楊劍鋒 鐘清蘭 熊熙
高濃度蛋白穿刺液直接涂片法與離心集菌涂片法鏡檢效果的研究*
楊劍鋒 鐘清蘭 熊熙
目的 應(yīng)用含高濃度蛋白穿刺液洗滌處理前后檢菌效果的對(duì)比觀察。方法 對(duì)2015年7月1日~2016年12月31日所有粘稠膿性穿刺液標(biāo)本118例進(jìn)行細(xì)菌學(xué)的常規(guī)涂片和培養(yǎng),同時(shí)對(duì)118例標(biāo)本進(jìn)行洗滌、離心集菌后涂片鏡檢,并平行進(jìn)行常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)。結(jié)果 118例粘稠膿性穿刺液標(biāo)本直接涂片革蘭染色檢出細(xì)菌36例,抗酸染色鏡檢無1例陽性。118例標(biāo)本經(jīng)洗滌、離心后涂片,革蘭染色鏡檢檢出細(xì)菌82例,檢出抗酸桿菌2例。洗滌、離心集菌涂片法鏡檢還發(fā)現(xiàn)漏檢了G-桿菌8例和G+球菌4例。洗滌、離心集菌涂片法的鏡檢陽性率與細(xì)菌培養(yǎng)具有高度的符合率。結(jié)論 洗滌、離心集菌涂片法可提高細(xì)菌檢出率,并避免漏檢,可為臨床醫(yī)生的診斷與治療提供極有價(jià)值的參考信息。
穿刺液 直接涂片法 離心聚菌涂片法 鏡檢
穿刺液是細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)最常采用的標(biāo)本,此類標(biāo)本只要檢測(cè)到細(xì)菌,臨床醫(yī)生就可確立感染的存在。然而,受多種因素的影響,無論是細(xì)菌培養(yǎng)還是涂片鏡檢都有較高的假陰性率。直接涂片法染色時(shí)涂膜容易被沖掉,且脫色不好,顯微鏡鏡檢背景太深,白細(xì)胞邊界不清,細(xì)胞著色太深,細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌乃至胞外細(xì)菌易被掩蓋,因而鏡檢陽性率不高,嚴(yán)重影響臨床診斷的確立與后續(xù)治療。通過比較直接涂片法和洗滌、離心集菌涂片法染色鏡檢的檢菌效果,認(rèn)為洗滌、離心集菌涂片法的鏡檢效果理想,現(xiàn)報(bào)道如下。
1 材料 2015年7月1日~2016年12月31日所有粘稠的膿性穿刺液標(biāo)本118例,標(biāo)本由臨床醫(yī)生按無菌操作技術(shù)采集后立即送檢,分別為膿液71例,分泌物13例,膽汁11例,引流液8例,腹水6例,切口分泌物6例,胸水2例,膿尿1例,分別以直接涂片和洗滌、離心集菌涂片法染色鏡檢,同時(shí)進(jìn)行常規(guī)細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)。兩種方法各涂片3張,1張革蘭染色,1張抗酸染色,第3張備用。
2 方法
2.1 直接涂片與檢菌:對(duì)臨床送檢的所有粘稠的膿性穿刺液標(biāo)本直接涂片,火焰固定,革蘭染色和抗酸染色鏡檢至少300個(gè)視野。
2.2 集菌涂片法與檢菌
2.2.1 集菌方法:①將穿刺液5 ml置于無菌試管,3 000 r/min離心10 min;用無菌吸管吸去上清液,留下細(xì)胞沉渣。②細(xì)胞沉渣加入0.9%氯化鈉注射液5 ml,顛倒混勻;第2次3 000 r/min離心10min;取出試管,吸去上清液,留下細(xì)胞沉渣。③細(xì)胞沉渣再加0.9%氯化鈉注射液5 ml,顛倒混勻,第3次3 000 r/min離心10 min;吸去上清液,留下細(xì)胞沉渣,震蕩混勻。
2.2.2 涂片:用接種環(huán)沾取一環(huán)細(xì)胞沉渣,點(diǎn)至載玻片上,推片或壓片(注意:力度不可太大),干燥,分別進(jìn)行革蘭染色和抗酸染色與檢菌。
