劉金生 綜述 査勇 審校

（云南省腫瘤醫(yī)院/昆明醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院 腹部外科，云南 昆明 650118）

世界衛(wèi)生組織在2017年的全球癌癥調(diào)查中指出[1]，在全球范圍內(nèi)肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）的發(fā)病率在所有癌癥中處于第3位，致死率方面則處于所有癌癥中的第2位。最新發(fā)表的《Cancer statistics in China，2015》[2]報(bào)告指出，雖然HCC在發(fā)病率方面呈逐年下降的趨勢，但其致死率卻居高不下。在中國范圍內(nèi)HCC的病死率在所有惡性腫瘤中排名第二，平均每10萬人中有37.54人死于HCC。近年來研究[3]表明，細(xì)胞角蛋白19（K19）陽性表達(dá)的HCC細(xì)胞相較于其他類型的HCC細(xì)胞不論是在侵襲、預(yù)后以及腫瘤細(xì)胞其他生物學(xué)行為上都表現(xiàn)出高度的惡性，成為HCC防治的一大難點(diǎn)。對(duì)K19陽性的HCC進(jìn)行系統(tǒng)的了解有助于今后的臨床工作以及科研研究。

細(xì)胞角蛋白是上皮細(xì)胞中典型的中間纖維蛋白，其成員分為I型與II型。細(xì)胞角蛋白在正常成人組織中，主要表達(dá)于食管、胃、胰腺、小腸與結(jié)腸并存在于毛囊外鞘根部的小部分細(xì)胞中,其主要作用是構(gòu)建細(xì)胞的纖維骨架并進(jìn)一步參與細(xì)胞的分化過程[4-5]。K19屬于I型細(xì)胞角蛋白，是一種大小為40 kDa的蛋白質(zhì)，其編碼基因聚集于染色體17q12-21[6]。不同于其他的細(xì)胞角蛋白，K19是肝臟組織中多能干細(xì)胞的表面標(biāo)記物，并且在肝臟細(xì)胞的分化過程中與分化的惡性程度密切相關(guān)[7]。K19于正常肝臟組織中無表達(dá)，在HCC中K19主要為膽管祖源細(xì)胞及肝臟祖源細(xì)胞的細(xì)胞標(biāo)記物，并且在癌癥的發(fā)生與發(fā)展過程中起到了促進(jìn)的作用[3]。

1 K19調(diào)控HCC的干細(xì)胞行為

在癌癥的發(fā)生與發(fā)展過程中腫瘤干細(xì)胞具有高增殖、不定向分化與高遷移能力等特性[8-9]，而這些腫瘤干細(xì)胞的特性也是導(dǎo)致腫瘤生長的眾多因素之一[10]。相關(guān)研究[11-13]表明，腫瘤干細(xì)胞在腫瘤形成過程中起到啟動(dòng)與促進(jìn)的作用，而在HCC中肝前體細(xì)胞（hepatic progenitor cells，HPC）在腫瘤的形成與發(fā)展的過程中起到類似于癌癥干細(xì)胞的作用。通過免疫組化觀察發(fā)現(xiàn)，在HCC中HPC細(xì)胞具有肝細(xì)胞、膽管細(xì)胞以及祖細(xì)胞的表型，說明其具有祖細(xì)胞起源的特性[14]。而K19作為HPC的一種表型，通過調(diào)控HPC使其具有與癌癥干細(xì)胞類似的生物學(xué)功能。

