曾 強(qiáng) ，孫潤(rùn)峰 ，李 澤 ，2，翟利琴 ，2，劉明哲 ，郭相杰 ，高彩榮

（1.山西醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院法醫(yī)病理教研室，山西 太原 030001；2.山西省人民醫(yī)院，山西 太原 030012）

proBNP和NT-proBNP在冠心病猝死者體內(nèi)的表達(dá)

曾 強(qiáng)1，孫潤(rùn)峰1，李 澤1，2，翟利琴1，2，劉明哲1，郭相杰1，高彩榮1

（1.山西醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院法醫(yī)病理教研室，山西 太原 030001；2.山西省人民醫(yī)院，山西 太原 030012）

目的研究冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ㄒ韵潞?jiǎn)稱冠心病）猝死者體內(nèi)腦鈉肽前體（pro-brain natriuretic peptide，proBNP）、N 端腦鈉肽前體（N-terminal pro-brain natriuretic peptide，NT-proBNP）的表達(dá)變化，探討其在冠心病猝死法醫(yī)學(xué)診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法取正常對(duì)照組、冠心病猝死組及單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組（每組各20例）心肌及心血樣本。運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色、Western印跡法檢測(cè)心肌樣本中proBNP的表達(dá)，采用逆轉(zhuǎn)錄PCR（reverse transcription PCR，RT-PCR）技術(shù)檢測(cè)BNP mRNA的表達(dá)，采用ELISA法檢測(cè)血漿中NT-proBNP的含量。結(jié)果冠心病猝死組、單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組心肌組織中proBNP免疫組織化學(xué)染色均為陽(yáng)性表達(dá)，正常對(duì)照組無陽(yáng)性染色。冠心病猝死組、單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組心肌組織內(nèi)proBNP蛋白、BNP mRNA相對(duì)表達(dá)量、血漿內(nèi)NT-proBNP的含量較正常對(duì)照組升高（P＜0.05）。冠心病猝死組血漿內(nèi)NT-proBNP含量高于單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組（P＜0.05）。結(jié)論心肌缺血時(shí)心肌細(xì)胞內(nèi)的proBNP表達(dá)升高，測(cè)定血漿中NT-proBNP有助于判斷冠心病的嚴(yán)重程度及鑒別冠心病猝死。

法醫(yī)病理學(xué)；猝死；冠心??；腦鈉肽前體；N端腦鈉肽前體

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病（coronary atherosclerotic heart disease，以下簡(jiǎn)稱冠心?。┦切呐K性猝死中常見的原因之一，以往對(duì)心肌損傷及冠心病猝死的法醫(yī)學(xué)鑒定多從形態(tài)學(xué)方面入手，有時(shí)缺乏特異性。當(dāng)死者伴有冠狀動(dòng)脈高度狹窄但仍懷疑由其他非心臟性原因致死時(shí)，難以鑒別死因。目前，腦鈉肽（brain natriuretic peptide，BNP）的應(yīng)用意義已超出了原先僅作為心力衰竭診斷指標(biāo)[1]的范疇。有研究[2]表明，BNP在心肌組織中的表達(dá)量能反映冠心病猝死者生前的心功能狀態(tài)。腦鈉肽前體（pro-brain natriuretic peptide，proBNP）為BNP的前體形式，由108個(gè)氨基酸構(gòu)成，心肌細(xì)胞首先在胞內(nèi)合成proBNP，然后通過高爾基體運(yùn)輸分泌出胞，進(jìn)而裂解為BNP和N端腦鈉肽前體（N-terminal pro-brain natriuretic peptide，NT-proBNP）。NT-proBNP是伴隨BNP分子同時(shí)生成的一種無生物學(xué)活性的多肽，已與BNP一同在臨床診斷心力衰竭時(shí)應(yīng)用[3]。目前在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)roBNP及NT-proBNP的研究較少，因此本實(shí)驗(yàn)以死者心肌組織及心血作為研究對(duì)象，研究冠心病猝死者心肌組織中proBNP以及其血漿中NT-proBNP的表達(dá)及變化規(guī)律，以探討proBNP及NT-proBNP在冠心病猝死法醫(yī)學(xué)鑒定中的意義。

