guān)系數(shù)、回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差及檢出限見表2，黃瓜基質(zhì)空白和添加回收提取圖譜見圖2、圖3。結(jié)果表明6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥（滅多威、克百威、速滅威、甲萘威、仲丁威和抗蚜威）在線性范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.995，檢出限能夠滿足國家標(biāo)準(zhǔn)限量要求。

表2 6種農(nóng)藥的線性范圍、相關(guān)系數(shù)、回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差及檢出限（n=3）

圖2 黃瓜空白樣品選擇離子掃描（SIM）色譜圖

圖3 黃瓜添加回收率加標(biāo)選擇離子掃描（SIM）色譜圖（加標(biāo)濃度0.02mg/kg）

3.5 方法應(yīng)用

從超市或農(nóng)貿(mào)市場中抽取白菜、黃瓜、胡蘿卜、金針菇、平菇、杏鮑菇6種常見蔬菜和食用菌，共6個樣品，按照實(shí)驗(yàn)方法測定這6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥，結(jié)果表明白菜有克百威檢出，其他樣品未檢出這6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥。

4 結(jié)論

本研究建立了蔬菜和食用菌中6種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測方法。考察了不同基質(zhì)效應(yīng)的影響，以不同樣品溶液配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，從一定程度上消除了基質(zhì)效應(yīng)對定量的影響。該方法具有操作簡單、分離效果好、線性范圍寬、回收率高、精密度好和分析效率高等特點(diǎn)，能滿足蔬菜和食用菌中6中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留檢測的要求。

[1] 李崇瑛，白亞之，鈕松召，等.食品中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的分析方法[J].分析科學(xué)學(xué)報，2007，23（6）：723-724.

[2] NY/T 761-2008蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定 第3部分：蔬菜和水果中氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定[S].

[3] GB/T 23216-2008食用菌中503種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法[S].

[4] GB/T 19648-2006水果和蔬菜中500中農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法[S].

[5] 仲岳桐，陳春曉，康莉.蔬菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測法[J].職業(yè)與健康，2010，26（3）：280-281.

[6] GB/T 23202-2008食用菌中404種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].

[7] GB/T 20769-2008水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].

Determination of Six Kinds of Carbamate Pesticides in Vegetables and Mushrooms By Solid Phase Extraction Coupled with Gas Chromatography-Mass Spectrometry

TAN Yangyang，NIU Mo，TIAN Hong
（Mudanjiang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Mudanjiang，Heilongjian，157022）

To establish a method fordetermination of Methomyl，Carbonfuran，Tsumacide，Carbaryl，F(xiàn)enobucarb，Pirimicarb in vegetables and mushrooms by gas chromatography-mass spectrometry（GC-MS）.The samples were extracted CH3-CN and cleaned with solid phase extraction，and the selected ion monitoring（SIM）mode was selected to quantify.The linear range was 0.006～0.400mg/kg，and the correlation coefficients were 0.9959～0.9991.The recoveries at three levels of 0.020、0.050、0.100mg/kg into blank matrix ranged from 77.2%～96.5%with the relative standarddeviations of 2.7%～7.9%.The limits ofdetection were in the range of 0.002～0.004mg/kg.This method is found to be sensitive fast and accurate.It can be used fordetermination of carbamate pesticides in vegetables and mushrooms.

Vegetables；Mushrooms；Carbamate Pesticides；Solid Phase Extraction；GC-MS

O657.6

E-mail：zhengshi9918@163.com

2017-04-20