李天芝，于新友，張 穎

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600）

結(jié)核病是由分枝桿菌引起的一種人獸共患慢性傳染病，兩千多年前已有相關(guān)發(fā)病記錄，在世界廣泛分布，是全球首屈一指的傳染病殺手。結(jié)核病曾導(dǎo)致全球10億人死亡，世界1/3人口感染過結(jié)核桿菌，2016年全世界約有1 040萬例結(jié)核病新發(fā)病例，我國是結(jié)核病大國，2011—2016年，全國年報(bào)告結(jié)核病患者數(shù)均在90萬人左右，約占全球結(jié)核病新發(fā)病數(shù)的10%，屬全球30個結(jié)核病“高負(fù)擔(dān)”國之一。豬結(jié)核病可由結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌和禽分枝桿菌引起[1]，一般不表現(xiàn)明顯的臨床癥狀。病變特征是在多種組織器官形成肉芽腫和干酪樣、鈣化結(jié)節(jié)病變，主要經(jīng)消化道傳播[2]，無明顯季節(jié)性，一年四季均可發(fā)生，呈散發(fā)。發(fā)病率和死亡率均不高，但由于其病程長，臨診表現(xiàn)不明顯，常常不被發(fā)覺，存在傳染給人的風(fēng)險(xiǎn)。豬結(jié)核病具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。近幾年，豬場和屠宰場發(fā)生的結(jié)核病病例有上升的趨勢，因此，養(yǎng)殖從業(yè)者應(yīng)重視該病的防控。本文論述了豬結(jié)核病的病原學(xué)、流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化、診斷及防控措施等，以提高養(yǎng)豬從業(yè)者以及獸醫(yī)相關(guān)工作者對豬結(jié)核病的認(rèn)識，從而做好該病防控工作。

1 病原學(xué)

引起豬發(fā)生結(jié)核病的細(xì)菌有3種分枝桿菌均是分枝桿菌屬，特性基本類似，在自然界中分布廣泛。革蘭氏染色為陽性，為平直或微彎的桿菌，有時(shí)分枝，呈絲狀，大小約 0.2～0.6 μm×1～10 μm，無鞭毛，不能運(yùn)動，菌體外層有莢膜，不產(chǎn)生芽孢[3]，專性需氧菌，不能產(chǎn)生內(nèi)外毒素。菌體生長非常緩慢，對培養(yǎng)基營養(yǎng)要求高，需在牛血清、雞蛋培養(yǎng)基或馬鈴薯培養(yǎng)基上才能良好地生長，在固體培養(yǎng)基上，菌落粗糙、隆起、邊緣不整齊，呈顆粒、結(jié)節(jié)或花菜狀，乳白色或米黃色。在液體培養(yǎng)基內(nèi)，液面形成有皺褶的菌膜，培養(yǎng)基保持透明，若培養(yǎng)液中加入吐溫-80，可使結(jié)核桿菌呈分散均勻生長。一般接種后3周左右開始增殖，14～15 h分裂1次，需2～6周才能出現(xiàn)肉眼可見的菌落。其中禽分枝桿菌生長速度最快，牛分枝桿菌最慢，最適宜生長溫度是37～37.5℃，結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌和禽分枝桿菌最適宜生長的酸堿度分別為 pH 7.4～8.0、pH 5.9～6.9、pH 7.2。分枝桿菌屬是一類兼性細(xì)胞內(nèi)寄生菌[4]，細(xì)胞壁脂質(zhì)含量高，抗酸染色染為紅色，雜菌染為藍(lán)色。結(jié)核桿菌不發(fā)酵糖類。過氧化物酶陽性，人型結(jié)核菌能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。某些菌株能產(chǎn)生少量硫化氫。V-P及甲基紅試驗(yàn)均為陰性。在牛乳中生長，牛乳無變化。對外界環(huán)境抵抗力強(qiáng)，尤其是對寒冷、干燥的環(huán)境，在干燥痰中存活10年，在水中存活5個月，在糞便或土壤中存活6~7個月，0℃時(shí)可活4～5個月。對酸堿具有一定的耐受性，在4%氫氧化鈉或3%鹽酸處理30 min，活力不受影響，對濕熱抵抗力弱，60℃30 min、70℃ 10 min，可被殺滅。對紫外線敏感，直射日光2 h內(nèi)能殺死該菌，但散光照射40 d細(xì)菌仍然存活。對消毒劑抵抗力較強(qiáng)，在5%石炭酸和2%來蘇兒中，經(jīng)24 h才能被殺滅，但在75%酒精或10%漂白粉中可很快死亡。通常治療分枝桿菌有效的藥物有異煙肼、利福平、鏈霉素、乙胺丁醇、卡那霉素、對氨基水楊酸、環(huán)絲氨酸、貝達(dá)喹啉和德拉馬尼，菌體容易產(chǎn)生耐藥性，隨著在動物體內(nèi)傳代次數(shù)增多，菌體毒力增強(qiáng)。

