范建華，楊蘊(yùn)蕾，顧華兵，蔣一秀，李尚民，竇新紅*

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽所，江蘇揚(yáng)州 225125；2.上海復(fù)振物科技有限公司 200437)

中藥復(fù)方消毒劑對雞舍內(nèi)空氣浮游菌殺滅和有害氣體降解的試驗(yàn)研究

范建華1，楊蘊(yùn)蕾2，顧華兵1，蔣一秀1，李尚民1，竇新紅1*

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽所，江蘇揚(yáng)州 225125；2.上海復(fù)振物科技有限公司 200437)

為了解國內(nèi)某廠家生產(chǎn)的植物源中藥復(fù)方消毒劑對雞舍現(xiàn)場空氣沉降菌和有害氣體的降解效果。隨機(jī)選用5間雞舍，3間分別使用濃度為1∶500、1∶1000的中藥消毒劑和百毒殺進(jìn)行空氣消毒，2間為飲用水噴霧對照和空白對照，試驗(yàn)重復(fù)3次，每次設(shè)計(jì)消毒前1 h，消毒后1、4、10和24 h五個時間監(jiān)測點(diǎn)，采用了細(xì)菌自然沉降法和有害氣體檢測儀對雞舍內(nèi)空氣浮游菌含量和氨氣、硫化氫等有害氣體進(jìn)行了檢測，同時還挑選5個養(yǎng)殖工人對雞舍內(nèi)除臭效果感官評分。2個濃度的中藥消毒劑，在消毒后4 h，殺菌率分別達(dá)到95.88%和97.32%，消毒后10 h殺菌率最高，分別為95.07%和99.12%，消毒后24 h殺菌率仍維持90%以上(90%殺菌率為消毒劑合格線)。1∶500濃度要優(yōu)于1∶1000濃度，但二者間差異不顯著(Pgt;0.05)。與消毒前1 h比較，2個濃度的消毒劑四個時間段(消毒后1、4、10和24 h)對氨氣和硫化氫的降解，均差異顯著(Plt;0.05)；對照消毒劑百毒殺在消毒后1 h殺菌率即達(dá)到90%以上，并且持續(xù)至24 h后，但對氨氣和硫化氫的降解不明顯，僅在消毒后10 h顯著差異(Plt;0.05)；飲用水對照組在噴霧1 h后，殺菌率為12.17%，其后3個時間段都在1%以內(nèi)，對對氨氣和硫化氫的降解幾乎無影響。消毒24 h后，通過養(yǎng)殖工人感官評判，1∶500稀釋的中藥消毒劑效果最佳，可判定為0級，1∶1000濃度試驗(yàn)消毒劑組、百毒殺組、飲用水對照組和空白對照組均判定為1級，但藥物組明顯優(yōu)于對照組。試驗(yàn)設(shè)計(jì)的中藥消毒劑對雞舍內(nèi)環(huán)境有顯著改善作用。

中藥復(fù)方消毒劑；沉降菌；降解

雞舍空氣中浮游有害菌和糞污發(fā)酵產(chǎn)生的氨氣、硫化氫等有害氣體是造成雞病發(fā)生和傳播的一個重要因素，同時對周邊居民生活環(huán)境也帶來一定威脅[1]。目前控制雞舍氣溶膠載菌和降低有害氣體排放的主要措施是加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，改善舍內(nèi)通風(fēng)換氣條件，增加有害氣體排放；飼料中適量添加微生態(tài)制劑，提高飼料轉(zhuǎn)化率，從源頭減少有害氣體產(chǎn)生；以及適時向舍內(nèi)噴灑生物抑菌除臭制劑和消毒劑等[2]。

隨著養(yǎng)殖戶對“防病重于治病”意識的逐步提高，消毒劑的使用在實(shí)際養(yǎng)雞生產(chǎn)中越來越顯得普遍和尤為重要[3]。然而，現(xiàn)階段常用的消毒劑多為化學(xué)性消毒劑，多數(shù)存在腐蝕性大、刺激性強(qiáng)，以及耐藥性頻率高等諸多不良特點(diǎn)[4]。因此，現(xiàn)階段積極研究和開發(fā)高效、低毒、無殘留的化學(xué)性消毒劑替代品，具有廣闊的前景和市場。

