孫宇++張亮

近幾年來，隨著畜牧業(yè)規(guī)模的擴(kuò)大以及動(dòng)物疾病的頻發(fā)，常常使用獸藥提高生產(chǎn)效率、防治動(dòng)物疾病、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)，而不合理地使用和濫用獸藥及飼料藥物添加劑的現(xiàn)象也越來越嚴(yán)重，導(dǎo)致畜產(chǎn)品中獸藥殘留。畜產(chǎn)品中獸藥殘留不僅造成環(huán)境的污染，破壞生態(tài)平衡，給人類的健康帶來極大的危害，而且在國(guó)際貿(mào)易中，不僅影響畜產(chǎn)品品質(zhì)，給我國(guó)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，影響我國(guó)畜牧業(yè)的發(fā)展和出口創(chuàng)匯，更重要的是損害了我國(guó)畜產(chǎn)品在國(guó)際上的聲譽(yù)，影響我國(guó)畜產(chǎn)品在國(guó)際上的地位。

殘留獸藥的分類

目前，隨著現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)的規(guī)?；l(fā)展，獸藥的種類和應(yīng)用規(guī)模逐年遞增，食品法典委員會(huì)（CAC）按照功能將獸藥分為糖皮質(zhì)激素，生長(zhǎng)促進(jìn)劑，輔助生產(chǎn)劑，腎上腺受體激動(dòng)劑，β-受體阻斷劑，抗腸蟲劑，殺菌劑，殺蟲劑，抗原蟲劑，殺錐蟲劑，鎮(zhèn)靜劑等；根據(jù)殘留毒理學(xué)意義較大的獸藥按其用途分類主要包括：抗生素類，如鏈霉菌產(chǎn)生的廣譜抗生素——四環(huán)素，對(duì)革蘭氏菌具有較強(qiáng)抑制能力的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素以及β-內(nèi)酰胺類、氯霉素、氨基糖苷類等；合成抗菌素類，如目前最為常見的磺胺類藥物以及廣譜抗菌藥物——喹諾酮類等?？辜纳x類藥和殺蟲劑，如苯并咪唑類、阿維菌素類、咪唑并噻唑類等；生長(zhǎng)促進(jìn)劑，如克侖特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇、雌二醇等。

獸藥殘留檢測(cè)方法

現(xiàn)階段，我國(guó)畜產(chǎn)品中獸藥殘留問題十分嚴(yán)重，因此，畜產(chǎn)品中獸藥殘留的檢測(cè)是保障我國(guó)畜產(chǎn)品安全極為重要的問題。目前，國(guó)內(nèi)外檢測(cè)畜產(chǎn)品中獸藥殘留的方法主要有四大類，分別為免疫法、儀器法、生物傳感器法以及微生物法。

儀器檢測(cè)法。

（1）高效液相色譜技術(shù)（HPLC）及其聯(lián)用技術(shù)

高效液相色譜法利用不同物質(zhì)在不同相態(tài)中分配系數(shù)的不同，以流動(dòng)相對(duì)固定相中的待測(cè)物進(jìn)行洗脫，使柱內(nèi)各成分被分離，通過檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)被測(cè)樣品分析的一種色譜技術(shù)。由于具有分離效率高、選擇性好、特異性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，在畜產(chǎn)品獸藥殘留測(cè)定中的廣泛應(yīng)用。Stoev建立了畜產(chǎn)品中10種常用磺胺類藥物的HPLC-FLD檢測(cè)法，最低檢測(cè)限可達(dá)1～5μg/kg。謝愷舟等將高效液相色譜與熒光檢測(cè)技術(shù)聯(lián)用，對(duì)雞蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留量進(jìn)行檢測(cè)，該方法線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.999以上。

（2）氣相色譜技術(shù)（GC）及其聯(lián)用技術(shù)