2 流行病學(xué)

結(jié)核病可侵害50多種哺乳動物和20多種禽類。豬結(jié)核病是一種慢性傳染病，多為散發(fā)，無明顯的季節(jié)性和地區(qū)性，一般不表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，死亡率也不高，容易被人們忽視，引起結(jié)核病的分枝桿菌在自然界中廣泛存在。病豬和帶菌豬是主要傳染源。病原體隨痰液、糞尿、乳汁等動物分泌物和排泄物排出體外，污染飼料、飲水及周邊環(huán)境，通過消化道和呼吸道傳染其它健康豬只，患病母豬也能垂直傳播給仔豬。由于豬對結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌、禽分枝桿菌均易感，當(dāng)豬與患病的動物接觸，或采食來自結(jié)核病人的泔水、病畜、病禽下水、未經(jīng)消毒的其它副產(chǎn)品等均可感染。因結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌均可感染人發(fā)病，因此豬結(jié)核病的研究具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。由于細(xì)菌對外界環(huán)境抵抗力強(qiáng)，豬群一旦感染后，很難清除。豬群營養(yǎng)不良、密度大、豬舍潮濕、陰暗、污穢、豬只缺乏運(yùn)動等原因均促進(jìn)豬結(jié)核病發(fā)生與流行。野豬作為儲存宿主在自然條件下也能長期隱性攜帶牛結(jié)核分枝桿菌，并傳染給其它動物。

3 臨床癥狀

豬結(jié)核病潛伏期長短不一，短的10多天，長的數(shù)月至數(shù)年。在扁桃體、頜下淋巴結(jié)、支氣管淋巴結(jié)、腸道淋巴結(jié)、肝臟、脾臟等部位出現(xiàn)病灶，初期常不表現(xiàn)出明顯臨床癥狀，但隨病程延長也會出現(xiàn)被毛粗亂、消瘦、干咳、呼吸困難、腹瀉、生長緩慢等癥狀。3種不同型分枝桿菌中牛型分枝桿菌對豬的危害最為嚴(yán)重，常預(yù)后不良，嚴(yán)重者可死亡。

4 病理變化

剖檢有時(shí)可見病豬貧血，血液稀薄，顏色變淡，頜下淋巴結(jié)、咽淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)腫大，質(zhì)地堅(jiān)實(shí)，切面有黃白色干酪樣壞死灶。扁桃體出現(xiàn)結(jié)核病灶。肺實(shí)質(zhì)內(nèi)散在粟粒大，呈白色半透明，堅(jiān)實(shí)的結(jié)節(jié)性病灶，結(jié)節(jié)由結(jié)締組織形成包膜，內(nèi)含干酪樣、豆腐渣樣物質(zhì)，這樣使肺部表面略呈凹凸不平[5]。肝臟、脾臟和腎臟有數(shù)量不等、大小不一的結(jié)核病灶，呈干酪樣變化，但鈣化不明顯。腿部腕關(guān)節(jié)和跗關(guān)節(jié)處腫大，切開有黃白色干酪樣物如豆腐渣樣。腹膜上密集豌豆大小的增生性串珠樣結(jié)節(jié)，通常豬只的結(jié)核病灶與機(jī)體的抵抗力有關(guān)，抵抗力強(qiáng)時(shí)，對結(jié)核菌的反應(yīng)以細(xì)胞增生為主，形成非特異性肉芽組織。當(dāng)機(jī)體抵抗力低時(shí)，則以滲出性炎癥為主，出現(xiàn)干酪樣壞死、化膿或鈣化。

