大豆黃素納米乳球的制備及表征

夏秀華

無錫商業(yè)職業(yè)技術(shù)學院 (無錫 214153)

大豆黃素納米乳球的制備及表征

夏秀華

無錫商業(yè)職業(yè)技術(shù)學院 (無錫 214153)

為了提高大豆黃素在機體的吸收和生物利用率，將大豆黃素制成大豆黃素納米乳球。通過試驗探索投料比、pH值、NaCl濃度、加熱四因素對大豆蛋白-大豆多糖納米乳球制備及穩(wěn)定性的影響。結(jié)果表明：最佳的制備條件為：在投料比1∶5，8.5×107Pa均質(zhì)3次，均質(zhì)后80 ℃加熱1 h，pH值3.25的條件下粒徑變化最小，此時粒徑為270 nm；鹽濃度的增加會導致納米乳球的粒徑增大。根據(jù)此最佳條件制備大豆黃素納米乳球，考察不同pH值的影響，并使用電鏡進行表征，結(jié)果表明：大豆黃素納米乳球在pH值3.25時粒徑達到最小值，此時最穩(wěn)定，通過電鏡可以證實相互之間的結(jié)構(gòu)為多糖的親水鏈延伸出去，互相交聯(lián)，形成穩(wěn)定的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。

大豆黃素；納米乳球；投料比；PH值

大豆黃素是大豆異黃酮中的一種重要組成成分，具有廣泛的應用前景。廣泛存在于谷物、豆類、牧草、蔬果中，是一種異黃酮類化合物。分子式為C15H10O4，分子量為254.23。純品為白色粉末狀，分解點315 ℃～323 ℃。經(jīng)藥理研究證實，大豆黃素可以提高動物的生殖性能和繁殖能力，同時可以提高動物機體的免疫機能[1]。通過動物實驗可以得知，大豆黃素可以明顯提高下丘腦、垂體和乳腺等雌二醇受體的數(shù)目及親和力，并影響乳腺的發(fā)育及泌乳能力[2-3]。但大豆黃素水溶性較差，極大地限制了其生物活性的發(fā)揮。研究發(fā)現(xiàn)，將此類水溶性較差或不溶于水的生物活性物質(zhì)采用納米技術(shù)制成納米級分散體系，能有效提高該物質(zhì)在機體內(nèi)的吸收和生物利用率[4-5]。實驗室先前研究了大豆黃素及大豆卵磷脂在不同溶劑中的溶解度，并根據(jù)溶解度制備了大豆黃素磷脂復合物[6-9]。在此基礎上考慮使用大豆蛋白和大豆多糖通過因素實驗制成穩(wěn)定的納米乳球，并使用該納米乳球封裝制得的大豆黃素磷脂復合物制備大豆黃素納米乳球，并進行表征。

1 材料與方法

1.1 主要原料與試劑

大豆黃素(Daizein，上海純優(yōu)生物科技有限公司；大豆卵磷脂，國藥集團化學試劑有限公司 ；脫脂豆粕，市售；大豆多糖，不二富吉(北京)科技有限公司；金龍魚精煉一級大豆油，益海(泰州)糧油工業(yè)有限公司；大豆黃素磷脂復合物， 實驗室制備；正己烷(分析純)，國藥集團化學試劑有限公司；四氫呋喃(分析純)，國藥集團化學試劑有限公司；三羥甲基氨基甲烷 (分析純)，國藥集團化學試劑有限公司；醋酸鈉(分析純)，國藥集團化學試劑有限公司；疊氮化鈉(分析純)，國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 主要儀器與設備

智能恒溫磁力攪拌器，型號ZNCLS ，河南省鞏義市英峪儀器廠；智能恒溫水浴攪拌器 ，上海百申儀器設備有限公司；臺式高速離心機，型號5804R 德國 Eppendorf公司；紫外分光光度計，型號UV18 北京萊貝賽威科技有限公司；傅立葉變換紅外光譜儀，型號Nicolet iS10，美國賽默飛公司；高效液相色譜儀，型號waters1525，美國沃特世公司；高壓均質(zhì)機，型號APV 1000，APV 公司；高速剪切機 ，型號T18,IKA公司；納米粒度及ZETA電位儀，型號Zetasizer nano ZS，英國馬爾文公司。