氣相色譜法是利用各組分在流動(dòng)相和固定相之間分配系數(shù)的差異，進(jìn)行分離與分析的色譜技術(shù)，該方法具有分離效率高、分析速度快、靈敏度高、樣品用量小等優(yōu)點(diǎn)，自20世紀(jì)60年代氣相色譜應(yīng)用于農(nóng)藥和藥物殘留分析以來，大大提高了農(nóng)獸藥殘留量的檢測(cè)水平。目前，該法已成為最典型、應(yīng)用最廣的分析方法。張英宣采用GC法測(cè)定雞蛋中氯霉素的藥物殘留量，該方法在1～300ng/ml范圍內(nèi)氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積與濃度線性關(guān)系良好，回收率達(dá)93.4%。

（3）薄層色譜法（TLC）

薄層色譜法是利用各成分對(duì)同一吸附劑吸附能力不同，使在移動(dòng)相流過固定相的過程中，連續(xù)的產(chǎn)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達(dá)到各成分互相分離的目的。該方法是一種簡(jiǎn)便、快速的傳統(tǒng)色譜分析方法，它可同時(shí)測(cè)定多個(gè)樣品、分析成本低，但重現(xiàn)性不好、靈敏度及分辨率不及GC和HPLC，使它在獸藥多殘留分析中的應(yīng)用受到限制。Gerry J.Reimen等建立了檢測(cè)鮭魚中磺胺嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲嘧啶等5種磺胺藥的TLC方法，檢測(cè)限可達(dá)0.136μg/mL。

免疫學(xué)檢測(cè)法。免疫學(xué)檢測(cè)法是利用抗原抗體特異性反應(yīng)檢測(cè)各種物質(zhì)的技術(shù)。該方法在獸藥殘留檢測(cè)中具有非常突出的優(yōu)勢(shì)。免疫方法適用于大量樣本的快速分析、靈敏度高、成本低，不需要昂貴復(fù)雜的儀器，能夠滿足畜產(chǎn)品獸藥殘留現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的需要。近年來，免疫學(xué)檢測(cè)方法，尤其是酶聯(lián)免疫吸附法廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥和獸藥的快速篩選殘留檢測(cè)。

（1）酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

酶聯(lián)免疫法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗體或抗原在固相表面進(jìn)行反應(yīng)的技術(shù)，通過酶與底物發(fā)生顏色反應(yīng)來定量測(cè)定抗原或抗體量的一種方法。隨著該技術(shù)的不斷完善和成熟，目前ELISA方法在農(nóng)藥殘留檢測(cè)的免疫方法中占到了90%以上。Jester Edward等應(yīng)用ELISA試劑盒對(duì)魚肉樣品中硝基呋喃類藥物殘留進(jìn)行檢測(cè)，并將檢測(cè)結(jié)果與LC-MS-MS檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，相對(duì)偏差范圍在1.8%～7.6%。兩種分析物在魚肉中的最低檢出限分別達(dá)到0.05ng/g和0.2ng/g。蔡勤仁等在制備恩諾沙星的單克隆抗體的基礎(chǔ)上，建立了間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，靈敏度為0.13ng/ml。

（2）膠體金免疫法（CGIA）

膠體金免疫法是待測(cè)樣品與固定在試紙條上的膠體金標(biāo)記抗體相結(jié)合產(chǎn)生高特異性、高親和免疫反應(yīng)，由于膠體金顆粒具有高電子密度的特性，樣品會(huì)滯留并富集在檢測(cè)區(qū)域，出現(xiàn)呈色現(xiàn)象。該方法直接根據(jù)顯色結(jié)果進(jìn)行定性分析，無需其他衍生步驟，適宜于藥物殘留的快速初篩。Verheijen等研制了磺胺二甲嘧啶（SM2）膠體金快速檢測(cè)試紙條用于檢測(cè)SM2標(biāo)準(zhǔn)液和牛尿樣本，制備的試紙條檢測(cè)限為10.0ng/mL，對(duì)稀釋后的新鮮牛奶進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)限為20.0ng/mL。Li SQ等則在納米金顆粒上聯(lián)結(jié)單抗，制備納米金探針對(duì)肉類和飼料樣品中硝基呋喃代謝物AMOZ進(jìn)行快速篩選和檢測(cè)，開發(fā)了一種競(jìng)爭(zhēng)性免疫層析測(cè)定方法。