3 細(xì)菌培養(yǎng) 標(biāo)本接種至血、巧克力、中國蘭和沙保弱瓊脂平板。血、巧克力瓊脂平板于35℃、5%CO2環(huán)境中培養(yǎng);中國蘭和沙保弱瓊脂平板于35℃、空氣環(huán)境培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
1 118例粘稠的膿性穿刺液標(biāo)本采用直接涂片革蘭染色鏡檢僅檢出細(xì)菌36例(陽性率30.51%,36/118),陰性率69.49%(82/118);抗酸染色鏡檢陽性率0。除直接涂片法革蘭染色36例使用洗滌、離心聚菌涂片法仍為陽性外,82例直接涂片鏡檢陰性者經(jīng)洗滌、離心集菌后涂片,革蘭染色鏡檢檢出細(xì)菌46例,即洗滌、離心聚菌涂片法革蘭染色的陽性率為69.49%(82/118),陰性率30.51%(36/118)。兩種涂片法鏡檢與細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果見表1。
表1 直接涂片法和洗滌離心集菌涂片法鏡檢與細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果
2 洗滌、離心聚菌涂片法革蘭染色發(fā)現(xiàn)不穩(wěn)定L型細(xì)菌5例,酵母樣孢子1例;抗酸染色鏡檢檢出抗酸桿菌2例。直接涂片法36例陽性標(biāo)本在洗滌、離心集菌涂片法鏡檢后發(fā)現(xiàn)了白細(xì)胞內(nèi)的G-桿菌8例,G+球菌4例,疑似放線菌1例。可見,直接涂片鏡檢法存在漏檢現(xiàn)象。
3 82例洗滌、離心集菌涂片法革蘭染色鏡檢陽性者經(jīng)普通細(xì)菌培養(yǎng)陽性(有細(xì)菌生長)的有46例,其余36例普通細(xì)菌培養(yǎng)陰性者中22例為厭氧菌(耳鼻喉膿腫與普外科腹腔膿液標(biāo)本),14例可能與取標(biāo)本前已使用抗菌藥物等有關(guān)。
標(biāo)本直接涂片的固定與蛋白含量有很大關(guān)系,過高或過低都不易固定。此時(shí)采用細(xì)胞沉渣涂片,標(biāo)本更容易被固定,更多標(biāo)本中的目的檢出物被涂在單位面積載玻片上,故能獲得很好的效果。洗滌、離心集菌涂片法可提高革蘭染色陽性率,可使直接涂片法革蘭染色的陽性率30.50%提高到69.49%,提高陽性率約39%。顯然,洗滌、離心聚菌涂片法用于含高蛋白體液標(biāo)本的鏡檢,相比直接涂片有助于避免醫(yī)生的誤診誤治,使患者得到及時(shí)而正確的治療,無疑具有重要的臨床實(shí)用價(jià)值。
直接涂片法抗酸染色陽性率為0,而洗滌、離心聚菌涂片法不但可檢出抗酸桿菌(1.69%),還可檢出白細(xì)胞內(nèi)的G-桿菌、G+球菌和放線菌等,從而避免直接涂片法的漏檢現(xiàn)象,為臨床醫(yī)生診斷細(xì)菌感染及后續(xù)進(jìn)行正確的抗感染治療提供了極有價(jià)值的參考依據(jù)。
本文36例直接涂片法革蘭染色陽性的標(biāo)本使用洗滌、離心聚菌涂片法也是陽性。因此,在平常的標(biāo)本檢測(cè)工作中,只需對(duì)直接涂片法陰性的標(biāo)本進(jìn)行洗滌、離心聚菌涂片法補(bǔ)充即可,這樣可達(dá)到快速(提高工作效率)、準(zhǔn)確(避免誤診誤治)的目的。
本文118例細(xì)菌培養(yǎng)陽性率只有38.98%,而洗滌、離心聚菌涂片法的陽性率則有69.49%,說明取樣前就可能在本院或他院進(jìn)行了抗菌藥物的經(jīng)驗(yàn)性治療。本文結(jié)果說明兩點(diǎn):抗菌藥物經(jīng)驗(yàn)治療前正確取樣非常必要,洗滌、離心聚菌涂片法可避免細(xì)菌培養(yǎng)的假陰性率,兩法形成互補(bǔ)。
雖然有學(xué)者[1]推薦差速離心集菌法,雖然陽性率提高了,但僅是集菌,細(xì)胞卻被丟棄了。本文采用的洗滌、離心集菌涂片法可將細(xì)胞和細(xì)菌更真實(shí)的保留下來,標(biāo)本更易被固定,能更真實(shí)的反映細(xì)菌與細(xì)胞之間的關(guān)系,有助于提高細(xì)菌檢出率,為臨床醫(yī)生的診斷與治療提供極有價(jià)值的參考信息。
