孫偉楠

（中國醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，沈陽 110122）

地黃飲子對急性腦中風(fēng)大鼠腦組織SDF1和BDNF表達的影響

孫偉楠

（中國醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，沈陽 110122）

目的 探討地黃飲子對急性腦中風(fēng)大鼠腦組織腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）和基質(zhì)細胞衍生因子1（SDF1）表達的影響。方法 選取大鼠60只，隨機分為正常組、治療組和缺血組，各20只。麻醉后鉗夾頸總動脈40 min，建立急性腦中風(fēng)模型。治療組：灌服地黃飲子湯36 g/kg，缺血組：灌服鹽水1次，正常組：正常飲食。3周后，測量大鼠腦梗死面積，測定三組海馬CA1區(qū)BDNF和SDF1蛋白表達情況。結(jié)果 正常組腦梗死面積為0。治療組腦梗死面積明顯低于缺血組，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。正常組海馬CA1區(qū)BDNF和SDF1蛋白含量均明顯高于治療組和缺血組，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。治療組BDNF和SDF1蛋白含量明顯高于缺血組，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 地黃飲子通過提高BDNF和SDF1蛋白水平，增加內(nèi)源性保護機制和神經(jīng)干細胞增殖、遷移，保護神經(jīng)元的功能。

地黃飲子；急性腦中風(fēng)；BDNF；SDF1

急性腦中風(fēng)是臨床上致殘率和死亡率較高的疾病，由于腦缺血造成大腦神經(jīng)受損，缺血區(qū)神經(jīng)功能缺失。缺血性腦血管病發(fā)病率極高，內(nèi)源性神經(jīng)再生促進腦卒后神經(jīng)功能恢復(fù)，彌補缺失的神經(jīng)功能。有報道[1]地黃飲子能促進腦神經(jīng)功能恢復(fù)，治療缺血性腦血管病、中風(fēng)及后遺癥、血管性癡呆等療效較好。本研究通過地黃飲子調(diào)節(jié)海馬CA1區(qū)腦組織腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）和基質(zhì)細胞衍生因子1（SDF1）蛋白表達，探討地黃飲子修復(fù)神經(jīng)功能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物分組 健康清潔級Wistar大鼠60只，體重250～280 g，由中國醫(yī)科大學(xué)動物部提供。隨機分為正常組、治療組和缺血組，各20只。

1.2 動物模型的制備 用10%水合氯醛麻醉、固定，切開頸部正中，分離出雙側(cè)頸總動脈，動脈夾鉗夾40 min，同時紗布覆蓋創(chuàng)面，松開動脈夾40 min后，再次用動脈夾鉗夾40 min，急性腦中風(fēng)狀態(tài)，模型成功。

1.3 治療方法 參照《素問·宣明論方》：熟地黃12 g，巴戟天15 g，炮附子15 g，麥門冬15 g，肉蓯蓉15 g，石斛15 g，菖蒲12 g，五味子10 g，白茯苓12 g，山茱萸15 g，官桂10 g，遠志10g。煎煮2次，混合藥液，蒸發(fā)濃縮，干燥密封備用。造模后，治療組：每日灌服地黃飲子湯36 g/kg。缺血組：每日灌服鹽水1次。正常組：正常飲食，治療3周。

1.4 檢測指標(biāo)及方法 （1）測量大鼠腦梗死面積。3周后斷頭取腦，大腦冠狀切片，加入1%2，3，5-三苯基四氮唑的磷酸緩沖液，電鏡圖像分析，計算腦梗死面積，腦梗死=(白色的梗死面積/片子的總面積)×100%。

（2）免疫組化法檢測海馬CA1區(qū)BDNF蛋白。固定、石蠟包埋、切片、水化，滅活、抗原修復(fù)，滴加兔抗人BDNF多克隆抗體（北京博奧森生物有限科技公司，濃度1:300）和鼠抗BrdU單克隆抗體（北京博奧森生物有限科技公司，濃度1:50），濕化、顯色、脫水封片。日本Olympus圖像分析儀，計數(shù)BDNF和BrdU的陽性細胞數(shù)量，圖像分析平均積分光密度（IOD）。取10 mg缺血腦組織，用ELISA試劑盒測定每1 mg蛋白中SDF1的含量。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 用SPSS 17.0分析，計數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腦梗死面積 正常組腦梗死面積為0。治療組腦梗死面積明顯低于缺血組，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

表1 3組腦梗死面積比較

2.2 海馬CA1區(qū)BDNF、SDF1蛋白含量 正常組BDNF、SDF1蛋白含量明顯高于治療組和缺血組，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。治療組BDNF、SDF1蛋白含量明顯高于缺血組，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表2 3組海馬CA1區(qū)BDNF、SDF1蛋白含量比較 （±s）

表2 3組海馬CA1區(qū)BDNF、SDF1蛋白含量比較 （±s）

注：與正常組比較，a P＜0.05；與缺血組比較，b P＜0.05

組別 例數(shù) BDNF SDF1治療組缺血組正常組20 20 20 83.32±11.46ab 61.25±12.31a 100.67±10.36 2.48±0.83ab 0.78±0.96a 3.23±0.87