1 材料與方法

1.1 分組與設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)樣本來自山西醫(yī)科大學(xué)司法鑒定中心2011—2016年間受理的尸體檢驗(yàn)案例。死后6 h內(nèi)冷凍保存，72h內(nèi)尸檢，均經(jīng)系統(tǒng)解剖、組織病理學(xué)檢查、常見毒（藥）物檢驗(yàn)后作出法醫(yī)病理學(xué)診斷。所有取得樣本均經(jīng)家屬同意及規(guī)范化處理，所得結(jié)果僅用于醫(yī)學(xué)研究。

本實(shí)驗(yàn)按法醫(yī)病理學(xué)診斷分為正常對(duì)照組、冠心病猝死組及單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組（表1）。正常對(duì)照組20例，排除冠心病、心力衰竭、過敏性疾病、毒品中毒等易引起蛋白檢測(cè)含量明顯升高的案例；其中重度顱腦損傷10例、創(chuàng)傷性休克5例、CO中毒2例、青壯年猝死綜合征1例、羊水栓塞1例、急性乙醇中毒1例。冠心病猝死組20例，均為冠狀動(dòng)脈狹窄程度≥Ⅲ級(jí)，因冠心病急性發(fā)作24h內(nèi)死亡。單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組20例，入選標(biāo)準(zhǔn)同正常對(duì)照組，所有案例由其他非心臟性原因死亡并伴冠狀動(dòng)脈或其分支狹窄程度≥Ⅲ級(jí)；其中重度顱腦損傷6例、創(chuàng)傷性休克6例、機(jī)械性窒息4例、CO中毒1例、羊水栓塞1例、凍死1例、原發(fā)性肝癌1例。

表1 實(shí)驗(yàn)各組基本情況

從冠心病猝死組和單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組中選出13例僅有左前降支梗阻而無左旋支及右冠狀動(dòng)脈梗阻的案例，其中左心室前壁為缺血區(qū)，左心室后壁為非缺血區(qū)，對(duì)每例樣本的缺血區(qū)和非缺血區(qū)進(jìn)行Western印跡法及逆轉(zhuǎn)錄PCR（reverse transcription PCR，RT-PCR）法檢測(cè)，比較兩區(qū)域之間proBNP蛋白及BNP mRNA的表達(dá)差異。

1.2 樣本制備

取左心室前壁及后壁心肌組織，每一塊組織分兩份，一份用4%多聚甲醛溶液固定，另一份保存于-80℃待檢。同時(shí)取心血10mL，以離心半徑10cm，1500r/min離心5min，若血漿分離效果不好，則采用2500×g離心 10 min，離心 1～2次，至血漿完全分離，取血漿置于-80℃待檢。所有入選案例血漿均無明顯溶血。

1.3 主要試劑及儀器

小鼠抗人proBNP單克隆抗體（英國(guó)Abcam公司），金屬增強(qiáng)型DAB顯色試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司），兔抗人GAPDH單克隆抗體（美國(guó)Bioworld公司），逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（日本TaKaRa公司），SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ RT-PCR試劑盒（日本TaKaRa公司），NT-proBNP ELISA試劑盒（上海西唐公司）。

TissueFAXS圖像軟件（奧地利TissueGnostics公司），CFX ConnectTM熒光定量 PCR系統(tǒng)（美國(guó)Bio-Rad公司），Wellscan MK3酶標(biāo)儀（美國(guó) Thermo公司）等。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 心肌proBNP免疫組織化學(xué)染色

取經(jīng)4%多聚甲醛溶液固定的左心室前壁及后壁心肌組織，制作厚度3μm石蠟切片。proBNP單克隆抗體以1∶400稀釋染色。使用TissueFAXS圖像軟件進(jìn)行觀察。

