吳義娟 陳現(xiàn)亮 呂 卓 趙慧敏 韓寶娟

(河北醫(yī)科大學(xué)附屬邢臺(tái)人民醫(yī)院消化內(nèi)科，河北 邢臺(tái) 054000)

結(jié)腸息肉是一種結(jié)腸的良性腫瘤，是結(jié)腸癌的癌前病變，息肉的病理類(lèi)型與息肉惡變密切相關(guān)，積極診斷和治療結(jié)腸息肉是控制、減少結(jié)腸癌發(fā)病的重要途徑。但目前結(jié)腸息肉癌變的機(jī)制研究較少，且其具體機(jī)制尚不明確。近年來(lái)許多研究結(jié)果顯示腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因(MTA)1、逆轉(zhuǎn)誘導(dǎo)的富含半胱氨酸，含有kazal域的蛋白(RECK)與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)〔1～5〕。本研究采用免疫組織化學(xué)法(SABC)檢測(cè)不同病理類(lèi)型結(jié)腸息肉及結(jié)腸癌中MTA1、RECK的表達(dá)，探討其在結(jié)腸息肉癌變過(guò)程中的作用。

1 材料與方法

1.1臨床資料 2010～2015年邢臺(tái)市人民醫(yī)院腫瘤外科手術(shù)切除結(jié)腸癌標(biāo)本104例，男79例，女25例，年齡31～83歲，平均61.24歲；腸鏡活檢結(jié)腸息肉標(biāo)本114例(絨毛狀腺瘤44例，管狀腺瘤70例)，男82例，女32例，年齡28～74歲，平均56.66歲；正常結(jié)腸黏膜組織30例，男18例，女12例，年齡20～70歲，平均58.42歲。

1.2方法 免疫組化染色按SABC試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。鼠抗人MTA1單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，羊抗鼠辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記二抗；兔抗人RECK單克隆抗體購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，工作濃度為即用型；防脫片劑3-氨丙基三乙氧硅烷(APES)及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑均購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司；以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知的陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3結(jié)果判斷 MTA1蛋白陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞核，表現(xiàn)為棕黃色顆粒；RECK蛋白在胞質(zhì)或胞核呈棕黃色著色為陽(yáng)性表達(dá)。病理染色標(biāo)本均由2名病理醫(yī)師判斷，判斷標(biāo)準(zhǔn)：染色強(qiáng)度按棕色的深淺可分為0分、1分、2分及3分，陽(yáng)性細(xì)胞比例0%為0分、1%～30%為1分、31%～60%為2分、>60%為3分；最后將著色強(qiáng)度及著色范圍相加，0～2分為陰性，3～6分為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1MTA1、RECK在不同結(jié)腸黏膜組織中的表達(dá) MTA1在正常結(jié)腸黏膜、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、結(jié)腸癌組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為84.61%(88/104)、63.64%(28/44)、42.86%(30/70)、6.67%(2/30)；結(jié)腸癌與絨毛狀腺瘤間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，絨毛狀腺瘤與管狀腺瘤間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，管狀腺瘤與正常結(jié)腸組織間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，即由正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤至結(jié)腸癌中MTA1陽(yáng)性表達(dá)率呈逐漸上升趨勢(shì)。RECK在正常結(jié)腸黏膜、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、結(jié)腸癌組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為100.00%(30/30)、78.57%(55/70)、77.27%(34/44)、53.85%(56/104)；結(jié)腸癌與絨毛狀腺瘤間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，絨毛狀腺瘤與管狀腺瘤間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，管狀腺瘤與正常結(jié)腸組織間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，即由正常結(jié)腸組織、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤至結(jié)腸癌中RECK陽(yáng)性表達(dá)率呈逐漸下降趨勢(shì)。

2.2MTA1、RECK在結(jié)腸息肉癌變過(guò)程中的表達(dá) 在結(jié)腸息肉中MTA1的陽(yáng)性表達(dá)率分別為39.02%(32/82，輕度)、81.25(26/32，中重度)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RECK在結(jié)腸息肉(輕度異型增生)、結(jié)腸息肉(中重度異型增生)的表達(dá)率分別為90.24%(74/82)、46.88%(15/32)，中重度異型增生結(jié)腸息肉中RECK陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于輕度異型增生結(jié)腸息肉，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

MTA1是1993年P(guān)encil等〔6〕應(yīng)用差異雜交技術(shù)從具有轉(zhuǎn)移潛能的鼠乳腺癌細(xì)胞株13762NF中篩選克隆出來(lái)的基因，通過(guò)影響染色質(zhì)的狀態(tài)來(lái)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄，調(diào)控組蛋白脫乙酰基從而發(fā)揮其生物學(xué)作用。MTA1是MTA家族的一員，其與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)〔7～9〕。MTA1是一種關(guān)鍵的癌蛋白，有研究顯示MTA1在人類(lèi)腫瘤中表達(dá)上調(diào)，其高表達(dá)與腫瘤的高侵襲特征如高病理分級(jí)、血管形成和預(yù)后不良等相關(guān)。MTA1 可能通過(guò)以下機(jī)制在腫瘤發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮作用：①M(fèi)TA1 基因與組蛋白去乙?；附Y(jié)合重塑染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄相關(guān)蛋白的下調(diào)〔10〕；②MTA1 基因能夠改變細(xì)胞角蛋白纖維系統(tǒng)，使細(xì)胞獲得更強(qiáng)的侵襲及轉(zhuǎn)移特征〔11〕。本研究結(jié)果提示MTA1的高表達(dá)是結(jié)腸腺癌發(fā)展過(guò)程中的早期事件。

RECK基因是1998年Takahashi等〔12〕在v-Kiras轉(zhuǎn)染的NIH3T3細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種新的腫瘤抑制基因，具有抑制基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)與活性的功能。研究表明，RECK基因的表達(dá)受多種癌基因的調(diào)控〔13〕。在9號(hào)染色體短臂上，特別是RECK基因定位的9p13-p12區(qū)域上的基因，與許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。近年來(lái)研究顯示RECK基因參與了許多腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，包括肺癌、肝癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌、乳腺癌及膀胱異型細(xì)胞癌等〔14～19〕。且該基因與惡性腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。本研究結(jié)果提示MTA1、RECK參與正常組織、癌前病變、癌組織的發(fā)生、發(fā)展，在結(jié)腸息肉的癌變過(guò)程中起重要作用。