中藥是我國的自然瑰寶，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究已證明，許多中藥制劑具有殺滅病原微生物和改善異味功能[5]。鑒于此，本研究將蘆薈、苦楝、麻籽、皂莢等多味中藥提取液，根據(jù)中醫(yī)藥配伍理論，采用現(xiàn)代復(fù)配技術(shù)，精煉而成的純天然植物源消毒劑。試驗(yàn)嘗試用于雞舍現(xiàn)場環(huán)境消毒，旨在為今后進(jìn)一步開發(fā)綠色、新型獸用消毒劑提供參考和依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品 受試藥：植物源中藥復(fù)配消毒劑溶液，由上海復(fù)振科技有限公司提供，規(guī)格1000 mL；對照藥：百毒殺(10%癸甲溴銨溶液)，購自上海派斯德生化有限公司，產(chǎn)品批號111242，規(guī)格500 mL。

1.1.2 檢測培養(yǎng)基 空氣沉降菌檢測用TSA培養(yǎng)基平板(9 cm)，購自上海生工生物工程有限公司。

1.1.3 試驗(yàn)器材 恒溫培養(yǎng)箱(HH-B型，天津試驗(yàn)儀器廠)、高壓滅菌鍋(SP300F，上海人和科學(xué)儀器有限公司)、氨氣和硫化氫二合一便攜式檢測儀(KT602，廣州市白云區(qū)同和上林電子儀器商行)，由家禽研究所自行提供。

1.1.4 試驗(yàn)雞及雞舍 家禽所試驗(yàn)蛋雞場，隨機(jī)選試驗(yàn)雞舍5間，每間飼養(yǎng)108日齡綠殼蛋雞3000只，階梯式籠具飼養(yǎng)。雞舍長110 m，寬12 m，自動化喂料、飲水和處理雞糞。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組 試驗(yàn)設(shè)計(jì)5個組別，即對應(yīng)5間雞舍進(jìn)行消毒除臭試驗(yàn)，并重復(fù)3次。2間用于試驗(yàn)藥物，按照廠家推薦濃度，用自然飲用水分別稀釋至1∶500和1∶1000。1間用于對照藥物，按照說明書規(guī)定1∶600濃度稀釋。另外2間分別作為飲用水噴霧對照和空白對照。具體藥物使用方法及分組情況見表1。

表1 試驗(yàn)分組Tab 1 The test groups

1.2.2 樣品采集 樣品采集點(diǎn)按照GB/T 18204.3-2013[6]要求進(jìn)行。在雞舍中間位置設(shè)置1個采集點(diǎn)(離地面1.5 m，離兩邊寬4 m)，在四分之一區(qū)域中間位置再設(shè)置4個采集點(diǎn)(離地面1.5 m，離兩邊寬6 m)，一共設(shè)置5個樣品采集點(diǎn)采集有害菌和有害氣體，如圖1所示。有害菌采集利用TSA一次性平板培養(yǎng)基，在樣品采集點(diǎn)打開蓋子放置5 min后，立即封蓋，并于冷藏包冷藏備用。每個采集點(diǎn)放置1個平板培養(yǎng)基。

圖1 樣品采集點(diǎn)設(shè)置方法Fig 1 Sampling point setting method

1.2.3 消毒處理 消毒劑和對照飲用水按照表1方法進(jìn)行噴霧消毒，統(tǒng)計(jì)消毒前1 h、消毒后1、4、10、24 h四個時間段實(shí)際平板統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)和雞舍氨氣、硫化氫等有害氣體的濃度差異。

1.2.4 殺菌率統(tǒng)計(jì)及消毒效果判定 采集回的平板培養(yǎng)基于37±0.5 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)16～18 h后，計(jì)數(shù)實(shí)際平板培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，按照奧式公式[7]計(jì)算：C=5000N/AT(C表示每立方米菌落數(shù)；N表示每皿菌落數(shù)；A表示培養(yǎng)皿面積cm2；T表示采樣時間min)。根據(jù)菌落計(jì)數(shù)結(jié)果，計(jì)算殺菌率。殺菌率=[(消毒前菌落數(shù)-消毒后菌落數(shù))/消毒前菌落數(shù)]×100%。殺菌率達(dá)90%以上者，判為消毒劑合格。