5 診斷

根據(jù)流行情況、臨床癥狀及特征性病變可作出初步診斷，需要注意的是，得和一些其它疾病引起結(jié)節(jié)病灶作出鑒別，如放線菌結(jié)節(jié)、真菌性肉芽腫和寄生蟲結(jié)節(jié)相區(qū)別等。放線菌結(jié)節(jié)中有膿汁，無干酪樣壞死，膿汁內(nèi)常混雜著黃色硫黃樣顆?；蛏傲罘啪€菌塊。真菌性肉芽腫一般不出現(xiàn)干酪樣壞死和鈣化，鏡檢可見菌絲或孢子。寄生蟲結(jié)節(jié)淋巴結(jié)一般無病變，且鈣化的結(jié)節(jié)易從包膜刮下。如要進(jìn)行確診，最好采用實(shí)驗(yàn)室檢測方法進(jìn)行確診。最常用的實(shí)驗(yàn)室診斷方法有顯微鏡檢、細(xì)菌分離培養(yǎng)[6]、動物接種、變態(tài)反應(yīng)、血清學(xué)檢測、分子生物學(xué)檢測等。顯微鏡檢法一般疑似結(jié)核病豬生前采取痰、尿、糞便、精液、乳汁及其它分泌物，死亡后采取有結(jié)核病灶的淋巴結(jié)、脾臟等，選取病健交界部位，觸片，抗酸染色后進(jìn)行鏡檢，具體操作為將病料涂片、干燥、微火固定、滴加石炭酸復(fù)紅液，用酒精燈在玻片下微加溫染色2~5 min，水洗，再以3%鹽酸酒精脫色0.5~1 min，水洗后用堿性美蘭液復(fù)染1~2 min，再水洗，干燥，鏡檢，可見到被染成紅色的結(jié)核桿菌，基本可確診，因雜菌染色為藍(lán)色。細(xì)菌分離培養(yǎng)時(shí)采集病料樣品，按1∶3比例加入滅菌生理鹽水，研磨后，加入4倍量4%氫氧化鈉溶液，充分搖勻后置37℃作用30 min，3 000 r/min離心20 min，沉淀物加1滴酚紅作指示劑，以2 mol/L鹽酸中和至淡紅色后，沉淀物接種于配氏培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)，每周觀察1次，可疑菌落涂片，抗酸染色。動物接種法一般將處理過的病料約1～3 mL，皮下接種豚鼠和家兔，接種后30 d左右，進(jìn)行禽型結(jié)核分枝桿菌PPD（結(jié)核菌素試驗(yàn)）和牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)。如有陽性反應(yīng)，可剖檢其中的半數(shù)動物進(jìn)行病理學(xué)觀察、細(xì)菌培養(yǎng)和涂片鏡檢，另一半繼續(xù)觀察至3個月再剖檢觀察。如果為陰性反應(yīng)，可于40 d左右剖檢其中的半數(shù)，觀察病理學(xué)變化、細(xì)菌培養(yǎng)和涂片鏡檢，另一半繼續(xù)觀察至3個月再剖檢觀察。細(xì)菌分離培養(yǎng)和動物接種法，操作繁瑣、耗時(shí)長，一般不適于臨床疾病的診斷。目前診斷結(jié)核病最常用的方法是變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)，具體操作為用牛分枝桿菌提純菌素0.1 mL，在豬耳根外側(cè)皮內(nèi)注射，另一側(cè)注射禽分枝桿菌提純菌素0.1 mL，48～72 h后觀察判定，發(fā)生明顯紅腫者為陽性。因結(jié)核桿菌感染后抗體產(chǎn)生無規(guī)律性，以抗體為主的血清學(xué)檢測方法難以施展。分子生物學(xué)檢測方法尤其是熒光RT-PCR檢測方法[7-8]，敏感性高，特異性好，檢測速度快，已經(jīng)應(yīng)用于臨床分枝桿菌的檢測，可選取的病料包括病豬糞便、尿液、痰液、血液，含結(jié)核病灶的肝臟、脾臟等。病料要保證新鮮，隨著技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在已開發(fā)出便攜式熒光檢測設(shè)備用于現(xiàn)地檢測，提高了檢測效率。