1.3 實驗方法

1.3.1大豆蛋白的提取方法[10]

50 g豆粕粉→攪拌溶解1.5 h (500 mL，0.1 mol/L Tris-HCl，20 ℃，pH值8.0) →1 000 r/min，10 ℃離心30 min→收集上清，2 mol/L HCL調(diào)pH值至4.8， 4 ℃靜置2 h→1 000 r/min的轉(zhuǎn)速在10 ℃下離心30 min取沉淀得大豆蛋白→pH值4.8的醋酸鈉溶液充分洗滌→離心10 min兩次(1 000 r/min，10 ℃)→收集沉淀→0.1 mol/L Tris-HCl(pH值8.0)溶液過夜攪拌溶解，調(diào)pH值至3.25(加0.02%的疊氮化鈉)

1.3.2納米乳球的預制備[11-13]

40 g大豆多糖粉末→用800 mL去離子水攪拌溶解，37 ℃磁力攪拌過夜→使用2 mol/L鹽酸溶液調(diào)pH值至3.25→得表面濃度為50 mg/mL的大豆多糖溶液。

pH值3.25的去離子水稀釋多糖溶液→攪拌30 min，加入適量蛋白溶液，使蛋白表面濃度為5 mg/mL → 攪拌3.5 h使其混合充分。

大豆蛋白/大豆多糖的投料比及用量如表1所示。

表1 大豆蛋白與大豆多糖投料比

加入大豆油至占混合溶液體積分數(shù)10%，磁力攪拌混合均勻，使用高剪切分散機以1 000 r/min的速度剪切混合溶液，每次剪切1 min，共剪切3次，以使溶液整體分布均勻。然后使用高壓均質(zhì)機以8.5×107Pa的壓力均質(zhì)3次。使大豆蛋白與大豆多糖充分結(jié)合，形成大豆蛋白-大豆多糖納米乳球，將其在80 ℃下加熱1 h或不做熱處理，處理后4 ℃過夜，添加NaCl、pH值值等其他因素來考察不同條件對納米乳球粒徑的影響。

1.3.3大豆黃素納米乳球的制備

將實驗室制得的大豆黃素磷脂復合物置于大豆油中，攪拌，超聲溶解，將溶解了磷脂復合物的大豆油加入大豆蛋白-大豆多糖混合溶液中至占總體積分數(shù)的10%，攪拌均勻后，使用高剪切分散機以13 500 r/min的轉(zhuǎn)速剪切3次，每次1 min。使其整體分布均勻。然后使用高壓均質(zhì)機以8.5×107Pa的壓力均質(zhì)3次，使大豆蛋白與大豆多糖充分結(jié)合，同時包裹大豆黃素磷脂復合物，形成大豆黃素納米乳球[14-15]。

1.3.4紫外可見分光光度法[16-17]

5 mg大豆黃素磷脂復合物 →溶于甲醇中，定容至50 mL→以1∶3的比例稱取總質(zhì)量為5 mg的大豆黃素及大豆卵磷脂→溶于甲醇中，定容至50 mL，作為大豆黃素磷脂物理混合物輔助檢測。

使用紫外分光光度儀進行全波段掃描，觀察吸收峰，以對產(chǎn)物定性。

1.3.5傅里葉紅外光譜法

取4 mg樣品與200～300 mg KBr晶體在瑪瑙研缽中混勻，用不銹鋼勺取70～90 mg粉末用壓片機在25 kPa壓力下壓1 min制成約1 mm厚的透明薄片測定，空白樣品則直接采用充分研細后的KBr粉末即可[8]。

所需樣品：樣品1，4 mg大豆黃素磷脂復合物；樣品2，1 mg大豆黃素、3 mg大豆卵磷脂(物理混合)；樣品3，4 mg大豆黃素標準品；樣品4，4 mg大豆卵磷脂；空白樣，不加任何樣品，用來扣除背景。

