崔 曉 王慶武 安秀榮 唐麗娜

?

泰山花臉香蘑的生物學(xué)特性研究

崔 曉 王慶武 安秀榮 唐麗娜

（泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院食用菌研究所，山東 泰安 271000）

對(duì)泰山花臉香蘑菌株TSlep.1生物學(xué)特性的研究結(jié)果表明，該菌株最佳碳源為葡萄糖，最佳氮源為酵母膏、牛肉膏，碳源對(duì)該菌菌落形態(tài)的形成有重要作用；菌絲適宜生長(zhǎng)溫度為20～30 ℃，適宜pH為5～7。適宜的碳氮源濃度組合為葡萄糖1%，麥芽糖0.5%，酵母膏0.2%，牛肉膏0.2%。

泰山花臉香蘑；生物學(xué)特性；碳氮源組合

花臉香蘑（）又叫紫花臉、紫晶蘑等[1]，屬擔(dān)子菌門、層菌綱、傘菌目、口蘑科、香蘑屬[2]。其色鮮艷，氣濃郁，味鮮美，不僅是餐桌佳品還兼具防癌、抗腫瘤[3]等功效。其子實(shí)體干品的蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30.03%，18種氨基酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為24.37%[4]，是一種名貴優(yōu)良食藥用菌[5~6]，極具藥用開(kāi)發(fā)潛力[7]。主要分布于我國(guó)東北地區(qū)及河北、四川、云南、貴州等省。其人工栽培還處于試驗(yàn)階段，對(duì)其生物學(xué)特性的研究目前著重在單因素方面。筆者采用單因素和多因素正交組合的方法，研究泰山花臉香蘑的生物學(xué)特性，旨在為其馴化提供基礎(chǔ)科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試菌株為泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院保存的泰山花臉香蘑“TSlep.1”菌株。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方：葡萄糖20 g，蛋白胨2 g，KH2PO43 g，MgSO41.5 g，瓊脂20 g，加水定容至1 L。每平板培養(yǎng)基定量為20 mL。

PDA（馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基）：馬鈴薯（去皮）200 g，葡萄糖20 g，KH2PO43 g，MgSO41.5 g，瓊脂20 g，加水定容至1 L。每平板培養(yǎng)基定量為20 mL。

1.2 試驗(yàn)方法

（1）菌落生長(zhǎng)速度。用打孔器在菌落邊緣取相同菌齡、直徑為5 mm的接種塊，接種于平板培養(yǎng)基上，25 ℃恒溫培養(yǎng)。當(dāng)其中1個(gè)處理的菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基后為實(shí)驗(yàn)結(jié)束，采用十字交叉法測(cè)量菌絲直徑，觀察并記錄菌絲生長(zhǎng)情況，計(jì)算菌絲日均生長(zhǎng)速度。每處理重復(fù)5次。

（2）菌絲生長(zhǎng)勢(shì)。菌絲生長(zhǎng)濃密、健壯、長(zhǎng)勢(shì)旺盛，用“+++”表示；菌絲生長(zhǎng)較密、較健壯、長(zhǎng)勢(shì)較好，用“++”表示；菌絲生長(zhǎng)稀、不健壯、長(zhǎng)勢(shì)差，用“+”表示；菌絲不生長(zhǎng)，用“－”表示。

（3）碳源試驗(yàn)。分別以葡萄糖、麥芽糖、淀粉、果糖、蔗糖、乳糖作為碳源，碳源濃度參照基礎(chǔ)培養(yǎng)基。基礎(chǔ)培養(yǎng)基中不添加碳源，為碳源空白對(duì)照。重復(fù)處理和測(cè)量方法同（1）。

（4）氮源試驗(yàn)。分別以酵母膏、蛋白胨、牛肉膏、(NH4)2SO4、NH4NO3作為氮源，氮源濃度參照基礎(chǔ)培養(yǎng)基。基礎(chǔ)培養(yǎng)基中不添加氮源，為氮源空白對(duì)照。重復(fù)處理和測(cè)量方法同（1）。

（5）溫度試驗(yàn)。將接種直徑5 mm菌塊的培養(yǎng)基置于恒溫箱中培養(yǎng)，溫度設(shè)定為15 ℃，20 ℃，25 ℃，30 ℃，35 ℃共5個(gè)處理，重復(fù)處理和測(cè)量方法同（1）。

