徐 碩,金鵬飛,何笑榮,徐文峰,鄺詠梅

(北京醫(yī)院藥學(xué)部，國家老年醫(yī)學(xué)中心，藥物臨床風(fēng)險與個體化應(yīng)用評價北京市重點實驗室，北京 100730)

風(fēng)濕病病程長、根治困難,患者需要長期用藥來緩解癥狀。中藥制劑作用緩慢,一些不法分子在其中非法添加化學(xué)成分,以快速達(dá)到鎮(zhèn)痛效果,牟取非法利益[1-3]。由于添加化學(xué)成分的種類以及劑量的不確定性,中成藥和保健品質(zhì)量參差不齊、監(jiān)管難度較大[4]。腎上腺皮質(zhì)激素類藥物具有抗炎及抗過敏作用,但長期服用可導(dǎo)致醫(yī)源性腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)、誘發(fā)或加重感染以及骨質(zhì)疏松等不良反應(yīng)[5-6]。為遏制非法添加化學(xué)成分的不法行為,藥品檢驗及科研機(jī)構(gòu)進(jìn)行了有關(guān)檢測方法的研究。

1 抗風(fēng)濕類中成藥和保健品非法添加化學(xué)藥物概況

從文獻(xiàn)調(diào)研來看,目前抗風(fēng)濕類中成藥和保健品中的非法添加藥物包括糖皮質(zhì)激素類、非甾體類抗炎藥、鎮(zhèn)痛藥和抗生素4類,較為常見的是糖皮質(zhì)激素類和非甾體抗炎藥。檢測其中非法添加化學(xué)藥物的方法主要是薄層色譜(TLC)法、高效液相色譜(HPLC)法、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MS/MS)法和超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(UPLC-MS/MS)等。見表1。

表1抗風(fēng)濕類中成藥和保健品中非法添加化學(xué)藥物的類別及檢測方法

Tab.1 The types and analytical methods of illegally adulterated chemical substances in antirheumatic Chinese patent medicines and health foods

添加化學(xué)藥物的種類化學(xué)藥物名稱檢測方法糖皮質(zhì)激素類潑尼松、醋酸潑尼松、醋酸氫化潑尼松、氫化可的松、醋酸可的松、醋酸氫化可的松、丁酸氫化可的松、醋酸氟氫松、倍他米松、地塞米松、醋酸地塞米松、曲安西龍、曲安奈德、哈西奈德TLC法[7]、HPLC法[5,7-12]、HPLC-MS/MS法[12-15]、UPLC-MS/MS法[16-17]非甾體類抗炎藥 吲哚美辛、氨基比林、對乙酰氨基酚、阿司匹林、萘普生、布洛芬、芬布芬、保泰松、雙氯芬酸、雙氯芬酸鈉、吡羅昔康、美洛昔康、尼美舒利TLC法[7,18-19]、HPLC法[1,7,9-11,20-22]、HPLC-MS/MS法[12-13,17,23-26]、UPLC-MS/MS法[16-17,22,27]鎮(zhèn)痛藥鹽酸羅通定HPLC-MS/MS法[26]抗生素類甲氧芐啶HPLC-MS/MS法[12-13]、UPLC-MS/MS法[22]

2 檢測技術(shù)應(yīng)用

中藥和保健品中化學(xué)成分十分復(fù)雜,測定干擾因素多,再加上非法添加的化學(xué)藥品成分種類繁多、理化性質(zhì)差異大,檢測的難度大。

2.1TLC法 李惠敏[18]建立了抗風(fēng)濕類中成藥和保健品(包括片劑、膠囊、貼膏劑、酒劑和搽劑等)中4種解熱鎮(zhèn)痛藥的TLC快篩方法。取對乙酰氨基酚、雙氯芬酸鈉、萘普生和吲哚美辛各對照品,加乙醇溶解制成對照品溶液。液體制劑取樣品直接點樣,固體制劑取一次服用量樣品,用乙醇提取,作為供試品溶液。點樣于硅膠GF254薄層板上,展開劑為乙酸乙酯-二氯甲烷-冰醋酸(25∶25∶0.2),置于紫外光燈254 nm下檢視。該條件下能使4種化學(xué)藥物得到較好的分離。在50批樣品中,檢出12批陽性樣品,其中8批添加雙氯芬酸鈉,2批添加對乙酰氨基酚,2批添加吲哚美辛。