（3）放射性免疫法（RIA）

放射免疫分析法是采用放射性受體競(jìng)爭(zhēng)的原理快速檢測(cè)畜產(chǎn)品獸藥殘留的方法。此法樣品前處理簡(jiǎn)便，可以檢測(cè)磺胺類總殘留總量，適用于初篩分析。

（4）化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）

化學(xué)發(fā)光免疫分析法是基于化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度和被測(cè)物含量之間的關(guān)系建立起來的一種分析方法。CLIA用于獸藥殘留檢測(cè)的方式與ELISA方法類似，采用直接法檢測(cè)或間接法檢測(cè)。目前，CLIA法能夠檢測(cè)動(dòng)物組織中的克倫特羅、磺胺類等藥物。

微生物檢測(cè)法。微生物抑制分析法是根據(jù)藥物對(duì)特異微生物的抑制作用來定性分析樣品中藥物殘留。該法樣品處理簡(jiǎn)便，回收率高，不需特殊設(shè)備，適用于獸藥殘留大量分析的篩選，現(xiàn)已作為一種快速有效的獸藥殘留初篩方法被廣泛使用。近年來，我國(guó)不少學(xué)者相繼以特異性微生物為工作菌，用杯碟法或圓濾紙片法測(cè)定畜產(chǎn)品或其組織中的抗生素殘留。但是微生物法靈敏度和精確度較低，缺乏特異性，只適用于抗生素總殘留的測(cè)定，且易受到其他抗生素的干擾，故需要借助免疫法和儀器分析法等加以確定。

生物傳感器檢測(cè)法。生物傳感器是由固定化的生物敏感材料作識(shí)別元件（包括酶、抗體、抗原、微生物、細(xì)胞、組織、核酸等生物活性物質(zhì)）與適當(dāng)?shù)睦砘瘬Q能器相結(jié)合，通過光、熱、聲音、顏色等信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)榭啥康碾娦盘?hào)從而快速檢測(cè)抗原、抗體、維生素、蛋白質(zhì)等物質(zhì)的一種新型器件。該方法具有選擇性好、精度高、分析速度快、成本低、并且可實(shí)現(xiàn)在線連續(xù)監(jiān)測(cè)。Haasnoot等以單克隆抗體為基礎(chǔ)，建立了生物傳感器免疫方法實(shí)現(xiàn)對(duì)雞血漿中8種磺胺類藥物的檢測(cè)。Thompson等利用光學(xué)免疫傳感器建立了多種畜產(chǎn)品中硝基咪唑類藥物的多殘留測(cè)定方法。

展望

隨著公眾對(duì)食品安全關(guān)注度的提升，以及國(guó)際貿(mào)易對(duì)食品安全要求的日益嚴(yán)格，畜產(chǎn)品中的獸藥殘留問題也愈來愈受到社會(huì)各界的關(guān)注。獸藥的殘留問題不僅會(huì)對(duì)人們身體健康造成影響，還會(huì)制約畜牧行業(yè)的正常發(fā)展。因此，必須加大宣傳引導(dǎo)，增強(qiáng)大家的法制觀念，從根本上控制獸藥的亂加濫用，加強(qiáng)對(duì)獸藥生產(chǎn)和使用的管理，同時(shí)完善獸藥殘留的檢測(cè)體系，最終實(shí)現(xiàn)獸藥存留問題的有效控制。

基金項(xiàng)目：糧油食品深加工吉林省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室科研項(xiàng)目（2016019）；吉林工商學(xué)院科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（ LZ2016007）。endprint