1.2.5 有害氣體監(jiān)測及除臭效果判定 有害氣體直接采用氨氣和硫化氫二合一便攜式檢測儀進(jìn)行監(jiān)測。消毒24 h后，請5位養(yǎng)殖工人對雞舍除臭效果進(jìn)行感官評分。判定分6個等級，即0級，無臭(80～100分)；1級，稍感覺有臭氣(60～80分)；2級，能感覺有弱臭(40～60分)；3級：明顯感到臭氣(20～40分)；4級：強(qiáng)臭氣(帶有刺激感)(0～20分)；5級：強(qiáng)烈臭氣(有嘔吐、流淚等感覺)(0分)。

1.2.6 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 所有數(shù)據(jù)采用SPASS 11.6軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 消毒殺菌效果 消毒劑的現(xiàn)場殺菌消毒效果往往受雞舍內(nèi)通風(fēng)條件、溫濕度、浮游菌酸堿度和有機(jī)質(zhì)含量等參數(shù)影響[8]，因此不同的消毒時間和不同的消毒空間，消毒效果是不一樣的。由表2和圖1顯示，試驗(yàn)消毒劑和對照消毒劑在消毒后1 h能迅速顯效，在消毒后4 h殺菌率分別達(dá)到95.88%、97.32%和94.28%，在消毒后10 h達(dá)到峰值，然而隨著消毒時間延長，消毒效果逐漸減弱，但在消毒后24 h殺菌率仍然在90%以上；試驗(yàn)消毒劑1∶500稀釋濃度要優(yōu)于1∶1000濃度，但各消毒時間差異不顯著(Pgt;0.05)。對照消毒劑在短時間內(nèi)顯效更快，在消毒1 h后殺菌率就達(dá)到91.05%，與其他組別差異顯著(Plt;0.05)，在消毒24 h后仍然維持95.33%的較高消毒水平。飲用水噴霧對照組消毒后1 h殺菌率為12.17%，但其后3個時間段殺菌率均在1%以內(nèi)。

表2 消毒劑對雞舍空氣沉降菌消毒殺滅效果Tab 2 The efficacy of disinfectant to air bacteria killing in henhouse

本表僅將試驗(yàn)消毒劑和對照消毒劑進(jìn)行比較。試驗(yàn)消毒劑和對照消毒劑同一作用時間的殺菌率同肩字母表示差異不顯著(Pgt;0.05)，反之不同肩表示差異顯著(Plt;0.05)

This table compares only the test disinfectants and the control disinfectants. There was no significant difference if the shoulder letters was the same at the same disinfection time (P gt; 0.05),but the difference of the shoulder was significant (P lt; 0.05)

圖2 中藥消毒劑殺菌消毒效果Fig 2 The efficacy of the Chinese herbal compound disinfectant to air bacteria killing

2.2 有害氣體降解效果 雞舍內(nèi)臭味主要是由雞糞及其他微生物發(fā)酵后產(chǎn)生的氨氣和硫化氫等有害氣體造成[9]，因此對舍內(nèi)有害氣體的消解對提高雞生產(chǎn)性能有重要意義。表3結(jié)果顯示，無論是試驗(yàn)消毒劑，還是對照消毒劑，在消毒后1、4、10和24 h與消毒前1 h比較，對氨氣和硫化氫兩種有害氣體都有一定的降解效果，但均隨著使用時間延長，消毒效果逐漸消退。對照消毒劑效果較差，僅

在消毒后10 h和24 h才現(xiàn)顯著消毒效果。飲用水噴霧對照組幾乎對氨氣和硫化氫的降解無影響；除消毒前1 h外，無論是對照消毒劑，還是對照噴霧飲用水，在同一時間段，對有氨氣和硫化氫的降解，與2個濃度的試驗(yàn)消毒劑比較，差異顯著(Plt;0.05)；試驗(yàn)消毒劑1∶500濃度與1∶1000濃度比較，在消毒4 h后，對氨氣和硫化氫降解指數(shù)明顯小于前者，藥效略佳，但差異不顯著(Pgt;0.05)。

表3 消毒劑對雞舍有害氣體降解效果Tab 3 The efficacy of disinfectant to harmful gas in henhouse

續(xù)表

本表僅是將對照消毒劑和飲用水與與試驗(yàn)消毒劑在同一作用時間進(jìn)行比較。肩頭帶"*"，表示差異不顯著(Pgt;0.05)，反之表示差異顯著(Plt;0.05)