1.3.6可溶性蛋白濃度測定

使用改良型Bradford試劑盒制作蛋白標曲并通過標曲定量制得蛋白溶液中大豆蛋白濃度。制作蛋白濃度標曲：y=0.001 8x,R2=0.996 9

將制得的大豆蛋白溶液(1.3.1)用去離子水稀釋300倍后測得吸光值為0.384，根據(jù)標準曲線求得蛋白溶液濃度為64.1 mg/mL。

1.3.7納米顆粒的粒徑及ζ電勢測定

ζ電勢及粒徑測量是使用納米粒度及ZETA電位儀，激光散射儀在在90°散射角，25 ℃下進行的，ζ電勢通過系統(tǒng)提供的軟件根據(jù)亨利公式：UE =(2εζ/3η)F(KA)測得，ε，η，和f(KA)分別是溶劑的介電常數(shù)，該溶液中蛋白質(zhì)的黏度和亨利常數(shù)。樣品在測定前需用去離子水稀釋至20倍[18]。

1.3.8高效液相色譜法

使用GB/T 23788—2009《保健食品中大豆異黃酮的測定方法 高效液相色譜法》來測定大豆黃素的濃度。樣品制備、提取及過濾后，經(jīng)高效液相色譜儀分析(使用C18柱分離)，根據(jù)保留時間定性，使用外標法定量[19]。

外標法需要制作大豆異黃酮混合標準使用溶液。準確稱取大豆黃素(純度為98%以上)4 mg，放置于10 mL容量瓶中，加入二甲基亞砜(色譜純)至接近刻度，使用超聲處理30 min后，添加二甲基亞砜至刻度。這樣制得的標準儲備液濃度即為400 mg/L。然后稀釋配置8.0 mg/L標準溶液、16.0 mg/L標準溶液、24.0 mg/L標準溶液、40.0 mg/L標準溶液。

色譜條件：色譜柱，C18，粒度5 μm不銹鋼色譜柱；流動相：流動相A，乙腈(色譜純)；流動相B，磷酸水溶液(pH值值3.0，0.45 μm濾膜過濾)；流速1.0 mL/min；波長260 nm；進樣量20 μL；柱溫30 ℃。

將大豆黃素標準使用溶液在上述色譜條件下進行測定，色譜圖見圖1。

圖1 大豆黃素標準溶液色譜圖

由圖1可定性得知大豆黃素保留時間為34 min，繪制以峰面積為橫坐標、標準液濃度為縱坐標的標準曲線，如圖2所示。

根據(jù)下式可以算得樣品濃度:

X=ci×V/m×1 000/1 000

(1-1)

式中：X為樣品中大豆黃素的含量，mg/kg或mg/L；ci為根據(jù)標準曲線得出的大豆黃素的濃度， mg/L；V為樣品稀釋液總體積的數(shù)值，g；m為固體半固體樣品質(zhì)量的數(shù)值，g。

1.3.9透射電鏡

將制得的大豆黃素納米乳球用去離子水稀釋100倍，混合均勻。取20 μL滴加在銅網(wǎng)上，等到溶液稍干再滴加20 μL樣品溶液，重復4～5次，保證銅網(wǎng)上殘留有足夠的樣品，常溫下放置至干燥徹底，即為待測樣品[12]。

將透射電鏡加壓至120 kV，將待測樣品裝入樣品桿，插入試樣臺進行預抽真空。等待綠燈亮后10 min，完全插入試樣臺，過2 min后加燈絲電流。

準備工作結(jié)束后，對待測樣品進行觀察分析，并聚焦拍照供分析使用。

觀察完畢后，將放大倍數(shù)設定在40 K，束流聚焦在觀察屏中心，關掉燈絲電源，樣品桿復位，隨后取出樣品桿。實驗完畢后，高壓降至20 kV，接著關掉高壓。置ACD模式，加熱去除冷阱中剩余的液氮。完成后檢查空調(diào)和除濕機的情況，離開。

2 結(jié)果與討論

2.1 納米乳球的研究

2.1.1投料比及溫度對納米乳球粒徑及ζ電勢的影響

制備投料比分別為2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶7及純蛋白(SPI)、純多糖(SPSS)的納米乳球，均質(zhì)完成后各取100 mL至80 ℃水浴中加熱1小時及直接常溫放置1 min。4 ℃下儲存過夜。取出后放置至室溫，將納米乳球用蒸餾水稀釋20倍后使用納米粒度及ZETA電位儀測量不同條件下的納米乳球粒徑及ζ電勢。測得結(jié)果如圖3，表2所示(H為均質(zhì)后加熱組，U為均質(zhì)后不加熱組)。