在HCC中陽性表達(dá)K19的腫瘤細(xì)胞具有類似干細(xì)胞的特性，如促進(jìn)腫瘤生長、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等[15-17]。Yoo等[16]在研究由B型肝炎病毒引起的HCC中發(fā)現(xiàn)，通過免疫組化染色觀察HCC進(jìn)展的不同時(shí)期：低度增生性結(jié)節(jié)期、高度增生性結(jié)節(jié)期、早期HCC以及晚期HCC，隨著HCC的進(jìn)展其K19蛋白表達(dá)量以及mRNA水平呈逐漸增高的趨勢，同時(shí)腫瘤細(xì)胞的多能性也在逐漸增加，而對(duì)比高分化HCC與低分化HCC可以發(fā)現(xiàn)，隨著分化程度的降低K19蛋白的表達(dá)水平呈顯著增高且差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.049），提示K19與腫瘤細(xì)胞的低度分化密切相關(guān)，而進(jìn)一步的PCR與免疫組化結(jié)果顯示α-平滑肌激動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）與K19的表達(dá)水平成正相關(guān)。此外有相關(guān)研究[18-20]表明K19作為腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志物會(huì)在腫瘤細(xì)胞生長、分化的過程中增加其表達(dá)水平，且α-SMA在細(xì)胞內(nèi)的含量也會(huì)隨K19的增加而有所增加。平滑肌激動(dòng)蛋白家族的另一個(gè)成員γ-SMA在HCC中也會(huì)在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的過程中增加其表達(dá)水平，而這一過程也被認(rèn)為與腫瘤細(xì)胞的多能性密不可分且受到K19的影響[21]。以上的研究結(jié)果均提示K19通過提高SMA的表達(dá)水平從而增加腫瘤細(xì)胞的多能性。Kawai等[22]通過對(duì)HCC細(xì)胞株Huh7的培養(yǎng)分析表明K19陽性細(xì)胞可以同時(shí)增殖與分化出K19陽性與K19陰性的細(xì)胞，而K19陰性細(xì)胞只能增殖產(chǎn)生K19陰性的細(xì)胞，證明K19陽性細(xì)胞具有腫瘤干細(xì)胞多向分化的特性；同時(shí)，通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)對(duì)比K19陰性與K19陽性的Huh7細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)，K19陽性細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖行為；對(duì)以上細(xì)胞進(jìn)行PCR分析，結(jié)果表明K19陽性的細(xì)胞表達(dá)TGFbR1、snail1與vimentin水平顯著高于K19陰性細(xì)胞，而snail1與vimentin是EMT的特異性蛋白[23]，提示K19通過上調(diào)snail1與vimentin的表達(dá)使細(xì)胞具有類似腫瘤干細(xì)胞的特性，另一方面，TGFbR1則是TGFb/Smad 通路的受體，而進(jìn)一步的Westernblot實(shí)驗(yàn)顯示磷酸化細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad（pSmad2）在K19陽性細(xì)胞中較K19陰性細(xì)胞顯著增高，而Smad2則被認(rèn)為是TGFb/Smad通路的重要調(diào)節(jié)基因[24]，提示K19通過TGFb/Smad通路使Smad2磷酸化，從而對(duì)其下游目的基因或蛋白進(jìn)行調(diào)節(jié)并作用于DNA使細(xì)胞具有腫瘤干細(xì)胞的特性。此外，由于干細(xì)胞的自我更新與分化等特性，使得腫瘤干細(xì)胞的成球?qū)嶒?yàn)成為腫瘤干細(xì)胞的檢測與篩選方法[25]。在干細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)中，K19陽性細(xì)胞的成球率高于與K19陰性細(xì)胞的成球率,且差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，進(jìn)一步表明K19可以使細(xì)胞的多能性增加。在HCC中腫瘤細(xì)胞的增殖與低度分化都是腫瘤細(xì)胞惡性程度增加的體現(xiàn)，以上研究均表明K19陽性細(xì)胞在HCC的發(fā)生與發(fā)展中具有類似腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)行為，并且可以導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生與惡性程度的增加。