張鶴等[7]將對照品和樣品用甲醇提取,點于硅膠GF254薄層板上,采用乙酸乙酯-氯仿-丙酮(1.5∶4∶1)為展開劑,在紫外光燈254 nm下檢視。測定了15批市售抗風(fēng)濕類藥物,其中13批檢出醋酸潑尼松,1批檢出醋酸氫化可的松,2批檢出醋酸地塞米松。

2.2HPLC法 何笑榮等[8]建立了測定藍(lán)頂潤膚噴霧水、藍(lán)頂潤膚霜、適今可吡硫翁鋅氣霧劑、無名中藥膏以及三七片中非法添加倍他米松、曲安奈德、醋酸潑尼松、醋酸地塞米松等11種糖皮質(zhì)激素的HPLC法。對照品加無水乙醇溶解,外用制劑溶液加質(zhì)量濃度為20 g·L-1的氫氧化鈉溶液,飽和氯化鈉水溶液,用鹽酸調(diào)至pH值為3,用二氯甲烷-乙酸乙酯(40∶1)萃取,分取有機(jī)相,濃縮,殘渣用無水乙醇溶解。中藥膏和片劑加水,再用氯仿提取,合并有機(jī)相,之后操作同外用制劑溶液。采用C18柱,流動相為甲醇-5 mmol·L-1醋酸銨(pH 3.5)-乙腈,梯度洗脫,流速為0.8 mL·min-1,檢測波長為240 nm。該色譜條件下11種對照品質(zhì)量濃度在5～200 mg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,檢測限為0.2～1.0 ng。樣品測定結(jié)果顯示,藍(lán)頂霜、噴霧水及適今可吡硫翁鋅氣霧劑檢出倍他米松,三七片檢出地塞米松,無名中藥膏未檢出激素。

張學(xué)斌等[9]建立了用HPLC法測定舒筋定痛膠囊和壯骨風(fēng)濕靈膠囊中非法添加醋酸潑尼松、萘普生和吲哚美辛等6種化學(xué)藥物的方法。樣品用甲醇提取,采用C18柱,以甲醇-水(含1 mL·L-1醋酸)(60∶40)為流動相,檢測波長為240 nm,結(jié)果6種成分在該色譜條件下均能得到良好的分離,在壯骨風(fēng)濕靈膠囊樣品中檢出醋酸潑尼松、萘普生和雙氯芬酸鈉、吲哚美辛和布洛芬。

劉放等[11]建立了抗風(fēng)濕類中成藥(包括片劑、丸劑、膠囊劑、液體制劑和貼膏劑)中非法添加醋酸潑尼松、醋酸地塞米松和雙氯芬酸鈉等6種成分的方法。精密稱取各對照品,加甲醇溶解并稀釋。稱取1次服用量的片劑、丸劑、膠囊劑等樣品,加甲醇超聲提取,用0.45 μm微孔濾膜濾過,作為供試品溶液。貼膏劑加乙醚超聲提取,蒸干,殘渣用甲醇溶解。采用C18柱,流動相為甲醇-1 mL·L-1醋酸(60∶40),檢測波長為240 nm,在該條件下各成分達(dá)到基線分離,檢測限為1.8～20.5 ng。測定了18批,均未檢出以上6種成分。

趙艷等[21]建立了以HPLC法檢驗骨刺消痛膠囊中非法添加西藥吡羅昔康的方法。流動相A為乙腈-5 mL·L-1冰醋酸(60∶40),檢測波長為243 nm,結(jié)果吡羅昔康質(zhì)量濃度的線性范圍為1.068～53.40 μg·mL-1,在2批樣品中均檢出吡羅昔康。

