楊 軍，王艷菊，白永文

（云南省麗江市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督綜合檢測(cè)中心，云南 麗江 674100）

瑪咖酰胺快速測(cè)定方法應(yīng)用研究

楊 軍，王艷菊，白永文

（云南省麗江市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督綜合檢測(cè)中心，云南 麗江 674100）

主要以瑪咖中的瑪咖酰胺作為研究對(duì)象，通過試驗(yàn)，建立了快速、高效的瑪咖酰胺液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。在研究中所選擇的瑪咖樣品均經(jīng)由石油醚-超聲輔助進(jìn)行提取，并運(yùn)用型號(hào)為ZORBAX C18的色譜柱對(duì)樣品進(jìn)行分離，用紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)，將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的甲酸作為流動(dòng)相，運(yùn)用乙腈-1 mml/L乙酸銨水溶液進(jìn)行洗脫。最終結(jié)果表明，在質(zhì)量濃度為0.01～10.0 μg/L的瑪咖酰胺中具備線性關(guān)系，其定量限為20 ng/kg，檢出限為5.0 ng/kg。其中，加標(biāo)量分別為0.1、0.2和0.02μg/kg時(shí)，回收率保持在92.0%～115.6%，這也進(jìn)一步說明此方法滿足瑪咖酰胺分析測(cè)定要求。

瑪咖；瑪咖酰胺；快速測(cè)定；檢出限

瑪咖在我國的云南迪慶、麗江、昭通等地均有分布，而瑪咖酰胺作為瑪咖中的特征化合物，其生物活性呈現(xiàn)出多樣化的特點(diǎn)，對(duì)其特征進(jìn)行測(cè)定時(shí)，多運(yùn)用液相色譜方法，但由于瑪咖中蘊(yùn)含的成分較為復(fù)雜，僅采用液相色譜方法測(cè)定的雜峰較多，也會(huì)干擾瑪咖酰胺的基質(zhì)。同時(shí)，也有相關(guān)文獻(xiàn)資料指出，運(yùn)用液相色譜-高分辨質(zhì)譜方法可以有效對(duì)瑪咖酰胺的定性進(jìn)行分析。在本文中，對(duì)瑪咖中瑪咖酰胺進(jìn)行測(cè)定主要采用現(xiàn)代定量能力比較強(qiáng)的三重四極桿質(zhì)譜儀，并在此基礎(chǔ)上，結(jié)合超高效液相色譜對(duì)瑪咖酰胺質(zhì)譜斷裂的方式展開了研究，進(jìn)而了解和分析了瑪咖酰胺特征光譜學(xué)信息，也為瑪咖中瑪咖酰胺更加深入的研究提供了參考。

1 快速測(cè)定實(shí)驗(yàn)

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

在本次實(shí)驗(yàn)中所需要運(yùn)用到的儀器有以下幾個(gè)：①高效液相色譜儀（配置紫外檢測(cè)器），島津LC-20A；②液質(zhì)聯(lián)用儀，島津LCMS-8030；③色譜柱為Waters XTerra C18（規(guī)格為250 mm×4.6 mm，5 μm）；④超聲清洗機(jī)（功率≥200 W）；⑤旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；⑥離心機(jī)（可放置50 mL離心管）。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)材料

在本次實(shí)驗(yàn)中所涉及到的材料有以下幾種：①分析純的石油醚、色譜純的乙腈和純凈水；②5種瑪咖酰胺對(duì)照品（間甲氧基-芐基-亞麻酰胺、芐基-亞麻酰胺、間甲氧基-芐基-亞油酰胺、芐基-亞油酰胺、芐基-十六烷酰胺）；③其他使用的實(shí)驗(yàn)材料的純度都在97%以上。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

先對(duì)5種瑪咖酰胺對(duì)照品進(jìn)行稀釋，運(yùn)用甲醛進(jìn)行定容得到混合的標(biāo)準(zhǔn)溶液，對(duì)溶液進(jìn)行避光保存；將瑪咖中瑪咖酰胺用石油醚進(jìn)行超聲輔助提取，旋蒸干燥后乙腈定容，主要運(yùn)用乙腈對(duì)瑪咖酰胺進(jìn)行溶解，并將之以待測(cè)溶液的方式呈現(xiàn)，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)。根據(jù)保留時(shí)間定性、與峰面積的比較進(jìn)行定量。

5種瑪咖酰胺對(duì)照品液相分離示意圖如圖1所示。

圖1 5種瑪咖酰胺對(duì)照品液相分離示意圖

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論

2.1 瑪咖中瑪咖酰胺的質(zhì)譜研究

運(yùn)用乙腈-水對(duì)5種瑪咖酰胺對(duì)照品進(jìn)行稀釋，并運(yùn)用一級(jí)質(zhì)譜對(duì)5種瑪咖酰胺進(jìn)行全面掃描，同時(shí)，以這些離子分別進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜掃描，發(fā)現(xiàn)含有m/z91碎片離子，通過化學(xué)結(jié)構(gòu)展開推測(cè)，在m/z91瑪咖酰胺結(jié)構(gòu)中其長鏈脫落之后剩余的芐基基團(tuán)，如圖2所示。

2.2 瑪咖酰胺快速測(cè)定方法的應(yīng)用

2.2.1 對(duì)提取條件的改進(jìn)