1.4.2 Western印跡法檢測(cè)心肌proBNP

取-80℃保存的心肌組織，每份100mg。研缽中加入液氮快速研磨組織至粉末狀，倒入1 mL的微量離心管中，加入0.5 mL哺乳動(dòng)物總蛋白提取試劑及10μL 苯甲基磺酰氟（phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF），搖勻，4℃孵育 2 h，4℃下 12 000×g離心10min，取上清液。酶標(biāo)儀蛋白定量，聚丙烯酰胺凝膠電泳，濕法轉(zhuǎn)印180mA 60min轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜上，一抗（proBNP 單克隆抗體 1∶250）、二抗（1∶1000）孵育后，加入 Western印跡法超敏增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光（enhanced chemiluminescent，ECL）發(fā)光液進(jìn)行化學(xué)發(fā)光。凝膠成像系統(tǒng)對(duì)PVDF膜進(jìn)行成像，用VisionWorks?LS分析軟件（加拿大UVP公司）對(duì)成像中蛋白條帶光密度進(jìn)行半定量分析。各組均以GAPDH為內(nèi)參照。

1.4.3 RT-PCR法檢測(cè)心肌BNP mRNA

Trizol法提取左心室前壁、后壁心肌組織總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。采用SYBR染料法在CFX ConnectTM熒光定量PCR系統(tǒng)上進(jìn)行，每組樣本均設(shè)副孔，引物序列見表2。每孔的反應(yīng)體系為：SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ 12.5μL，基因的上、下游引物各0.5μL（BNP基因引物或GAPDH基因引物），基因DNA模板2.0μL，dH2O 9.5μL，總體積為 25.0μL。 反應(yīng)條件：95℃ 30s，95℃ 5s，60℃ 30s，40個(gè)循環(huán)。在同一條件下同時(shí)擴(kuò)增BNP和GAPDH基因，該系統(tǒng)自動(dòng)給出相對(duì)表達(dá)量。

表2 RT-PCR引物序列

1.4.4 ELISA法檢測(cè)血漿NT-proBNP

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔14孔，每?jī)煽诪橥粷舛?，制備NT-proBNP濃度分別為640、320、160、80、40、20、0 pmol/L 的標(biāo)準(zhǔn)樣品（1 pmol/L=8.475pg/mL）。

加樣孵育：每孔加入標(biāo)準(zhǔn)品或血漿10 μL，振蕩60s，再加入第一抗體工作液40min（空白孔除外），蓋緊封板膜置于室溫孵育120min。

洗板：每孔加入300μL洗滌液，將反應(yīng)板充分洗滌5次，在濾紙上拍干。

加酶：每孔加入酶標(biāo)抗體工作液100μL，將反應(yīng)板置于37℃ 10min后，重復(fù)步驟“洗板”。

顯色：每孔加入底物工作液100μL，置于37℃暗處反應(yīng)15min。

終止：每孔加入100μL終止液終止。

檢測(cè)：30min內(nèi)用Wellscan MK3酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值，并自動(dòng)輸出濃度值。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，運(yùn)用Oneway ANOVA進(jìn)行組間分析，數(shù)據(jù)由±s表示。檢驗(yàn)水準(zhǔn) α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 心肌proBNP免疫組織化學(xué)染色

proBNP免疫組織化學(xué)染色結(jié)果見圖1。冠心病猝死組可見灶性心肌壞死，proBNP染色彌漫陽(yáng)性，心肌斷裂處及心肌細(xì)胞邊緣處染色明顯加深。單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組心肌proBNP染色呈彌漫陽(yáng)性，但較冠心病猝死組染色淺。正常對(duì)照組心肌未見明顯陽(yáng)性染色。

圖1 心肌proBNP免疫組織化學(xué)染色 ×200

2.2 心肌proBNP Western印跡法檢測(cè)結(jié)果

冠心病猝死組及單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組均有proBNP的表達(dá)，位于相對(duì)分子質(zhì)量13000處。冠心病猝死組中的proBNP表達(dá)較強(qiáng)，單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組中的proBNP表達(dá)較弱，正常對(duì)照組幾乎無proBNP的表達(dá)（圖2）。由表3可見：冠心病猝死組和單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組proBNP表達(dá)量與正常對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；冠心病猝死組和單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組proBNP表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