This table is a comparison of the control disinfectant and drinking water with the test disinfectant at the same disinfection time.There was no significant difference if the shoulder with "*"(P gt; 0.05), but the difference was significant (P lt; 0.05)

2.3 感官除臭效果判定結(jié)果 根據(jù)5位評分員的感官評分結(jié)果，試驗(yàn)消毒劑和對照消毒劑均有一定的除臭效果，但試驗(yàn)消毒劑明顯優(yōu)于對照組，且1∶500稀釋度的試驗(yàn)消毒劑效果最佳，在消毒24 h后可判定為0級，1∶1000稀釋度的試驗(yàn)消毒劑、百毒殺組和飲用水組，以及空白對照組，則判定為1級。所有藥物組明顯要好于飲水噴霧和空白對照組，具體見表4。

表4 評分員對雞舍感官評分結(jié)果Tab 4 The score of sensory evaluation of raters to the henhouse

3 討論與小結(jié)

植物源中藥是我國的傳統(tǒng)國粹，許多中草藥的活性成分能直接抑制或殺滅病原微生物，誘生干擾素，改變細(xì)菌、真菌細(xì)胞膜的通透性，干擾部分病毒復(fù)制所需的酶[10]。因此利用我國豐富的中藥資源，積極開發(fā)中藥消毒劑，將是提升我國獸用消毒劑企業(yè)產(chǎn)品核心競爭力的一次良好契機(jī)。

近年來，關(guān)于中藥消毒劑的研究與應(yīng)用報(bào)道越來越多。如胡曉蕙[11]等對一種主要由野菊花、厚樸、蒼術(shù)、金銀花、牛蒡子、辛夷等制成的水提劑預(yù)防上呼吸道感染進(jìn)行觀察。結(jié)果表明有體外直接抗CBV3、CBV5的作用，從而滅活或減少空氣中的病原微生物，可降低上呼吸道感染發(fā)病率；王淑云[12]等研究的由藿香、艾葉、蒼術(shù)、石決明、佩蘭等12味藥物組成的復(fù)方消毒劑，應(yīng)用結(jié)果表明，該消毒劑對醫(yī)院手術(shù)室、病房、治療室等場地具有較好的消毒效果，殺菌率達(dá)86.1%，對培養(yǎng)菌株金黃色葡萄球菌與大腸桿菌的空間和表面消毒，同樣具有較強(qiáng)的殺菌作用。

本次試驗(yàn)設(shè)計(jì)的中藥消毒劑，其主要成分為蘆薈、苦楝、麻籽、皂莢、苦參根、大青葉等多種植物中提取有效成分，其中苦楝、麻籽、苦參根、大青葉等含有豐富的生物堿和植物多酚等活性成分，能夠抑制細(xì)菌和真菌等生物酶合成過程，迅速穿透和崩解細(xì)菌細(xì)胞壁，還能干擾某些腸道和呼吸道寄生病毒的RNA合成；蘆薈和皂莢分別含有蘆薈苷和皂苷，是優(yōu)良的表面活性去污因子，具有良好的滲透能力和去污能力。其水溶液在振搖時能產(chǎn)生大量持久的蜂窩狀泡沫，可以乳化油脂，有效去除污垢，在實(shí)際消毒過程中，能夠有效地防止有機(jī)質(zhì)對其他中草藥消毒效果的破壞。試驗(yàn)消毒劑按1∶500和1∶1000稀釋，進(jìn)行雞舍帶雞噴霧消毒，4 h后對空氣中浮游菌的殺菌率均達(dá)到了90%以上，但1∶500濃度略佳，與對照消毒劑百毒殺療效相當(dāng)。飲用水噴霧對照組，在噴霧1 h后殺菌率為12.17%，可能是噴霧后的霧滴在短時間內(nèi)形成的包膜，迅速隨粉塵沉降，降低了空氣浮游菌數(shù)或霧滴本身形成的表面張力，崩解了少量的浮游菌。