對(duì)石油醚、乙腈、甲醛提取溶劑進(jìn)行對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，石油醚對(duì)提取瑪咖酰胺的應(yīng)用效果最好，而乙腈和甲醛提取溶液效果相對(duì)較差。將超聲波應(yīng)用到提取過程中，可以提升提取物的分散效率，瑪咖酰胺作為低極性類化合物，可以吸附到細(xì)胞其他物質(zhì)之上，因此，將超聲波運(yùn)用到其中可以有效對(duì)細(xì)胞壁進(jìn)行破壞，使得游離細(xì)胞在提取溶劑中溶解，在最后實(shí)驗(yàn)結(jié)果中也表明了超聲波能夠發(fā)揮很好的輔助效果。

圖2 瑪咖酰胺斷裂方式推導(dǎo)圖

2.2.2 對(duì)質(zhì)譜條件進(jìn)行優(yōu)化

在上述中提到運(yùn)用一級(jí)質(zhì)譜和二級(jí)質(zhì)譜進(jìn)行掃描，但由于不同的瑪咖酰胺的化學(xué)結(jié)構(gòu)裂解的規(guī)律不一致，且m/z91在二級(jí)質(zhì)譜掃描中強(qiáng)度比較低，為了提高測(cè)定的穩(wěn)定性，需要選擇強(qiáng)度較高的瑪咖酰胺離子碎片，對(duì)其電壓優(yōu)化之后，得到MRM模式下質(zhì)譜條件。

2.2.3 對(duì)色譜條件進(jìn)行優(yōu)化

由于瑪咖中瑪咖酰胺的化學(xué)結(jié)構(gòu)中包含了長鏈脂肪酸結(jié)構(gòu)，并且這一結(jié)構(gòu)的化學(xué)極性較小，在C18柱上保留的時(shí)間比較長，根據(jù)實(shí)驗(yàn)顯示結(jié)果，將甲醛-水作為測(cè)定的流動(dòng)相，延長了出峰的時(shí)間，在這過程中所需要使用的甲醛比例也比較大，因此，在實(shí)驗(yàn)中盡量選擇乙腈，其具有很好的洗脫效果，且縮短了出峰時(shí)間。

2.3 線性范圍及檢出限

對(duì)5種瑪咖酰胺對(duì)照品稀釋成不同的濃度，并根據(jù)不同種瑪咖酰胺的峰面積對(duì)不同濃度的瑪咖酰胺進(jìn)行線性回歸。由于瑪咖樣本身含有一定的瑪咖酰胺，且含量高低不同，因此，在定量限和檢出限時(shí)，樣品質(zhì)量為0.5 g，以3倍和10倍信噪比對(duì)瑪咖酰胺的定量限和檢出限進(jìn)行有效判定，最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示瑪咖酰胺的相關(guān)系數(shù)較好，瑪咖酰胺的檢出限也比較低，可以滿足瑪咖中瑪咖酰胺快速測(cè)定要求。

2.4 精密度及回收率

上述樣品稱取0.5 g，并根據(jù)其定量限以1倍、5倍、10倍定量限作為添加濃度，對(duì)瑪咖酰胺開展回收實(shí)驗(yàn)。對(duì)5種瑪咖酰胺分別進(jìn)行3次回收實(shí)驗(yàn)，并對(duì)其回收率進(jìn)行計(jì)算和記錄。最終結(jié)果顯示，瑪咖酰胺的回收率在92.0%～115.6%，相比標(biāo)準(zhǔn)差的范圍在6.1%～12%，符合其測(cè)定的要求。

3 結(jié)論

本文對(duì)瑪咖中瑪咖酰胺的快速測(cè)定方法進(jìn)行了應(yīng)用研究，主要通過實(shí)驗(yàn)的方式展開，以瑪咖酰胺在高效液相中的特征光譜作為快速測(cè)定的基礎(chǔ)，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方式，選擇石油醚作為瑪咖酰胺的提取溶液，超聲波在其中發(fā)揮了輔助作用，并結(jié)合MRM監(jiān)測(cè)模式，可以快速、有效地對(duì)瑪咖酰胺進(jìn)行定性和定量分析，從而實(shí)現(xiàn)瑪咖中瑪咖酰胺的快速測(cè)定分析。

［1］趙雪飛，楊尚軍，白少巖，等.瑪咖化學(xué)成分及波譜特征研究進(jìn)展［J］.食品與藥品，2016，18（05）：375-378.

［2］邵炎，李蕓，劉濤，等.瑪咖中主要酰胺類化合物的提取工藝優(yōu)化研究［J］.食品研究與開發(fā)，2017，38（03）：35-40.

［3］中國科學(xué)院過程工程研究所，麗江市生物資源開發(fā)創(chuàng)新辦公室，麗江市生物產(chǎn)業(yè)協(xié)會(huì).DBS53/001—2015食品安全地方標(biāo)準(zhǔn) 瑪咖干制品［S］.［出版社不詳］，2015.

［4］李大偉.基于現(xiàn)代色譜技術(shù)的植物提取物活性成分的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及在擬生命體液中熱力學(xué)性質(zhì)的研究［D］.杭州：浙江大學(xué)，2016.

［5］郭謙亮，張?zhí)烊A，王寧，等.瑪咖不同提取部位對(duì)磷酸二酯酶5抑制作用的譜-效關(guān)系研究［J］.中草藥，2017，48（04）：728-736.

R284

A

10.15913/j.cnki.kjycx.2018.02.152

2095－6835（2018）02－0152－02

張思楠〕