圖2 心肌proBNP和GAPDH的Western印跡法結(jié)果

表3 各組心肌proBNP平均光密度值

缺血區(qū)（左心室前壁）proBNP平均光密度值為0.192±0.060，非缺血區(qū)（左心室后壁）proBNP平均光密度值為0.159±0.057，表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 心肌BNP mRNA的RT-PCR法檢測(cè)結(jié)果

由表4可見：冠心病猝死組和單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組BNP mRNA相對(duì)表達(dá)量與正常對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；冠心病猝死組和單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組BNP mRNA相對(duì)表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表4 各組心肌BNP mRNA相對(duì)表達(dá)量

缺血區(qū)（左心室前壁）BNP mRNA相對(duì)表達(dá)量為2.350±1.170，非缺血區(qū)（左心室后壁）BNP mRNA相對(duì)表達(dá)量為2.096±1.015，兩區(qū)域表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.4 血漿中NT-proBNP檢測(cè)結(jié)果

正常對(duì)照組、冠心病猝死組以及單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組NT-proBNP檢測(cè)結(jié)果見表5。正常對(duì)照組、單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組、冠心病猝死組血漿中NT-proBNP的含量依次遞增，三組之間兩兩相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表5 各組血漿NT-proBNP水平

3 討 論

BNP是主要由心室肌細(xì)胞分泌的一種多肽類激素，幫助調(diào)節(jié)心室壁舒張壓力，目前已廣泛用于診斷心力衰竭，并作為判斷心力衰竭程度的標(biāo)準(zhǔn)使用[4-7]。proBNP是BNP的前體蛋白，心肌細(xì)胞分泌后由蛋白內(nèi)切酶裂解為兩部分，一部分是由32個(gè)氨基酸構(gòu)成的具有生物活性的環(huán)狀多肽，即傳統(tǒng)意義上的BNP；另一部分是由76個(gè)氨基酸構(gòu)成的無生物活性的直鏈多肽NT-proBNP。BNP與NT-proBNP一同分泌，并且釋放入血[8]。正常心肌細(xì)胞內(nèi)proBNP的存儲(chǔ)量極少，當(dāng)心臟應(yīng)力負(fù)荷增加時(shí)，心肌細(xì)胞內(nèi)的proBNP隨之增加，分泌后快速裂解出BNP以幫助調(diào)節(jié)機(jī)體水鈉平衡，降低心臟負(fù)荷。proBNP是急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者心血管疾病的重要預(yù)測(cè)因子，對(duì)治療和預(yù)后都有重要的幫助[9]；BNP可作為室性心律失常的主要預(yù)測(cè)指標(biāo)[10]，而冠心病猝死往往是因?yàn)榧毙孕募∪毖鸬膼盒孕穆墒С；蛐牟E停，作為BNP的前體蛋白，檢測(cè)proBNP同樣具有應(yīng)用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，冠心病猝死組與單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組心肌組織中均出現(xiàn)陽(yáng)性染色，正常對(duì)照組無陽(yáng)性染色。Western印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示，單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組和冠心病猝死組心肌組織中proBNP表達(dá)量較正常對(duì)照組增高，可能是因?yàn)楣跔顒?dòng)脈狹窄、心肌細(xì)胞缺血會(huì)間接引起收縮功能障礙，進(jìn)而促使BNP表達(dá)增加。同時(shí)，采用RT-PCR法測(cè)定心肌BNP mRNA水平，結(jié)果顯示冠心病猝死組和單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組心肌組織中BNP mRNA的相對(duì)表達(dá)量較正常對(duì)照組增高，冠心病猝死組和單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組心肌組織中BNP mRNA的相對(duì)表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與Western印跡法檢測(cè)的結(jié)果相互印證。