由于胸水、腹水、淋巴液、關(guān)節(jié)液、前列腺液、膽汁等穿刺液蛋白質(zhì)含量較高。存在既不好固定,染色時(shí)涂膜又容易沖掉,且脫色不好、背景太深等問題。我科細(xì)菌室以前均采用直接涂片法鏡檢,雖然耗時(shí)少、操作簡單,但陽性率低。臨床檢驗(yàn)實(shí)踐中經(jīng)常出現(xiàn)直接涂片找到大量G+球菌,培養(yǎng)后卻無細(xì)菌生長或只有G-桿菌生長;有時(shí)則發(fā)生直接涂片未找到細(xì)菌,但細(xì)菌培養(yǎng)又有細(xì)菌生長的現(xiàn)象;有時(shí)遇到需要數(shù)日才長出慢生長細(xì)菌時(shí),還容易漏檢(如漏檢分枝桿菌、放線菌等)。
對(duì)無菌部位采集的穿刺液標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)是臨床細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)十分重要的項(xiàng)目,檢驗(yàn)中任何陽性結(jié)果對(duì)臨床診治都有重要的參考價(jià)值。由于直接涂片檢菌用時(shí)短,故條件較好的細(xì)菌室都會(huì)采用直接涂片檢菌陽性的結(jié)果作為危急值報(bào)告給臨床醫(yī)生[2-5]。由于此類標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果十分重要,因此探討適合細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的新方法,以提高細(xì)菌檢出陽性顯得十分重要。本文結(jié)果表明,與直接涂片法比較,洗滌、離心聚菌涂片法鏡檢高蛋白穿刺液具有陽性率高,可與直接涂片法和細(xì)菌培養(yǎng)形成有效的互補(bǔ),提高細(xì)菌檢出率,為臨床醫(yī)生的診斷和抗感染治療提供極有價(jià)值的參考信息,值得在各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)推廣應(yīng)用。
1 蔡靜清,張敏,張迎春.穿刺液差速離心抗酸茵涂片檢查效果觀察[J].河北醫(yī)學(xué),2010,16(10):1278-1280.
2 張敏,王寧,張迎春,等.穿刺液標(biāo)本差速離心與甩片方法檢菌效果觀察[J].河北醫(yī)學(xué),2012,18(1):71-73.
3 王輝,任健康,王明貴.臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)[M].北京,人民衛(wèi)生出版社,2015:6.
4 陳東科,孫長貴.實(shí)用臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)與圖譜[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:5.
5 齊桂娟,張敏.膿性穿刺液集菌涂片方法檢菌效果觀察[J].河北醫(yī)學(xué),2013,19(1):160-161.
R446.5
A
1671-2587(2017)05-0454-03
10.3969/j.issn.1671-2587.2017.05.013
*本課題受宜春市科技局2016年市科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.JXYC2016KSC043)資助
331100 江西省豐城市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科
楊劍鋒(1979–),男,江西豐城人,主管技師,學(xué)士,主要從事臨床檢驗(yàn)工作,(E-mail)fcslzb@163.com。
2017-03-20)
(本文編輯:王虹)