圖3 不同投料比下納米乳球的粒徑分布

投料比電勢(H)電勢(U)2∶111．9512．71∶13．52．421∶2-23．4-12．41∶3-8．07-8．91∶4-8．185-7．621∶5-17．1-17．851∶7-6．44-7．85SPI 19．45 19．9SPSS-15．3-13．05

由圖3中的粒徑分布可知，在投料比為1∶3、1∶5及SPI時，納米乳球的顆粒粒徑較小，可以初步判斷為這三者為較合適的投料比，同時可以看出SPSS的粒徑過大。從表2分析可以發(fā)現(xiàn)，當多糖與蛋白的投料比大于1∶1時，制得的納米乳球的ζ電勢與多糖接近，初步證明納米凝膠具有多糖表面。從粒徑及ζ電勢分布看，加熱與不加熱的影響不明顯，不能直接判斷出哪種條件對納米乳球粒徑的影響更大。

2.1.2pH值值對納米乳球粒徑的影響

選擇投料比為1∶3、1∶5及純SPI，均質(zhì)完成后取100 mL至80 ℃水浴中加熱1 h及直接常溫放置1 h。4 ℃下儲存過夜后放置至室溫，調(diào)節(jié)pH值值為2.0、3.0、3.25、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0，4 ℃下儲存24 h，將納米乳球用蒸餾水稀釋20倍后使用納米粒度及ZETA電位儀測量不同條件下的納米乳球粒徑。測定結(jié)果如表3，圖4～圖7所示(H為均質(zhì)后加熱組，U為均質(zhì)后不加熱組)。

由表3可看出，純SPI制備納米乳球時，從粒徑分布上看，加熱時整體粒徑較小，當pH值在2.0至3.25時，粒徑分布較小，但顯著大于投料比1∶3和1∶5時測得的粒徑，pH值大于3.25時(pH值4.0以上)，粒徑出現(xiàn)飛躍，達到了微米級，初步分析可能是由于該體系中沒有大豆多糖來形成穩(wěn)定聯(lián)結(jié)，均質(zhì)后不能形成納米乳球，僅僅是大豆蛋白分散于溶液中。當pH值小于3.25時，大豆蛋白帶正電荷，分子靜電排斥，測得的樣品的粒徑較小。pH值從3.25到5，處于SPI等電點附近，大豆蛋白聚集，產(chǎn)生絮凝，顆粒粒徑增大，證明純大豆蛋白不適合用于制備納米乳球。

由于大豆蛋白與大豆多糖在均質(zhì)前的pH值為3.25，在該pH值值下，大豆蛋白和大豆多糖攜帶相反的電荷，并且蛋白質(zhì)加熱前是分散的，有利于大豆蛋白/大豆多糖納米乳球的形成。由此可見，后續(xù)pH值的調(diào)整影響的是制備得到的納米乳球在不同pH值條件下的粒徑變化。由圖4中的粒徑分布可知，投料比為1∶3的情況下，pH值在2.0至4.0時，粒徑小幅變化，在這個pH值范圍內(nèi)，大豆蛋白與大豆多糖納米乳球處在一個較穩(wěn)定的狀態(tài)。同時，在pH值為6.0時，納米乳球的粒徑與相鄰的pH值比較粒徑增大較明顯，因為多糖鏈在較高的pH值下攜帶更多的負電荷，這使得凝膠表面的多糖鏈更加擴展。當整體環(huán)境pH值呈堿性時，大豆蛋白和大豆多糖均攜帶負電荷，凝膠化后的蛋白質(zhì)和多糖之間存在的靜電斥力使納米乳球不分離，使納米乳球具有穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，從粒徑整體分布上看，加熱后的納米乳球變化要稍小于未加熱的納米乳球。

表3 不同pH值下納米乳球的粒徑分布(純SPI體系)(Dh/nm)

圖4 不同pH值下納米乳球的粒徑分布(投料比1∶3)