3 討論

BDNF在腦內(nèi)廣泛分布，尤其集中在大腦海馬CA1區(qū)和大腦皮層，包含神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、促進神經(jīng)細胞增殖、分化、生長等功能，BDNF與腦源性神營養(yǎng)因子受體 (TrkA等)結(jié)合，激活TrkA信號傳導(dǎo)，保護神經(jīng)元，促進神經(jīng)細胞存活，同時，BDNF還具有抗凋亡，促進細胞增殖，形成新生血管等作用，緩解由缺血引起的神經(jīng)元損傷[2]。本研究結(jié)果顯示，急性腦中風(fēng)導(dǎo)致海馬CA1區(qū)BDNF蛋白表達明顯減少，這與范文濤[3]的研究結(jié)果一致。地黃飲子治療組BDNF蛋白表達高于缺血組，證實了地黃飲子通過增加BDNF蛋白表達，增強對內(nèi)源性保護機制，保護神經(jīng)功能。

SDF1具有調(diào)節(jié)神經(jīng)功能和增強神經(jīng)信息傳遞的功能，當(dāng)腦組織缺血損傷時，內(nèi)源性神經(jīng)干細胞誘導(dǎo)SDF1遷移和分化，修復(fù)缺血的神經(jīng)損傷。由于腦缺血區(qū)的炎癥因子和SDF1同時刺激，海馬區(qū)神經(jīng)干細胞增殖、遷移，在損傷區(qū)分化為神經(jīng)元，修復(fù)神經(jīng)損傷。有研究[4]與本研究結(jié)果相同，地黃飲子可以增加腦缺血區(qū)SDF1蛋白表達水平，進一步增加神經(jīng)干細胞遷移、增殖。缺血組SDF1蛋白表達水平明顯低于正常組，地黃飲子治療組SDF1蛋白表達水平明顯高于缺血組，提示地黃飲子將進一步修復(fù)神經(jīng)功能。

“毒損腦絡(luò)”是中醫(yī)對中風(fēng)理論的新學(xué)說，認為由于毒邪損傷了腦絡(luò)導(dǎo)致中風(fēng)發(fā)作，絡(luò)脈破損或拘攣瘀閉，由氣血滲灌失常導(dǎo)致，中藥地黃飲子具有驅(qū)毒化瘀功效，在治療腦缺血中效果顯著。綜上所述，地黃飲子通過增加BDNF和SDF1蛋白表達，激活神經(jīng)干細胞遷移、增殖，促使內(nèi)源性神經(jīng)細胞再生，減少神經(jīng)元受損，有效地保護神經(jīng)元的功能，為臨床促使內(nèi)源性神經(jīng)細胞再生和神經(jīng)干細胞增殖、遷移提供新的理論依據(jù)。

[1]鄒偉，于婷婷，王冬，等.頭針透穴法對腦出血大鼠腦組織中β-cate-nin表達影響的實驗研究[J].中醫(yī)藥信息，2014，31(1):76-79．

[2]謝寧，劉艷麗，宋琳，等.地黃飲子的實驗研究進展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2015，33(12)：2823-2325.

[3]范文濤，王倩.地黃飲子對急性腦缺血大鼠神經(jīng)干細胞遷移的影響[J].中醫(yī)學(xué)報，2013，28（12）：1834-1835.

[4]王倩、范文濤，賀又舜.地黃飲子含藥血清對胎鼠海馬神經(jīng)干細胞遷移的影響[J].中醫(yī)藥學(xué)報，2015，43(1):8-10.

The Effect of Dihuang Drink on the Expression of SDF1 and BDNF in Rats with Acute Cerebral Apoplexy

SUN Weinan
(Basic Medical College,China Medical University,Liaoning province,Shenyang 110122,China)

Objective To explore the effect of Dihuang drink on the expression of BDNF and SDF1 in rats with acute cerebral apoplexy.Methods 60 rats were randomly divided into two groups:normal group,treatment group and ischemic group.After anesthesia,the carotid artery was 40min and the model of acute cerebral apoplexy was established.Treatment group:potion of decoction of Dihuang drink (36g/kg),ischemia group:1 time,normal group:normal diet.Three weeks later,the area of cerebral infarction was measured,and the expression of BDNF and SDF1 protein in three groups of hippocampal CA1 regions were measured.Results The normal area of cerebral infarction were 0.The area of cerebral infarction in the treatment group was significantly lower than the ischemic group P＜0.05,and the difference was statistically significant.The contents of BDNF and SDF1 protein in the normal group of hippocampus CA1 region were significantly higher than those in the treatment group and the ischemic group,P＜0.05 was statistically significant.The content of BDNF and SDF1 protein in the treatment group was significantly higher than that in the ischemic group P＜0.05,and the difference was statistically significant.Conclusion In order to protect the function of neuronal cells,it increases the level of BDNF and SDF1 protein and increases the proliferation and migration of endogenous protective mechanisms and neural stem cells.

Dihuang drink;acute cerebral apoplexy;BDNF;SDF1

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.24.066

1672-2779（2017）-24-0148-02

李海燕 本文校對：施 蓓

2017-10-13）