有研究指出，對(duì)血液中NT-proBNP進(jìn)行檢測(cè)相較檢測(cè)血液BNP更具優(yōu)勢(shì)，因?yàn)椋海?）血清NT-proBNP半衰期遠(yuǎn)長(zhǎng)于 BNP[11]；（2）NT-proBNP相較 BNP 更穩(wěn)定，不易受溫度、保存時(shí)間、保存條件的影響[12]；（3）BNP既可以通過胞吞作用由胞內(nèi)溶酶體降解及中性內(nèi)肽酶裂解，也可從腎等器官被動(dòng)清除，容易被代謝分解。而NT-proBNP主要經(jīng)血流量大的器官（如腎）被動(dòng)清除，因此更易在體內(nèi)檢測(cè)到[13]。檢測(cè)proBNP及NT-proBNP，可能為判斷死者心肌BNP水平、分析死者心功能狀態(tài)提供一個(gè)新的途徑。血液NT-proBNP是很好的冠狀動(dòng)脈疾病死亡率的預(yù)測(cè)指標(biāo)[14]，反映了冠狀動(dòng)脈疾病發(fā)生后一段時(shí)間內(nèi)的心功能狀態(tài)，近來也已被臨床上用作冠狀動(dòng)脈疾病預(yù)后的標(biāo)志物。當(dāng)冠心病發(fā)生時(shí)，其在血液中迅速升高，持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，且濃度較高、較為穩(wěn)定的特點(diǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)冠心病心肌梗死時(shí)檢測(cè)的血清學(xué)指標(biāo)，如肌紅蛋白、肌鈣蛋白等。目前，BNP與NT-proBNP用于輔助診斷冠心病猝死的應(yīng)用僅有少量報(bào)道[2，15-16]。本實(shí)驗(yàn)采用ELISA法檢測(cè)血漿NT-proBNP結(jié)果表明，正常對(duì)照組、單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組、冠心病猝死組血漿中NT-proBNP的含量依次遞增（P＜0.05），說明對(duì)血液NT-proBNP進(jìn)一步研究將有助于冠心病猝死的鑒別。

本實(shí)驗(yàn)在單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組及正常對(duì)照組中，排除了可能造成血液NT-proBNP應(yīng)激性表達(dá)快速升高的特殊死因，對(duì)照組主要為交通事故、高墜等所致重度顱腦損傷、嚴(yán)重外傷所致失血性休克等引起的短時(shí)間內(nèi)迅速死亡的案例。有研究[17]指出，在顱腦損傷患者血液中有NT-proBNP的表達(dá)升高，原因可能是重度顱腦損傷引起嚴(yán)重的損傷和失血，進(jìn)而導(dǎo)致心肌缺血缺氧，心臟功能減退，逐漸引起NT-proBNP表達(dá)增多。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，冠心病猝死組與單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組較對(duì)照組均有proBNP的表達(dá)升高，但冠心病猝死組與單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。該結(jié)果說明，檢測(cè)死者心肌中proBNP尚不能鑒別具體的死因，而血液NT-proBNP水平結(jié)果表明，冠心病猝死組與單獨(dú)冠狀動(dòng)脈狹窄組差異較大。且已有研究[18]認(rèn)為，血液中NT-proBNP的濃度隨冠狀動(dòng)脈梗阻分支數(shù)的增加而升高，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化程度、心肌壞死程度與NT-proBNP的升高密切相關(guān)[19]。因此分析認(rèn)為，血漿NT-proBNP可能有助于法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中鑒別冠心病的嚴(yán)重程度及是否為冠心病猝死。