2.3HPLC-MS/MS法 黃萍等[13]建立了抗風(fēng)濕、鎮(zhèn)痛類中藥樣品(膠囊)中非法添加醋酸潑尼松及潑尼松的HPLC-MS/MS方法。對照品加甲醇溶解,稱取相當(dāng)于1次用量的樣品,加甲醇超聲處理。采用C18柱,流動相為甲醇-0.01 moL·L-1甲酸銨溶液(甲酸調(diào)pH值至4.0)(70∶30),流速為0.4 mL·min-1,檢測波長為270 nm,電噴霧離子源(ESI),全掃描一級質(zhì)譜,選擇離子二級全掃描質(zhì)譜監(jiān)測方式,醋酸潑尼松和潑尼松的檢出限分別為0.2和0.3 ng。樣品測定結(jié)果顯示，有19批添加了醋酸潑尼松。

周建良等[12]建立了HPLC-MS/MS法檢測速效坐骨神經(jīng)痛丸、濃縮坐骨神經(jīng)痛丸、痛風(fēng)靈和白芍總苷膠囊中添加的氨基比林、對乙酰氨基酚、甲氧芐啶、氫化可的松和地塞米松等13種化學(xué)藥物。樣品用甲醇超聲提取,用體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇稀釋。以乙腈-1 mL·L-1甲酸水溶液為流動相,梯度洗脫,ESI電離源,正離子檢測模式,一級全掃描,二級質(zhì)譜為產(chǎn)物離子掃描模式。13種成分的分離良好,最小檢出限為0.003 1～0.947 1 ng；樣品分析結(jié)果顯示，白芍總苷膠囊未檢出抗風(fēng)濕化學(xué)藥物,濃縮坐骨神經(jīng)痛丸檢出對乙酰氨基酚和吲哚美辛,速效坐骨神經(jīng)痛丸和痛風(fēng)靈檢出吲哚美辛。

吳小紅等[26]建立了檢測風(fēng)濕定膠囊、消絡(luò)痛膠囊、筋骨痛膠囊、天麻頭痛片、骨刺消痛膠囊、克痹骨泰膠囊、薏辛除濕止痛膠囊、天麻膠囊、麝香風(fēng)濕膠囊、風(fēng)痛安膠囊、疏風(fēng)活絡(luò)片、風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎片、骨刺片、風(fēng)濕安泰片、天麻丸、坐骨神經(jīng)痛丸、復(fù)方關(guān)節(jié)炎膠囊、風(fēng)濕骨痛寧膠囊、風(fēng)濕安康膠囊、某醫(yī)院自制制劑和華佗筋骨痛膠囊中非法添加的芬布芬、美洛昔康、阿司匹林、鹽酸羅通定等10種化學(xué)藥物的HPLC-MS/MS方法。采用C18柱,以乙腈-20 mmol·L-1醋酸銨為流動相,梯度洗脫,ESI電離源,正、負(fù)離子檢測模式,全掃描一級質(zhì)譜、選擇離子二級掃描質(zhì)譜檢測方式。檢測了25批樣品,復(fù)方關(guān)節(jié)炎膠囊中檢出萘普生、雙氯芬酸鈉、布洛芬、吲哚美辛；風(fēng)濕骨痛寧膠囊中檢出吡羅昔康、萘普生、雙氯芬酸鈉、對乙酰氨基酚；某醫(yī)院自制制劑中檢出對乙酰氨基酚、雙氯芬酸鈉、布洛芬、吲哚美辛；華佗筋骨痛膠囊中檢出吡羅昔康、萘普生、雙氯芬酸鈉、布洛芬。

2.4UPLC-MS/MS法 趙鳳菊等[16]利用UPLC-MS/MS法,建立了抗風(fēng)濕顆粒中非法添加醋酸潑尼松、醋酸地塞米松、雙氯芬酸鈉和布洛芬的分析方法。流動相為乙腈-0.02 mol·L-1醋酸銨溶液,梯度洗脫,檢測波長為263 nm,ESI源,正負(fù)離子同時檢測,4種成分的線性關(guān)系良好,平均回收率為95.7%～98.1%,檢測限為0.8～12.8 ng。樣品分析結(jié)果顯示，顆粒劑中非法添加了醋酸潑尼松和雙氯芬酸鈉,每袋含量分別為6.2和30.5 mg。