此外，在臨床治療方面腫瘤干細(xì)胞的耐藥性也對(duì)治療產(chǎn)生了巨大的阻礙。在腫瘤干細(xì)胞的耐藥機(jī)制中，ATP結(jié)合盒（ATP-binding cassette，ABC）家族基因產(chǎn)生了重要的影響[26]。Vander等[27]研究表明，在HCC中多耐藥性（multidrug resistance，MDR）的產(chǎn)生源于一些多重耐藥相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在HPC中的表達(dá)，如：多耐藥相關(guān)蛋白1（multidrug resistance-associated protein 1，MRP1）、多耐藥蛋白1（multidrug-resistance protein 1，MDR1）多耐藥相關(guān)蛋白3（multidrug resistance-associated protein 3，MRP3）與乳腺癌抵抗蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP），而這些蛋白均屬于ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族成員。通過對(duì)23例HCC組織與癌旁肝的微陣列基因芯片對(duì)比發(fā)現(xiàn)，在HCC中只有MRP1的mRNA表達(dá)的水平增高（P≤0.005），且MRP1在不良預(yù)后組的mRNA表達(dá)水平顯著上升（P＜0.0001），其他相關(guān)蛋白（MDP1、MRP3、BCRP）則未出現(xiàn)類似關(guān)聯(lián)性，提示MRP1為HCC耐藥性主要相關(guān)蛋白，該分析同時(shí)指出K19mRNA的表達(dá)水平是MRP1 m R N A表達(dá)水平的獨(dú)立影響因素（r=0.4 3 4，P＜0.0001）。此外通過免疫組化分析發(fā)現(xiàn)，MRP1主要表達(dá)于K19陽性的非腫瘤HPC與K19陽性的腫瘤細(xì)胞。有趣的是MRP1已經(jīng)被認(rèn)為是HCC中腫瘤細(xì)胞耐藥性形成的關(guān)鍵蛋白之一，且伴隨著腫瘤干細(xì)胞的形成[27-28]。同時(shí)有學(xué)者[29]注意到MRP1在耐藥性的機(jī)制上與谷胱甘肽（GSH）有著密切的聯(lián)系，提示K19可能通過上調(diào)MRP1的表達(dá)水平從而使MRP1-GSH相關(guān)調(diào)控因子表達(dá)水平的變化來進(jìn)一步提升腫瘤細(xì)胞的耐藥性。

2 K19對(duì)HCC血管生成的促進(jìn)作用

血管生成在HCC的進(jìn)展中對(duì)其起到了促進(jìn)作用。在HCC中不論是腫瘤細(xì)胞的侵襲還是轉(zhuǎn)移都與血管生成密不可分[30]。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）與成纖維細(xì)胞生長因子（fibroblast growth factor，F(xiàn)GF）被認(rèn)為是傳統(tǒng)的促進(jìn)血管生成的兩大重要的細(xì)胞因子尤其是VEGF。近年來有研究[31]發(fā)現(xiàn)K19可以通過抑制/促進(jìn)血管抑制蛋白（vasohibion，VASH）的表達(dá)、增強(qiáng)成纖維細(xì)胞生長因子受體（fibroblast growth factor receptor，F(xiàn)GFR）的活性進(jìn)而上調(diào)VEGF的活性從而達(dá)到其促進(jìn)血管生成的作用。

K19通過抑制/促進(jìn)VASH家族蛋白的表達(dá)以及促進(jìn)FGF的活性從而促進(jìn)血管生成。Takano等[31]通過對(duì)敲除K19的 HepG2細(xì)胞株基因表達(dá)水平的研究向我們展示了在K19敲除后，VASH1與FGFR1的基因表達(dá)水平有所下降而VASH2的基因表達(dá)水平上升，但有趣的是免疫組化分析向我們展示了VASH1不論是在K19陽性或K19陰性的細(xì)胞均有所表達(dá)，提示我們K19可能通過不同的途徑來對(duì)VASH家族尤其是VASH1進(jìn)行調(diào)節(jié)從而對(duì)HCC的血管生成作用產(chǎn)生影響。結(jié)合以上VASH家族與FGF對(duì)血管生成調(diào)控的研究與K19之間的聯(lián)系可以得出，在HCC中K19分別通過下調(diào)VASH2、上調(diào)VASH1與FGFR來誘導(dǎo)VEGF的表達(dá)，從而對(duì)血管生成起到促進(jìn)作用。