（6）pH試驗(yàn)。pH設(shè)4、5、6、7、8、9、10共7個(gè)處理，重復(fù)處理和測(cè)量方法同（1）。

（7）最佳碳氮源濃度組合。通過(guò)上述單因素試驗(yàn)得到適宜碳氮源，采用正交試驗(yàn)，篩選適合生長(zhǎng)的最佳碳氮源濃度組合配方。以菌絲日生長(zhǎng)速度為衡量指標(biāo)，采用L9（34）正交表進(jìn)行四因素三水平正交試驗(yàn)。

相關(guān)數(shù)據(jù)采用EXCEL2010整理，以Duncan’ s 新復(fù)極差法對(duì)各處理進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同碳源的菌絲生長(zhǎng)情況

不同碳源對(duì)TSlep.1的菌絲生長(zhǎng)速度和長(zhǎng)勢(shì)的影響見(jiàn)表1。菌絲生長(zhǎng)速度由快到慢的碳源為：葡萄糖＞麥芽糖＞果糖＞淀粉＞蔗糖＞乳糖。菌絲的長(zhǎng)勢(shì)，除葡萄糖外，其他碳源培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)呈不規(guī)則圓形，氣生菌絲多，鋪展不開(kāi)，菌落厚薄不一致，尤以淀粉、蔗糖為明顯。在對(duì)照的無(wú)碳源培養(yǎng)基上，菌絲生長(zhǎng)速度和長(zhǎng)勢(shì)均很慢，說(shuō)明TSlep.1菌絲生長(zhǎng)需要碳源，而本實(shí)驗(yàn)6種碳源中以葡萄糖為最適宜。

表1 不同碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

注：數(shù)值后不同大小寫字母分別表示在 0.01 和 0.05 水平上的差異?！?”越多，長(zhǎng)勢(shì)越好。下同。

2.2 不同氮源的菌絲生長(zhǎng)情況

由表2可知，菌絲生長(zhǎng)速度由快到慢的氮源為：酵母膏＞牛肉膏＞蛋白胨＞(NH4)2SO4＞NH4NO3＞尿素。菌絲的長(zhǎng)勢(shì)，NH4SO4、NH4NO3、尿素培養(yǎng)基上的長(zhǎng)勢(shì)弱，菌落邊緣稀疏；其他氮源培養(yǎng)基的菌絲長(zhǎng)勢(shì)好，邊緣一致。在無(wú)氮源對(duì)照培養(yǎng)基上，菌絲生長(zhǎng)慢，長(zhǎng)勢(shì)弱。說(shuō)明TSlep.1菌絲生長(zhǎng)需要適宜的氮源，且以酵母膏、牛肉膏較為適宜。

表2 不同氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

2.3 菌絲生長(zhǎng)的最適溫度

試驗(yàn)結(jié)果表明，泰山花臉香蘑菌絲在15～35 ℃均可生長(zhǎng)，其中15～25 ℃條件下，隨著溫度的升高菌絲生長(zhǎng)加快。25 ℃條件下菌絲長(zhǎng)速最快，為4.41 mm/d，25～35 ℃條件下，隨著溫度的升高菌絲生長(zhǎng)減慢。溫度高于35 ℃時(shí)，菌絲生長(zhǎng)停止?？梢?jiàn)，菌絲生長(zhǎng)的適宜溫度為20～30 ℃，最適為25 ℃。

2.4 菌絲生長(zhǎng)的最適pH

試驗(yàn)結(jié)果表明，pH為6時(shí)，菌絲長(zhǎng)速快，為3.81 mm/d，長(zhǎng)勢(shì)好。pH低于6時(shí)，隨pH升高，菌絲生長(zhǎng)加快。pH高于6時(shí)，隨pH升高，菌絲生長(zhǎng)減弱。其適宜pH為5～7，在此pH范圍內(nèi)菌絲長(zhǎng)速快、菌絲濃密、長(zhǎng)勢(shì)旺。

2.5 菌絲生長(zhǎng)的適宜碳氮源濃度組合

選用L9（34）正交表進(jìn)行四因素三水平正交試驗(yàn)，測(cè)定其菌絲培養(yǎng)中的碳氮源最佳濃度組合。值越大，因子對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響越大。極差分析結(jié)果表明，4個(gè)單因子對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響順序?yàn)椋篈＞D＞B＞C，即葡萄糖對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度影響最大，牛肉膏、麥芽糖居次，酵母膏最?。ū?，表4）。綜合評(píng)價(jià)，在本試驗(yàn)條件下，各因素對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度和長(zhǎng)勢(shì)的最佳碳氮源組合為A1B1C2D1，即：葡萄糖1%、麥芽糖0.5%、酵母膏0.2%、牛肉膏0.2%。