來國防等[27]建立了以UPLC-MS/MS法分析風(fēng)濕靈膠囊、風(fēng)痛寧片以及某私人診所配制的抗風(fēng)濕制劑等樣品中非法添加阿司匹林、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉和吲哚美辛的方法,并以HPLC法定量。對照品及樣品加甲醇超聲處理,采用C18柱,以乙腈為流動相A,0.02 mol·L-1醋酸銨-0.5 mL·L-1醋酸溶液為流動相B,檢測波長為230 nm,ESI源,正負(fù)離子同時檢測,全掃描一級、二級質(zhì)譜。樣品測定結(jié)果顯示，風(fēng)濕靈膠囊中含布洛芬2.08%、雙氯芬酸鈉1.94%、吲哚美辛1.05%；風(fēng)痛寧片中含雙氯芬酸鈉1.27%；某私人診所配制的抗風(fēng)濕制劑中含氨基比林0.89%。

黃衛(wèi)平等[17]建立了用超高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜測定萬通筋骨片、祛風(fēng)止痛丸、通滯蘇潤江膠囊、風(fēng)濕液、復(fù)方風(fēng)濕寧片、風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎片、風(fēng)痛安膠囊、風(fēng)濕定膠囊、麝香風(fēng)濕膠囊、祛風(fēng)止痛膠囊、風(fēng)濕安泰片、腰息痛膠囊、腰痛寧膠囊、骨通貼膏、麝香鎮(zhèn)痛膏、消痛貼膏中非法添加醋酸地塞米松、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛等6種化學(xué)藥物的方法。用甲醇-1 mL·L-1醋酸為流動相,梯度洗脫,ESI源,負(fù)離子模式檢測,掃描一級、二級質(zhì)譜,通過比較樣品峰與對照品峰的保留時間、一級質(zhì)譜和二級質(zhì)譜碎片離子,6種成分分離度良好,檢測了17批樣品,未發(fā)現(xiàn)非法添加以上藥物。

3 討論

TLC法是鑒別和檢查中藥材及其制劑的有力手段之一,該方法操作簡單,尤其是對于基層藥品檢驗機(jī)構(gòu),可作為非法添加某些化學(xué)藥品成分的有效初篩手段,但其專屬性較差,可能會出現(xiàn)假陽性的情況[28]。

HPLC法是非法添加檢測中使用最為廣泛的技術(shù)手段,通過比較色譜峰與對照品色譜峰的保留時間及紫外光譜圖,可以基本確證是否含有與對照品一致的化學(xué)成分[29]?？疾焓欠穹欠ㄌ砑訒r,經(jīng)TLC法篩查的陽性樣品,往往需要用HPLC法做進(jìn)一步驗證。

HPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)兼具色譜的強(qiáng)大分離功能和質(zhì)譜的專屬定性功能,能對非法添加的化學(xué)藥品進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn),增加了分析檢測方法的選擇性和專屬性[30]。

UPLC-MS/MS是一種同時具備高通量分析檢測及數(shù)據(jù)快速獲取、處理的新型聯(lián)用技術(shù),但由于價格較貴、操作復(fù)雜,不易推廣。

4 結(jié)語

近年來,抗風(fēng)濕類中成藥和保健品中非法添加化學(xué)藥物的現(xiàn)象開始受到重視,非法添加檢測技術(shù)研究和應(yīng)用取得了一定的進(jìn)展。對于如何杜絕抗風(fēng)濕類中成藥和保健品非法添加化學(xué)藥物,不斷發(fā)展檢測技術(shù)是一方面,從多方面加強(qiáng)監(jiān)管也極為重要。這樣可以更好地打擊中藥和保健品中非法添加化學(xué)藥物的行為,保護(hù)消費(fèi)者的身體健康及合法權(quán)益,以確保廣大人民群眾的用藥安全。

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