VASH是近年來發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)血管生成的家族蛋白，其主要成員有血管抑制蛋白1（vasohibion 1，VASH1）與血管抑制蛋白2（vasohibion 2，VASH2）。Sato[32]通過體外細(xì)胞培養(yǎng)與免疫組化分析表明，在血管生成的過程中VASH1表達(dá)于血管生成的全過程，誘導(dǎo)其表達(dá)的細(xì)胞因子分別為FGF與血管內(nèi)皮生長因子受體2（vasohibion receptor 2，VASHR2）及下游的PKCδ；VASH2主要作用階段為骨髓單核細(xì)胞動(dòng)員到血管生成出芽前。進(jìn)一步的研究[33-34]表明VASH1主要對(duì)血管生成起到抑制的作用而VASH2則對(duì)血管生成起到促進(jìn)作用。

3 K19促進(jìn)HCC的侵襲性

HCC細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移主要由3個(gè)方面所調(diào)控：腫瘤血管的生成、細(xì)胞外基質(zhì)的重塑與黏附分子的改變。在HCC中K19同樣也可以通過這3個(gè)方面來影響癌癥細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。

Takano等[31]使用轉(zhuǎn)染K19siRNA的HepG2細(xì)胞株分析基因的表達(dá)水平得出：K19基因表達(dá)的下降可以減少上皮及間質(zhì)的標(biāo)記物E型鈣黏蛋白（E-cadherin）的基因表達(dá)。無獨(dú)有偶，其他的相關(guān)研究[21,35-36]也指出：在HCC中K19的表達(dá)往往與EpCAM具有正相關(guān)性。而不論是E-cadherin還是EpCAM都是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞EMT的重要體現(xiàn)，EMT可通過PI3K/Akt通路[37-38]、TGF-β通路[23-24]來進(jìn)行調(diào)節(jié)，而以上通路在western blot結(jié)果中均顯示出P53、P65、IKBα與IKKβ的表達(dá)增加，這些共同表達(dá)的蛋白均為經(jīng)典NFκ-B通路重要調(diào)節(jié)蛋白[39]。以上均提示K19可能通過經(jīng)典NF-κB通路調(diào)控其下游基因表達(dá)水平，從而在不同方向上導(dǎo)致HCC中EMT的增加，進(jìn)一步增加其侵襲能力。此外表皮細(xì)胞生長因子（epidermal growth factor，EGF）被認(rèn)為是增加腫瘤細(xì)胞侵襲性與惡性程度的重要細(xì)胞生長因子，Yoneda等[40]通過人HCC細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)EGF可以誘導(dǎo)K19的表達(dá)，在侵襲性實(shí)驗(yàn)中使用EGF處理的PLC-5細(xì)胞系與HepG2細(xì)胞系的侵襲性均增加。以上研究表明K19可以在腫瘤細(xì)胞侵襲性相關(guān)的EGF通路中起到調(diào)節(jié)作用。Western blot的結(jié)果顯示，在EGF誘導(dǎo)K19表達(dá)增加的同時(shí)會(huì)使細(xì)胞中應(yīng)激活化蛋白激酶（stress-activated protein kinase，SAPK）表達(dá)增加提示JNK/SAPK可能參與EGF誘導(dǎo)K19通路。進(jìn)一步在加入EGF的基礎(chǔ)上抑制HCC細(xì)胞的SAPK表達(dá)，結(jié)果顯示K19表達(dá)減少，提示JNK/SAPK可能為EGF誘導(dǎo)K19表達(dá)的下游調(diào)控因子。此外Seo等[41]研究結(jié)果表明JNK/SAPK可以對(duì)wnt/β-action通路進(jìn)行負(fù)性調(diào)節(jié)，其他相關(guān)研究[42]表明在HCC中wnt/β-action通路的開放可以對(duì)HCC的進(jìn)展起到促進(jìn)作用。而K19作為JNK/SAPK的下游的影響因子是否可以通過該通路的調(diào)節(jié)來間接影響wnt/β-action通路的開放，從而增加HCC中腫瘤細(xì)胞的侵襲性則為未來的實(shí)驗(yàn)提供了相關(guān)的思路。