圖5 不同pH值下納米乳球的粒徑分布(投料比1∶5)

由圖5中的粒徑分布可知，投料比為1∶5的情況下，當納米乳球pH值小于5.0時，粒徑大小明顯要小于pH值大于5.0時的納米乳球，證明pH值2.0至4.0為較合適的pH值范圍，同時與1∶3的情況相似，當pH值為6.0時，未加熱的粒徑增大明顯。從粒徑整體分布上看，加熱后的納米乳球穩(wěn)定性要明顯優(yōu)于未加熱的納米乳球。8.5*107Pa下均質(zhì)3分鐘也許不能使大豆蛋白與大豆多糖產(chǎn)生足夠的聯(lián)結(jié)，較高的加熱溫度和加熱時間會誘導蛋白質(zhì)變性及強凝膠化，從而增加納米乳球的穩(wěn)定性。

圖4，圖5數(shù)據(jù)比較，從粒徑整體分布看，1∶3H的穩(wěn)定性不如1∶5H，證明1∶5為最好的投料比，從1∶5H的整體粒徑分布上可以看出，pH值為3.25時，粒徑最小，證明在該pH值下，納米乳球最穩(wěn)定。

2.1.3NaCl濃度對納米乳球粒徑和電勢的影響

選擇投料比為1∶3、1∶5及純SPI，均質(zhì)完成后分別取100 mL至80 ℃水浴中加熱1 h及直接常溫放置1 h。4 ℃下儲存過夜后放置至室溫，分別添加NaCl至濃度為0.05、0.10、0.20 mol/L，混勻至溶解后將納米乳球用蒸餾水稀釋20倍后使用納米粒度及ZETA電位儀測量不同條件下的納米乳球粒徑及ζ電勢。20 d后復測考察其穩(wěn)定性。設置該因素主要是為了模擬納米乳球在人體內(nèi)的釋放與吸收，故選擇pH值值5.0與6.0，同時考慮生理鹽水的濃度為0.9%，即0.153 8 mol/L，設置3個鹽濃度梯度觀察，為了提供對比性，故投料比選擇1∶3及1∶5兩組。

表4 不同pH值值下納米乳球粒徑隨NaCl濃度的變化情況(Dh/nm)

表5 不同pH值值下納米乳球電勢隨NaCl濃度的變化情況(Dh/nm)

由表4中不同pH值的粒徑分布可以看出，pH值5.0的粒徑要小于pH值6.0，這也與上步得出的結(jié)論相符。pH值6.0時納米乳球粒徑增大明顯。從加熱與不加熱的粒徑對比情況看，加熱組要優(yōu)于不加熱組。綜上，可以看出最合適的條件為pH值5.0，均質(zhì)后加熱。同時，隨著NaCl濃度的增高，納米乳球的粒徑增大明顯，到0.2 mol/L時即使是粒徑最小的pH值5.0加熱粒徑也超過了600 nm，未加熱的則達到了微米級。由投料比為1∶3的粒徑的整體分布與投料1∶5的粒徑的整體對比可知，投料比為1∶3時的納米乳球粒徑大于1∶5。

為了考察其存儲穩(wěn)定性，在4 ℃下儲存20 d后，用肉眼觀察發(fā)現(xiàn)投料比為1∶3H及1∶3U的納米乳球均已出現(xiàn)絮凝、分層現(xiàn)象，證實其結(jié)構(gòu)已被破壞，不再對其粒徑及電勢復測；投料比為1∶5的納米乳球依舊均一，對其進行復測，從表5可以看出，ζ電勢的變化不明顯，同時發(fā)現(xiàn)投料比為1∶5H時，NaCl濃度為0.05 mol/L時，乳球粒徑減小，濃度為0.10 mol/L時，乳球粒徑基本不變，NaCl濃度為0.2 mol/L時，乳球粒徑增大。證明NaCl濃度為0.2 mol/L時不利于其的儲存。

2.1.4pH值對大豆黃素納米乳球粒徑的影響

為了試驗大豆黃素納米乳球在不同pH值下的穩(wěn)定性，調(diào)節(jié)pH值值為2.0、3.25、5.0、7.0、9.0。4 ℃下儲存24 h，將納米乳球用蒸餾水稀釋20倍后使用納米粒度及ZETA電位儀測量不同條件下的納米乳球粒徑。測量結(jié)果如圖6所示。