本實(shí)驗(yàn)還選取了兩實(shí)驗(yàn)組中13例左前降支梗阻而左旋支和右冠狀動(dòng)脈正常的心肌，對(duì)心肌組織進(jìn)行Western印跡法和RT-PCR法檢測(cè)，并單獨(dú)對(duì)兩區(qū)域的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，此時(shí)理論上左心室前壁為心肌缺血區(qū)，而左心室后壁為非缺血區(qū)。Western印跡法和RT-PCR結(jié)果顯示，心肌缺血區(qū)（左心室前壁）的proBNP及BNP mRNA蛋白表達(dá)量和心肌非缺血區(qū)（左心室后壁）之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在未來的研究中，期望能夠增加樣本量，擴(kuò)大死因范圍，研究心臟性猝死時(shí)BNP、proBNP及NT-proBNP的表達(dá)變化，及其他原因死亡案例中NT-proBNP的表達(dá)量差異程度，最終建立不同死因時(shí)血液NT-proBNP的參考值范圍，輔助應(yīng)用于實(shí)際檢案中。

[1]MAISEL A S， CLOPTON P， KRISHNASWAMY P，et al.Impact of age， race， and sex on the ability of B-type natriuretic peptide to aid in the emergency diagnosis of heart failure：results from the Breathing Not Properly （BNP）multinational study[J].Am Heart J，2004，147（6）：1078-1084.

[2]史潔茹，田成俊，曾強(qiáng)，等.過敏性和冠心病猝死者心肌組織中肥大細(xì)胞類胰蛋白酶、腦利鈉肽的表達(dá)[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2016，32（3）：161-164.

[3]ZAPHIRIOU A， ROBB S， MURRAY-THOMAS T，et al.The diagnostic accuracy of plasma BNP and NTproBNP in patients referred from primary care with suspected heart failure：Results of the UK natriuretic peptide study[J].Eur J Heart Fail，2005，7（4）：537-541.

[4]SANTAGUIDA P L， DON-WAUCHOPE A C，OREMUS M，et al.BNP and NT-proBNP as prognostic markers in persons with acute decompensated heart failure： a systematic review[J].Heart Fail Rev，2014，19（4）：453-470.

[5]LOURENCO P，RIBEIRO A，PINTALHAO M，et al.Predictors of six-month mortality in BNP-matched acute heart failure patients[J].Am J Cardiol，2015，116（5）：744-748.

[6]BELTRAMI M，PALAZZUOLI A，RUOCCO G，et al.The predictive value of plasma biomarkers in discharged heart failure patients：the role of plasma BNP[J].Minerva Cardioangiol，2016，64（2）：147-156.

[7]YANCY C W，JESSUP M，BOZKURT B，et al.2016 ACC/AHA/HFSA focused update on new pharmacological therapy for heart failure：an update of the 2013 ACCF/AHA guideline for the management of heart failure：a report of the American College of Cardiology/American Heart Association task force on clinical practice guidelines and the Heart Failure Society of America[J].J Card Fail，2016，22（9）：659-669.

[8]STRUTHERS A D，GEORGE J.High B-type natriuretic peptide hypertensives at target blood pressure：potential role of beta-blockers to reduce their elevated risk[J].Hypertension，2015，66（5）：927-932.

[9]VOGIATZIS I， DAPCEVIC I， DATSIOS A， et al.A comparison of prognostic value of the levels of proBNP and troponin T in patients with acute coronary syndrome （ACS）[J].Med Arch，2016，70（4）：269-273.

[10]LEVINE Y C，ROSENBERG M A，MITTLEMAN M，et al.B-type natriuretic peptide is a major predictor of ventricular tachyarrhythmias[J].HeartRhythm，2014，11（7）：1109-1116.

[11]YEO K T， WU A H， APPLE F S， et al.Multicenter evaluation of theRocheNT-proBNP assay and comparison to the Biosite Triage BNP assay[J].Clin Chim Acta，2003，338（1-2）：107-115.

[12]WU A H，PACKER M，SMITH A，et al.AnalyticalandclinicalevaluationoftheBayerADVIA Centaur automated B-type natriuretic peptide assay in patients with heart failure：a multisite study[J].Clin Chem，2004，50（5）：867-873.

[13]STEINER J，GUGLIN M.BNP or NTproBNP?A clinician’s perspective[J].Int J Cardiol，2008，129（1）：5-14.