Govaere等[43]通過對(duì)242例HCC肝臟活檢組織的研究發(fā)現(xiàn)K19可以對(duì)HCC的侵襲性產(chǎn)生影響。從功能上來講K19主要作用于細(xì)胞纖維骨架，K19陽性HCC體外細(xì)胞培養(yǎng)表明,其可以連接細(xì)胞內(nèi)部的纖維骨架與細(xì)胞外部的細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix,ECM）從而起到“橋梁”的作用來對(duì)細(xì)胞的遷移產(chǎn)生影響；該團(tuán)隊(duì)通過對(duì)K19進(jìn)行免疫組化分析發(fā)現(xiàn)，K19調(diào)控HCC細(xì)胞的侵襲與血管擴(kuò)張刺激素（vasodilator stimulated phosphoprotein，VASP）的表達(dá)緊密相關(guān)，眾多研究表明[44-45]VSAP通過作用于腫瘤的血管生成來進(jìn)一步增加腫瘤的侵襲效應(yīng)。綜上K19可以通過對(duì)VSAP的上調(diào)與減少E型鈣黏蛋白的表達(dá)來對(duì)腫瘤的侵襲產(chǎn)生誘導(dǎo)性作用。

4 K19抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡

在HCC中由于癌癥細(xì)胞的增生與增殖的水平高于癌癥細(xì)胞的凋亡與衰老致使腫瘤進(jìn)一步朝增大與惡化的方向進(jìn)展，如何促進(jìn)HCC中癌細(xì)胞的凋亡成為治療的一大研究方向。K19作為細(xì)胞的中間纖維絲角蛋白可以對(duì)細(xì)胞起到支持與固定的作用。在細(xì)胞凋亡的過程中眾多研究[46-47]表明細(xì)胞凋亡經(jīng)典家族caspase在細(xì)胞凋亡早期即可作用于K18/19使其磷酸化，并進(jìn)一步促進(jìn)其水解從而達(dá)到降解細(xì)胞骨架誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。此外Takano等[31]通過體外實(shí)驗(yàn)得出：K19的敲除會(huì)導(dǎo)致HCC細(xì)胞的衰老與凋亡，進(jìn)一步通過PCR分析得出敲除K19會(huì)導(dǎo)致P16與P27基因表達(dá)的上調(diào)，而P16被認(rèn)為是誘導(dǎo)細(xì)胞靜止的關(guān)鍵基因[48]，由此可知K19的過量表達(dá)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡受阻。但K19是如何調(diào)控P16來從而影響細(xì)胞凋亡有待進(jìn)一步的研究。

端粒在細(xì)胞的凋亡與復(fù)制的調(diào)控中起到了重要的作用。眾多研究表明腫瘤細(xì)胞端粒序列長于正常的組織細(xì)胞端粒，而端粒長度的延長使得腫瘤細(xì)胞具有“多能性”（類似干細(xì)胞的特性），不論是在侵襲型、增生性還是預(yù)后都體現(xiàn)出增加腫瘤惡性程度的表現(xiàn)[49-50]。Kim等[51]研究表明在HCC中K19陽性的腫瘤細(xì)胞端粒長度較K19陰性腫瘤細(xì)胞端粒更長且K19陽性的HCC細(xì)胞較K19陰性的HCC細(xì)胞表達(dá)更多的端粒相關(guān)蛋白，提示K19可以增加端粒的長度或誘導(dǎo)端粒相關(guān)蛋白的表達(dá)。Morsi等[52]研究也表明在膀胱癌中K19的表達(dá)也與端粒的長度呈正相關(guān)。以上研究結(jié)果均提示K19可以通過對(duì)端粒的長度及相關(guān)蛋白產(chǎn)生影響，從而進(jìn)一步抑制多種腫瘤細(xì)胞的凋亡。