傳統(tǒng)觀念多數(shù)認(rèn)為消毒劑主要是殺菌消毒效果[13]，然而本試驗(yàn)用消毒劑中還含有柑橘果皮和金錢松根皮等中藥，柑橘果皮和金錢松根皮是較好的去味因子，經(jīng)霧化后，霧化液滴具有很大的表面能，能有效地吸附、絡(luò)合空氣中的氨氣和硫化氫等異味分子，同時也能使被吸附的異味分子的立體構(gòu)型發(fā)生改變，削弱了異味分子中的化合鍵，使得異味分子的不穩(wěn)定性增加，容易與其他分子進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，最后生成無味、無毒的有機(jī)鹽，從而達(dá)到異味凈化和降解的目的。試驗(yàn)證明，中藥消毒劑的兩個濃度梯度，在消毒后4個時間監(jiān)測點(diǎn)，均對雞舍內(nèi)氨氣和硫化氫等有害氣體有顯著降解作用，而且通過5位養(yǎng)殖工人的感官效果判定，確實(shí)對雞舍內(nèi)有明顯除臭功效，但飲用水對照和百毒殺消毒劑對照效用不明顯，從而也充分說明了中藥消毒劑的優(yōu)越性。

綜合以上試驗(yàn)結(jié)果，兼顧實(shí)際使用成本，建議試驗(yàn)設(shè)計(jì)的中藥消毒劑用于雞場雞舍的最佳消毒方法為，用飲用水1∶500倍稀釋，200 mL/m2的劑量，帶雞持續(xù)噴霧消毒10 min，1周3次，對雞舍內(nèi)環(huán)境有較好的改善作用。

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(編輯：陳希)

TheStudyonEffectofChineseHerbalCompoundDisinfectanttoAirBacteriaKillingandDegradationofHarmfulGasesinaHenhouse

FAN Jian-hua1, YANG Yun-lei2, GU Hua-bing1, JIANG Yi-xiu1, LI Shang-min1, DOU Xin-hong1*

(1.Poultryinstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Yangzhou,Jiangsu225125China;2.ShanghaiFuzhenTechnologyCo.,Ltd,Shanghai200437China)

DOUXin-hong,E-mail:douxinhong611@163.com

To study the effect of the Chinese herbal compound disinfectant from a domestic manufacturers to air bacteria killing and degradation of harmful gases. 5 henhouse were selected randomly disinfection, 3 house respectively with a concentration of 1∶500, 1∶1000 Chinese herbal compound disinfectant and Baidusha air disinfection, 2 for drinking water spray control and blank control. The experiment was repeated 3 times, and each was designed 1 h before, 1,4,10 and 24 h five time monitoring points to detect the content of air bacteria, ammonia and hydrogen sulfide, using the bacterial natural sedimentation and harmful gas detection instrument. And 5 breeding workers were selected to sensory testing on the effect of deodorization. The 2 concentration of Chinese medicine disinfectant sterilization rate reached 95.88% and 97.32% respectively after 4 h disinfection, 10 h after were 95.07% and 99.12%, and 24 h after remained above 90% (90% disinfectant sterilization rate is pass line). The concentration of 1∶500 was better than that of 1∶1000, but there was no significant difference between the two groups (Pgt;0.05). Compared with 1 h before disinfection, the degradation of ammonia and hydrogen sulfide (1,4,10 and 24 h) of 2 concentrations of disinfectants for four time periods were significantly different (Plt;0.05). The sterilization rate of the control disinfectant Baidusha reached 90% after 1 h disinfection and continued to 24 h after, but the degradation of ammonia and hydrogen sulfide was not obvious, only after disinfection 10 h significant difference (Plt;0.05). The sterilization rate of drinking water group was 12.17% after spray 1 h, bur the follow of three periods were within 1%, and almost no effect on the degradation of ammonia and hydrogen sulfide. According to the sensory evaluation of the workers, the concentration of 1∶500 Chinese medicine disinfectant was the best, judged to be 0, and other groups were determined as 1. The drug groups was superior to the control group. The experimental results proved the disinfectant has significant effect on improving the henhouse environment.

the Chinese herbal compound disinfectant; settlement bacteria; degradation

10.11751/ISSN.1002-1280.2017.11.06

2017-03-13

A

1002-1280 (2017) 11-0036-08

S853.7

江蘇省農(nóng)業(yè)三新工程項(xiàng)目[SXGC(2016)291]

范建華，博士，從事獸醫(yī)藥理和毒理學(xué)學(xué)研究。E-mail：jqsfjh@hotmail.com

竇新紅。E-mail:douxinhong611@163.com