表3 正交試驗(yàn)因素水平表

3 小結(jié)與討論

根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果，泰山花臉香蘑TSlep.1菌絲體生長(zhǎng)的最適碳源為葡萄糖，最適氮源為酵母膏、牛肉膏，適宜生長(zhǎng)溫度為20～30 ℃，適宜pH值為5～7，這與周會(huì)明[9]、申慧彥[10]等研究結(jié)果一致。菌絲生長(zhǎng)的最佳碳氮源組合為葡萄糖1%，麥芽糖0.5%，酵母膏0.2%，牛肉膏0.2%。

表4 正交試驗(yàn)結(jié)果

泰山花臉香蘑對(duì)碳源的利用較為廣泛，單糖、雙糖和多糖均可。此結(jié)果與多篇相關(guān)報(bào)道的觀點(diǎn)一致[7]。而單糖相對(duì)于雙糖，雙糖相對(duì)于多糖更易于吸收。其中，花臉香蘑菌絲對(duì)乳糖的利用較差，產(chǎn)生乳糖酶的能力較弱，說(shuō)明其對(duì)不同碳源的利用能力存在差異。在碳源空白培養(yǎng)基上，菌絲生長(zhǎng)厚薄不一致，不能延平板鋪展，菌落形狀不規(guī)則，色素形成不一致；而在氮源空白培養(yǎng)基上未出現(xiàn)此現(xiàn)象，說(shuō)明碳源對(duì)花臉香蘑的菌落形態(tài)影響較大，而氮源無(wú)明顯影響。

泰山花臉香蘑對(duì)氮源的利用雖較廣泛，但對(duì)有機(jī)氮的利用優(yōu)于無(wú)機(jī)氮，無(wú)機(jī)氮中對(duì)硝態(tài)氮的利用優(yōu)于銨態(tài)氮，這與其他食用菌品種類似。

[1] 黃年來(lái). 中國(guó)大型真菌原色圖鑒[M]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 1998: 113.

[2] 卯曉嵐. 中國(guó)大型真菌[M]. 鄭州: 河南科技出版社, 2000, 177-180.

[3] Mazur X., backer U., Anke, T., et. al. Two new bioactive diterpenes from lepista Sordida, Phytochemistry[J]. 1996, 43(2): 405-407 .

[4] 羅心毅, 洪江, 張勇民. 人工栽培花臉香蘑氨基酸研究[J]. 氨基酸和生物資源, 2003, 25(3): 14-15.

[5] 秦丹, 孔超, 孫效樂(lè), 等. 花臉香蘑粗多糖對(duì)雛雞免疫調(diào)節(jié)作用的研究［J］. 食用菌學(xué)報(bào), 2013, 20(2): 37-41.

[6] Francesca B. enevelli. et al. The structures of trichoaurantianolides B, C and D, noval diterpenes from Tricholoma aurantium [J]. Pergarnon, 1995, 36(17): 3035-3038.

[7] 蔡同一. 對(duì)21世紀(jì)食品發(fā)展的展望[J]. 食品工業(yè)科技, 2001, 22(1): 11-12.

[8] 鄭煥春, 葛江麗, 欒泰龍, 等. 碳氮源對(duì)花臉香蘑菌絲生長(zhǎng)的影響［J］. 北方園藝, 2012(10): 176-178.

[9] 周會(huì)明, 張焱珍, 柴紅梅, 等. 一株野生花臉香蘑的生物學(xué)特性及其栽培[J]. 食用菌學(xué)報(bào), 2017, 24(1): 39-44.

[10] 申慧彥. 花臉蘑菌絲生物學(xué)特性及其胞外酶活性的研究[D]. 重慶: 西南農(nóng)業(yè)大學(xué), 2004.

Biological characteristics of Taishan

Cui Xiao Wang Qingwu An Xiurong Tang Lina

（Tai'an Academy of Agricultural Sciences, Tai'an, 271000, China）

The result of the study of biological characteristics on Taishanstrain TSlep.1 showed that the optimum carbon resource was glucose, the optimum nitrogen resources were yeast extract and beef extract, the optimum temperature and pH for mycelia growth were 20～30 ℃ and 5～7 respectively. The suitable carbon-nitrogen source concentration combinations were 1% sucrose, 0.5% glucose, 0.2% yeast extract and 0.3% beef extract.

Taishan; biological characteristics; carbon-nitrogen source concentration combinations

S646

A

2095-0934（2017）06-369-04

國(guó)家食用菌產(chǎn)業(yè)體系建設(shè)專項(xiàng)（CARS－24）；山東省食用菌創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)病蟲(chóng)害防控崗位（SDAIT-07-04）