5 K19是HCC預(yù)后差的獨(dú)立預(yù)測因素

由于K19陽性的HCC與其他肝細(xì)胞癌的生物學(xué)行為存在著諸多差異，K19陽性的HCC在臨床治療中也展示出獨(dú)特的預(yù)后。Choi等[53]研究結(jié)果顯示，收集19例干細(xì)胞標(biāo)記物表達(dá)的HCC患者冷凍組織樣本，對(duì)比12例術(shù)后復(fù)發(fā)與7例尚未復(fù)發(fā)患者的K19 mRNA水平的表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，7例復(fù)發(fā)患者的mRNA水平較12例未復(fù)發(fā)患者的mRNA水平呈顯著增高。此外通過將所有81名患者的肝臟功能水平按照Child-Pugh標(biāo)準(zhǔn)分為A、B或C級(jí)，所有A級(jí)患者K19 mRNA水平要顯著低于B及C級(jí)患者K19 mRNA的水平。另一項(xiàng)對(duì)所有HCC患者K19 mRNA血清含量動(dòng)態(tài)變化的研究指出，血清K19 mRNA比例的增加會(huì)顯著降低患者的術(shù)后無疾病生存時(shí)間（1年或者2年無疾病生存比率分別為：K19 mRNA水平增高患者63.3%/54.6%；K19水平正?；颊?9.5%/81.2%）。

Tsuchiya等[54]在對(duì)接受射頻消融治療的246例HCC患者隨訪中也發(fā)現(xiàn)，無疾病生存中位數(shù)時(shí)間在K19陽性患者（194 d）與K19陰性患者（446 d）之間存在顯著性的差異。所有標(biāo)本中有10例標(biāo)本K19表達(dá)量大于5%，且這10例樣本中9例（90%）在早期治療就出現(xiàn)復(fù)發(fā)，更有6例（60%）患者在治療不足1年被檢測出復(fù)發(fā)。在14例HCC原位腫瘤進(jìn)展的患者中5位（35%）表現(xiàn)出K19表達(dá)陽性，而其中3位出現(xiàn)血管侵襲表現(xiàn)。相比K19陰性的HCC患者無論是原位腫瘤進(jìn)展的數(shù)量或是時(shí)間都較K19陽性患者顯著減少，另一方面K19陰性患者也沒有出現(xiàn)血管侵襲的表現(xiàn)，且所有246例標(biāo)本中，分化良好的標(biāo)本均未表達(dá)K19。該研究認(rèn)為K19是顯著的判斷癌癥復(fù)發(fā)與早期癌癥復(fù)發(fā)的指標(biāo)。Fatourou等[55]通過對(duì)既往患者病例的研究得出K19、EPCAM均可以引起癌癥的復(fù)發(fā)，且在生存分析中指出63.2%（43/68）的病例出現(xiàn)復(fù)發(fā)、41.2%（28/68）的病例死于HCC相關(guān)疾病，通過對(duì)比K19陰性患者發(fā)現(xiàn)K19陽性患者無復(fù)發(fā)生存期顯著降低（P＜0.0001）。

盡管K19陽性的HCC患者存在著預(yù)后差、腫瘤惡性程度高的不良表現(xiàn)，但由于目前K19在臨床工作中難以被準(zhǔn)確檢測，使得該類患者無法通過有效手段提早對(duì)K19陽性HCC作出針對(duì)性治療。最近Kawai等[56-57]研究發(fā)現(xiàn)：通過K19碎片CYFRA 21-1或者18氟-氟代脫氧葡萄糖-PET（18F-fluorodeoxyglucose-PET）可以有效的追蹤K19陽性HCC并作出提早診斷，為該類患者提供治療上的優(yōu)勢。

6 結(jié)論與展望

K19陽性的HCC在諸多方面（腫瘤干細(xì)胞、血管生成、侵襲性、腫瘤細(xì)胞凋亡、預(yù)后）均表現(xiàn)出了獨(dú)特的生物學(xué)特性。K19在HCC的發(fā)生與發(fā)展中能過通過多種細(xì)胞因子與通路來對(duì)其產(chǎn)生影響，對(duì)每種影響因素的進(jìn)一步的研究與探索有助于對(duì)HCC的發(fā)生與發(fā)展有更全面的了解與認(rèn)識(shí)，為今后HCC的臨床治療方面提供新的思路與方向。

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