圖6 不同pH值下大豆黃素納米乳球的粒徑分布

由上圖的粒徑分布可以看出，pH值3.25依舊是大豆黃素納米乳球最穩(wěn)定的pH值，并且在pH值趨于中性時粒徑增大明顯。證明大豆黃素納米乳球的儲存參考pH值應為pH值3.25左右。

2.1.5大豆黃素納米乳球的透射電鏡分析

將制得的大豆黃素納米乳球稀釋100倍后，用透射電鏡在120 kv下觀察顆粒結(jié)構(gòu)，如圖7所示。

圖7 大豆黃素納米乳球在透射電鏡下的成像圖

由圖7可以看出，大豆黃素納米乳球的結(jié)構(gòu)為大豆蛋白被包裹在大豆多糖中，大豆多糖的親水鏈延伸出去，互相聯(lián)結(jié)形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，同時稀釋100倍后結(jié)構(gòu)也未被破壞，證明其能穩(wěn)定的在水相中存在。透射電鏡測得納米乳球粒徑大概在200 nm左右，與納米粒度及ZETA電位儀上測定的粒徑結(jié)果差異較大，原因為在納米粒度及ZETA電位儀上測定時，多糖鏈之間的空間位組作用導致整體粒徑變大，而電鏡的圖中深色部分只為大豆蛋白，因此兩者結(jié)果有一定差異。

3 結(jié)論

3.1 大豆蛋白-大豆多糖納米乳球

對制得的大豆蛋白-大豆多糖納米乳球進行單因素實驗后，可以得知：大豆蛋白-大豆多糖納米乳球制備的最佳投料比為1∶5，剪切均質(zhì)后80 ℃加熱1 h可以有效減小粒徑，增加納米乳球的穩(wěn)定性。pH值值對粒徑的影響為：pH值3.25粒徑最小，為最合適的環(huán)境pH值，pH值接近中性時，納米乳球增大。由于其在酸性條件下較穩(wěn)定，證明其能被應用于大部分食品及飲料中。

納米乳球的穩(wěn)定性隨NaCl濃度的增加而降低，pH值5.0的乳液情況要優(yōu)于pH值6.0的乳液，當NaCl濃度達到0.2 mol/L時，4 ℃下儲存20 d乳液出現(xiàn)絮凝分層現(xiàn)象，從粒徑可知，pH值5.0時粒徑增大幅度較pH值6.0時小，證明pH值5.0時更穩(wěn)定。證明NaCl對納米乳球的穩(wěn)定性影響較明顯。

3.2 大豆黃素納米乳球

大豆黃素納米乳球的制備條件選擇上步分析出的投料比1∶5，均質(zhì)后加熱。從不同pH值的粒徑分布看，pH值3.25時的粒徑最小，證明加入大豆黃素磷脂復合物后，pH值3.25依舊為納米乳球儲存過程中最合適的環(huán)境pH值[20]。與上步得出的結(jié)論一致。其他pH值時的粒徑比未載藥時的粒徑略大，可能是由于納米乳球?qū)Υ蠖裹S素磷脂復合物的包裹造成的。

[1] 梁曉芳. 6種大豆異黃酮單體的分離、純化及穩(wěn)定性研究[D].北京：中國農(nóng)業(yè)科學院，2014.

[2] 高榮海，張春紅，趙秀紅，等.大豆異黃酮研究進展[J].糧食與油脂，2009(5)：1-4.

[3] 王 燕，王艷春，范紅艷，等.大豆異黃酮藥理作用的研究進展[J].吉林醫(yī)藥學院學報，2013，34(3)：225-228.

[4] Yu Z L, Tang Y N, Hu D S, et al. Inhibitory effect of genistein on mouse colon cancer MC-26 cells involved TGF- b1/Smad pathway [J]. Biochem BiopHys Res Commun, 2005,333 (3): 827-832.

