來(lái)福*

(1.北京出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心, 北京 100026;2.上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司，上海 201108)

國(guó)產(chǎn)凝膠滲透色譜在測(cè)定豬肉農(nóng)藥殘留中的應(yīng)用

劉鑫1云環(huán)1高峰1劉來(lái)福1*齊娜2陳向斌2金曉靜2

(1.北京出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心, 北京 100026;2.上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司，上海 201108)

選擇乙酸乙酯/環(huán)己烷(V/V 1/1)作為提取液，提取液經(jīng)凝膠滲透色譜(Gel Permeation Chromatography，GPC)后，除去脂類(lèi)、蛋白質(zhì)和大部分大分子雜質(zhì)，樣品凈化后使用GC/MS進(jìn)行多種農(nóng)藥殘留同時(shí)分析。針對(duì)豬肉樣品進(jìn)行了添加回收試驗(yàn)，回收率在82.21%-98.09%，0.05 μg/mL～1.0 μg/mL線性相關(guān)系數(shù)良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.72%～11.38%。本方法具有操作簡(jiǎn)便，自動(dòng)化程度高，凈化效果好、精密度好等優(yōu)點(diǎn)，適用于豬肉中農(nóng)藥殘留的日常檢測(cè)工作。

凝膠滲透色譜 國(guó)產(chǎn)儀器 農(nóng)藥 豬肉

1 概述

由于長(zhǎng)期大量的使用和濫用，農(nóng)藥已成為食品的重要污染物之一，特別是隨著我國(guó)人民生活水平的提高，肉、水產(chǎn)品、蛋和乳類(lèi)等動(dòng)物源性食品在居民膳食結(jié)構(gòu)中所占的比例越來(lái)越大。通過(guò)環(huán)境接觸、食物鏈富集等進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)的農(nóng)藥殘留問(wèn)題成為了關(guān)注的熱點(diǎn)。近年來(lái)，我國(guó)在蔬果、茶葉等植物性食品及水體、土壤等環(huán)境中的農(nóng)殘檢測(cè)上已取得了較大進(jìn)展。但針對(duì)動(dòng)物源性食品的農(nóng)殘檢測(cè)，尤其是針對(duì)不同類(lèi)型農(nóng)藥的多殘留檢測(cè)則較少研究，檢測(cè)技術(shù)上的差距還導(dǎo)致我國(guó)出口動(dòng)物源性食品遭遇歐美發(fā)達(dá)國(guó)家的技術(shù)性貿(mào)易壁壘。因此，提高我國(guó)動(dòng)物源性食品農(nóng)藥多殘留的檢測(cè)水平，顯得十分重要和緊迫。

動(dòng)物源性食品中含有的大量油脂和蛋白質(zhì)，其極性大小與常用的農(nóng)藥相似。目前常用的凈化技術(shù)如固相萃取技術(shù)，液液萃取技術(shù)很難將農(nóng)藥從上述雜質(zhì)中凈化出來(lái)。而凝膠滲透色譜是一項(xiàng)成熟的農(nóng)藥殘留凈化技術(shù)，其利用不同體積的分子在凝膠色譜柱保留的時(shí)間差異來(lái)分離目標(biāo)物。可以有效的去除油脂、蛋白質(zhì)等大分子雜質(zhì)的干擾。本實(shí)驗(yàn)利用GPC凈化，結(jié)合GC-MS進(jìn)行分析，建立了豬肉中7種農(nóng)藥殘留的測(cè)定方法。

2 材料與方法

2.1 樣品

將豬肉樣品用絞肉機(jī)攪碎，充分混勻，用四分法縮分至少不少于500g，作為試樣，裝入清潔容器內(nèi)，密封后于-18℃冷凍保存。

2.2 儀器與試劑

儀器型號(hào)：上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司FLEXI 全自動(dòng)凝膠滲透色譜儀(配有400mm×25mm(內(nèi)經(jīng))，內(nèi)裝BIO-Beads S-X3填料的凈化柱)，用于樣品中大分子雜質(zhì)的凈化；氣相色譜-質(zhì)譜儀，配有電子轟擊離子源(EI)；分析天平，感量為0.0001g；離心機(jī)，最大轉(zhuǎn)速為10000 r/min；環(huán)己烷：色譜純；乙酸乙酯：色譜純；乙酸乙酯+環(huán)己烷(1+1，體積比)；乙草胺、五氯硝基苯、地蟲(chóng)硫磷、西瑪津、艾試劑、撲草凈、毒死蜱單個(gè)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液100mg/L；無(wú)水硫酸鈉：分析純(用之前在650℃灼燒4h，貯存于干燥器中，冷卻后備用)；微孔過(guò)濾膜(尼龍)。