[14]JOHANSSON A，ERIKSSON N，LINDHOLM D， et al.Genome-wide association and Mendelian randomization study of NT-proBNP in patients with acute coronary syndrome[J].Hum Mol Genet，2016，25（7）：1447-1456.

[15]喬小民，陶玲，繆金龍，等.N末端腦利鈉肽前體與冠心病冠狀動(dòng)脈病變程度的關(guān)系研究[J].蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2016，42（3）：48-51.

[16]高衛(wèi)民，曹志鵬，米麗，等.急性心功能障礙大鼠心肌中 BNP 的表達(dá)[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2013，29（2）：86-90.

[17]朱登安，魏曉艷，陳華文，等.重型顱腦損傷患者N末端腦利鈉肽前體的變化及意義[J].臨床急診雜志，2013，14（8）：360-362.

[18]耿家峰.N端腦鈉肽前體、脂蛋白（a）與冠心病患者冠狀動(dòng)脈病變的相關(guān)性[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2016，20（15）：14-16，20.

[19]劉雅，劉闊，樓煜清，等.冠心病經(jīng)皮冠脈介入治療患者N末端腦鈉肽前體水平與冠脈病變嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2011，14（16）：1785-1788.

2017-01-12）

（本文編輯：黃 平）

Expression of proBNP and NT-proBNP in Sudden Death of Coronary Heart Disease

ZENG Qiang1,SUN Rui-feng1,LI Ze1,2,ZHAI Li-qin1,2,LIU Ming-zhe1,GUO Xiang-jie1,GAO Cai-rong1
（1.Department of Forensic Pathology,School of Forensic Medicine,Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China;2.Shanxi Provincial People’s Hospital,Taiyuan 030012,China）

ObjectiveTo study the expression change of pro-brain natriuretic peptide （proBNP） and N-terminal pro-brain natriuretic peptide （NT-proBNP） in sudden death of coronary atherosclerotic heart disease,and to explore its application in forensic diagnosis.MethodsMyocardial and blood samples were collected from normal control group,sudden death of coronary atherosclerotic heart disease group and single coronary stenosis group （20 cases in each group）.The expression of proBNP in myocardial samples were detected by immunohistochemical staining and Western blotting,and that of BNP mRNA were detected by reverse transcription PCR （RT-PCR）.The content of NT-proBNP in plasma were detected by ELISA.ResultsImmunohistochemical staining showed positive expression of proBNP in both sudden death of coronary atherosclerotic heart disease group and single coronary stenosis group.There was no positive expression in normal control group.For sudden death of coronary atherosclerotic heart disease group and single coronary stenosis group,the relative expression of proBNP protein and BNP mRNA in myocardial tissue and the NT-proBNP content in plasma were higher than that of normal control group （P＜0.05）.The NT-proBNP content in plasma of sudden death of coronary atherosclerotic heart disease group was higher than that of single coronary stenosis group （P＜0.05）.ConclusionIn myocardial ischemia condition,the higher expression of proBNP in cardiac muscle cell shows that the detection of NT-proBNP in plasma can be useful to differentially diagnose the degree of coronary atherosclerotic heart disease and determine whether the sudden death due to coronary atherosclerotic heart disease.

forensic pathology;death,sudden;coronary disease;pro-brain natriuretic peptide;N-terminal pro-brain natriuretic peptide

·論 著·

DF795.1

A

10.3969/j.issn.1004-5619.2017.05.004

1004-5619（2017）05-0476-06

山西省科技攻關(guān)資助項(xiàng)目（20140313015-7）；山西省回國(guó)留學(xué)人員科研資助項(xiàng)目（2015-050）

曾強(qiáng)（1992—），男，碩士研究生，主要從事猝死病理學(xué)研究；E-mail：zeng_smile@126.com

高彩榮，女，博士，博士研究生導(dǎo)師，主要從事猝死病理學(xué)教學(xué)研究和檢案；E-mail：gaocairong5175@163.com