[5] Kaibori M, Yanagida H, Yokoigawa N, et al. Effect of Pirfenidone on Induction of Chemokines in Rat Hepatocytes [J]. Transplant Proc,2004, 36 (7): 1980-1984.

[6] 劉夢喜，符華林，費文波.氟苯尼考磷脂復合物的制備及表征[J].中國抗生素雜志，2015，40(2)：103-107.

[7] 趙安權(quán)，王倩倩，李 佳，等.綠原酸磷脂復合物制備工藝的研究[J].華西藥學雜志，2015，30(2)：155-157.

[8] 羅婭君，張 琦，張新申，等.大豆黃素磷脂復合物的制備及光譜學分析[J].深圳大學學報：理工版，2010，27(2)：224-229.

[9] J M Gutiérrez, González, A Maestro, et al. Nolla, Nano-emulsions: New applications and optimization of their preparation[J].Curr Opin Colloid Interface Sci, 2008 (13): 245.

[10] 楊葉波;蔡培培;何文森. 大豆蛋白質(zhì)的提取技術(shù)的研究進展[J].廣州化工,2015,43(9):26-27.

[11] Yin Baoru, Deng Wei, Xu Keke, et al. Stable nano-sized emulsions produced from soy protein and soy polysaccharide complexes [J]. Journal of Colloid and Interface Science, 2012,380:51-59.

[12] 楊 城，管 驍.水溶性大豆多糖理化及黏度性質(zhì)研究[J].食品安全質(zhì)量檢測學報，2014(10)：3331-3336.

[13] Ding Xuzhe, Yao Ping. Soy Protein/Soy polysaccharide complex nanogels: Folic acid loading, protection, and controlled delivery [J]. Transplant Proc,2004, 33 (9): 1916-1925.

[14] D Guzey, D J Mc Clements. Formation, stability and properties of multilayer emulsions for application in the food industry [J]. Adv Colloid Interface Sci, 2006,128: 227.

[15] 齊軍茹，翁靜宜，康燕輝，等.大豆酸溶蛋白/大豆多糖納米乳液制備及表征[J].現(xiàn)代食品科技，2015，3(6)：24-29.

[16] 馮 東，李雪梅，王丙蓮.紫外-可見分光光度法在食品檢測及食品安全分析中的應用[J].食品工業(yè),2013(6):190-192.

[17] 王海軍，寧新霞.紫外可見分光光度技術(shù)的應用進展[J]. 理化檢驗:化學分冊,2012,48(6):740-745.

[18] 吳新民，范茂松，潘兮.納米顆粒的粒徑測定[J]. 電子測量與儀器學報,2004 (z1):69-77.

[19] 權(quán) 靜，盧定強，張 筱，等.高效液相色譜法檢測大豆粕大豆黃素及染料木素含量[J]. 糧食與油脂,2004(5):49-51.

[20] 史亞軍，吳品江，許潤春，等.黃芩苷磷脂復合物基本性質(zhì)研究[J].中草藥，2012，43(1)：78-82.

Preparationandcharacterizationofdaidzeinnano-sizedemulsions

Xia Xiuhua

Wuxi Institute of Commerce (Wuxi 214122)

In order to improve the absorption and bioavailability of daidzein in body, daidzein was made into daidzin nano-sized emulsion. The effect of the feeding ratio, pH, NaCl concentration, heating conditions to the preparation and stablility of soybean protein-soybean polysaccharides nano-sized emulsions were reasearched. The results show the optimal preparation conditions are: feeding ratio of 1∶5, homogenized three times under 8.5×107Pa, then heated 1 h at 80 ℃, the minimum diameter at pH 3.25 is 270 nm, and nano-sized emulsion diameter increases with the change of concentration of NaCl. Then daidzein nano-sized emulsion was prepared according to the optimum condition, and the effect of different pH value was studied, and electron microscopy (sem) was used to characterize. The results show that: the particle size is minimum at pH 3.25 and the structure is stable. The stable network structure is polysaccharides extending hydro pH ilic structure out, cross-linked with each other is proved by electron microscopy.

daidzein; nano-sized emulsions;feeding ratio; pH

2017-10-20

夏秀華，女，1980年出生，研究方向為食品安全與保健食品。

TS210

A

1672-5026(2017)06-060-07