6 防控措施

加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，飼喂優(yōu)質(zhì)全價(jià)配合飼料，禁止喂霉變飼料。降低豬群飼養(yǎng)密度，加強(qiáng)通風(fēng)和空氣流通，使豬舍內(nèi)保持清新的空氣。豬舍保持適宜的溫濕度，豬群減少應(yīng)激，增強(qiáng)豬非特異性抵抗力。要經(jīng)常清掃豬圈，保持舍內(nèi)清潔干燥，定期清理糞尿，每周至少消毒1次。豬場要遠(yuǎn)離牛場和雞場，不用牛糞或雞糞喂豬，設(shè)防蚊防鳥網(wǎng)。施行自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出的飼養(yǎng)模式，盡量減少引種，引種時(shí)要隔離飼養(yǎng)觀察1個月，并進(jìn)行結(jié)核菌素變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)，結(jié)果為陰性者，方可混入大群飼養(yǎng)。飼養(yǎng)人員嚴(yán)禁串舍，工作服、鞋、帽保持清潔、定期消毒，豬場門口設(shè)消毒池，外來人員和車輛消毒后才能進(jìn)入場區(qū)。結(jié)核病患者，嚴(yán)禁當(dāng)飼養(yǎng)員。豬場一旦發(fā)生豬結(jié)核病，病豬應(yīng)作淘汰處理。禁止用患結(jié)核病畜、家禽內(nèi)臟或未煮熟的下腳料、副產(chǎn)品及來自結(jié)核病人的泔水喂豬，以防豬吃到活的結(jié)核桿菌而感染。結(jié)核病屬于人畜共患的傳染疾病，而結(jié)核病在豬群中的感染率呈現(xiàn)出逐漸遞增的趨勢。人結(jié)核桿菌病可對新生兒接種卡介苗進(jìn)行預(yù)防，結(jié)核桿菌屬帶菌免疫，菌體存在，機(jī)體能產(chǎn)生免疫力。牛和豬理論上可接種卡介苗預(yù)防，但實(shí)際生產(chǎn)中一般不接種疫苗，因?yàn)槟壳俺Ｓ玫臋z測動物是否感染分枝桿菌的結(jié)核菌素檢測法尚無法區(qū)分鑒別疫苗免疫動物和自然感染動物。盡管結(jié)核桿菌對鏈霉素、異煙肼類和對氨基水楊酸等敏感，但對發(fā)病豬和變態(tài)反應(yīng)檢出的陽性豬通常不予治療，而是淘汰、焚燒或深埋處理。豬場工作人員要做藥物自身防控，防止被感染，污染場地和用具用20%漂白粉、5%來蘇兒或20%石灰乳進(jìn)行嚴(yán)格消毒，豬舍應(yīng)嚴(yán)格消毒2～3次，經(jīng)3～6個月空舍方可再度養(yǎng)豬。

7 小結(jié)

豬結(jié)核病是豬的一種慢性傳染病，因臨床癥狀不典型，一直被人們忽視。廣大養(yǎng)殖從業(yè)者一定要對該病有正確的認(rèn)識，在養(yǎng)殖生產(chǎn)中一定要做好自身的防控，避免被感染。對豬場內(nèi)消瘦并長期干咳的豬可懷疑該病，可在豬兩耳根外側(cè)皮內(nèi)分別注射牛分枝桿菌提純菌素0.1 mL和禽分枝桿菌提純菌素0.1 mL，48～72 h后觀察判定，發(fā)生明顯紅腫者為陽性。對病死豬可采集含結(jié)核結(jié)節(jié)病灶的豬扁桃體、頜下淋巴結(jié)、肺臟、肝臟、脾臟等病料送實(shí)驗(yàn)室檢測，采集過程應(yīng)注意無菌操作，樣品應(yīng)封裝在無菌的容器內(nèi)冷藏運(yùn)送。豬結(jié)核病的防控具有重要公共衛(wèi)生學(xué)意義，本文詳細(xì)介紹了該病的一些基本情況，希望對廣大養(yǎng)殖從業(yè)者有所幫助。