2.3 方法建立

準(zhǔn)確稱(chēng)取10g試樣(精確至0.01g)，放入50mL離心管中，并加10g無(wú)水硫酸鈉，加25mL乙酸乙酯+環(huán)己烷(1+1，體積比)，超聲提取15分鐘，以3000r/min離心3min，上清液過(guò)裝有無(wú)水硫酸鈉的漏斗，收集于旋蒸瓶中，殘?jiān)儆?5mL乙酸乙酯+環(huán)己烷(1+1)提取一次，合并提取液，并將提取液于40℃水浴蒸發(fā)濃縮至約5mL，將上述提取液轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，用5 mL乙酸乙酯+環(huán)己烷(1+1)分兩次洗滌梨形瓶，并轉(zhuǎn)移至上述10 mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻。將樣液過(guò)0.45 μm微孔濾膜濾入10 mL試管，供凝膠滲透色譜儀凈化。

凝膠滲透色譜凈化條件，見(jiàn)表1、表2。

表1 全自動(dòng)凝膠凈化方法進(jìn)樣程序表

進(jìn)樣流速：5mL/min

表2 全自動(dòng)凝膠凈化方法收集程序表

收集液于40℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約5mL，將濃縮液轉(zhuǎn)移至15mL離心管中，氮吹濃縮至近干，加入1 mL的正己烷溶解殘?jiān)?，混勻，供氣相色譜-質(zhì)譜測(cè)定。

氣相色譜-質(zhì)譜條件如下：

色譜柱：DB-5MS 30m × 0.25mm × 0.25μm。柱溫(程序升溫)：70℃保持3min，15℃每分鐘升到180℃，保持2min，10℃每分鐘升到280℃，保持10min。

進(jìn)樣口溫度：250 ℃。進(jìn)樣口壓力：77 kPa。流速：1.0 mL/min。分流比：不分流。進(jìn)樣量：1.0 μL。

2.4 線性關(guān)系

5 mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制如下：

分別從濃度為100mg/L的乙草胺、五氯硝基苯、地蟲(chóng)硫磷、西瑪津、艾試劑、撲草凈、毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液中，各移取0.5mL標(biāo)準(zhǔn)液于10mL容量瓶中，使用正己烷定容至刻度，配制成濃度為5mg/L的10種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，避光，0～4℃保存。

基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制如下：

用空白樣品基質(zhì)溶液配制成濃度分別為0.05、0.1、0.2、0.5、0.8、1.0mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用于標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制，線性方程見(jiàn)表3。

表3 8種農(nóng)藥線性方程

2.5 加標(biāo)回收率

在豬肉樣品中加入0.5 μg的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，重復(fù)進(jìn)樣7次，采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量，檢測(cè)數(shù)據(jù)及RSD見(jiàn)表4。

3 結(jié)論

建立了凝膠凈化-氣相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)豬肉中農(nóng)藥殘留的方法。該方法具有自動(dòng)化程度高，萃取效率高、凈化效果好、精密度好，分析快速等優(yōu)點(diǎn)，適用于豬肉中農(nóng)藥殘留的日常檢測(cè)工作。

表4 8種農(nóng)藥測(cè)定結(jié)果

[1] 高雪，王翠芬，劉萍，劉曉慧，齊雅薇.凝膠滲透色譜-氣相色譜法測(cè)定豬肉中11種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2014 (6) :1782-1786.

[2]劉潤(rùn)珠，王松，崔鶴，高建國(guó).張靖坤牛肉和豬肉基質(zhì)中多農(nóng)藥殘留GCMS分析方法[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2013，34 (22) :25-28.

[3]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 19650-2006 動(dòng)物肌肉中478種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜法[S]：1-68.

Purificationofpesticideresiduesinporkbydomesticgelpermeationchromatography.

LiuXin1,YunHuan1,GaoFeng1,LiuLaifu1*,QiNa2,ChenXiangbin2,JinXiaojing2

(1.BeijingEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau,Beijing100026,China; 2.PreeKemScientificInstrumentsCo.,Ltd.,Shanghai201108,China)

The seven kinds of pesticide residues in pork were determined by gel permeation chromatography (GPC) combined with gas chromatography hyphened mass (GC-MS). With the extraction solvent of ethyl acetate-cyclohexane (V/V 1/1), the extract was purified by GPC, then lipids, proteins and most of the macromolecular impurities were removed from the sample matrix,followed by GC/MS analysis. The spiked recovery was 82.21%—98.09% with relative standard deviation (RSD) of 3.72%—11.38%. The method ranged from 0.05 μg/mL to 1.0 μg/mL with good linearity. In conclusion, the method was simple and accurate with high automation and extraction efficiency. It was suitable for routine detection of the pesticide residues in pork.

gel permeation chromatography; domestic instrument; pesticide residues; pork

北京市科技計(jì)劃課題《國(guó)產(chǎn)分析儀器驗(yàn)證與綜合評(píng)價(jià)市場(chǎng)化推廣研究與實(shí)踐》(Z161100003016006)資助。

10.3969/j.issn.1001-232x.2017.06.028

2017-10-04

劉鑫，高級(jí)工程師，liuxin@bjciq gov cn。