食源性沙門(mén)氏菌血清型鑒定及耐藥性研究

王 靜，錢(qián) 晶，龐芳芹，王國(guó)紅，康立超

（新疆農(nóng)墾科學(xué)院農(nóng)業(yè)部食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心，新疆 石河子 832000）

0 引言

沙門(mén)氏菌是一種全球性重要的人畜共患病原菌，又是最常見(jiàn)的引起細(xì)菌性食源性疾病的病原菌。發(fā)展中國(guó)家每年大約有2 000萬(wàn)人感染沙門(mén)氏菌，導(dǎo)致大約20萬(wàn)人死亡，其中55%由食源性沙門(mén)氏菌感染；歐美發(fā)達(dá)國(guó)家也受沙門(mén)氏菌的威脅[1-2]。食源性沙門(mén)氏菌在畜禽健康、人類公共安全及食品安全研究等方面都具有重要意義。沙門(mén)氏菌大部分感染是由于飲用被污染的水或食用被污染的食物，如新鮮和加工肉類、家禽、雞蛋、乳制品和新鮮農(nóng)產(chǎn)品等，從而引起食物中毒，甚至死亡[3]。中國(guó)每年約3億人因沙門(mén)氏菌感染而患病，占病原菌食源性疾病總數(shù)的70%—80%[4]。食源性疾病對(duì)人類健康危害很大，是重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題。中國(guó)細(xì)菌性食物中毒中，70%—80%是由沙門(mén)氏菌引起，而在引起沙門(mén)氏菌中毒的食品中，90%以上是肉類等動(dòng)物性產(chǎn)品，其中雞是沙門(mén)氏菌最大的儲(chǔ)存儲(chǔ)主[4，13]。生禽肉中沙門(mén)氏菌檢出率各地也不一樣，2011年，薛成玉等對(duì)黑龍江省480份肉類樣品中沙門(mén)氏菌的污染情況進(jìn)行了調(diào)查，生禽肉沙門(mén)氏菌的檢出率為19.00%[14]。諸葛石養(yǎng)2013年分析了廣西共檢測(cè)生雞肉樣品158份，陽(yáng)性36份，檢出率 22.78%，血清型以德?tīng)柋吧抽T(mén)氏菌為主[15]，與楊修軍報(bào)道吉林省食源性沙門(mén)氏菌檢出率28.33%相近[16]。2010—2012年，尹明遠(yuǎn)調(diào)查了烏魯木齊市生雞肉的沙門(mén)氏菌的感染率，達(dá)到9.14%，以腸炎沙門(mén)氏菌為主[11]。

在人類臨床治療、農(nóng)業(yè)及畜牧業(yè)生產(chǎn)中，抗生素仍然是對(duì)付各種病原菌的首選藥物?？股貜V泛使用及濫用產(chǎn)生的選擇性壓力使得很多病原菌，包括沙門(mén)氏菌出現(xiàn)了多重耐藥（Multi—dru gResistance，MDR）現(xiàn)象。監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)表明，整個(gè)沙門(mén)氏菌屬的多重耐藥率已從20世紀(jì)90年代的20%增加到了21世紀(jì)初的70%[5]。病原菌耐藥性的不斷增強(qiáng)將使現(xiàn)有抗生素失去相應(yīng)的治療功效。由于耐藥性可通過(guò)食物鏈或環(huán)境在人與食品、人與人或人畜之間傳遞，正在快速增加的沙門(mén)氏菌耐藥性不但給食品性動(dòng)物生產(chǎn)和公共衛(wèi)生安全造成極大的危害，同時(shí)對(duì)全球食品安全和人類健康也是一個(gè)巨大的威脅[6-7]。J.Breuil等對(duì)25 526株沙門(mén)氏菌進(jìn)行耐藥性監(jiān)測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，從1994年到1997年，沙門(mén)氏菌對(duì)6種常用抗生素的耐藥率均超過(guò)了70%，對(duì)萘啶酸的耐藥率上升了69%。S.C等人對(duì)1 710株人源、動(dòng)物源、食源性沙門(mén)氏菌進(jìn)行耐藥性監(jiān)測(cè)，除頭孢噻呋外，所有菌株對(duì)12種常用抗菌藥物均有明顯的耐藥性，其中動(dòng)物源性沙門(mén)氏菌的耐藥率為98%，人源性沙門(mén)氏菌的耐藥率為95%，食源性沙門(mén)氏菌的耐藥率92%[3，17]。張秀麗等[18]對(duì)河南省食源性和禽源性沙門(mén)氏菌的耐藥性研究發(fā)現(xiàn)，沙門(mén)氏菌整體耐藥率達(dá)到100%。新疆食源性沙門(mén)氏菌的報(bào)道主要是在烏魯木齊市的調(diào)查，主要是肉與肉制品。而新疆餐飲食品中沙門(mén)氏菌的污染很低[8]，關(guān)于沙門(mén)氏菌的耐藥性方面報(bào)道則更少[9-12]。

本實(shí)驗(yàn)以9類11種食品樣品共計(jì)360份樣品為研究對(duì)象，按照GB4789.4—2010進(jìn)行沙門(mén)氏菌分離鑒定及血清分型，用VITEK—2及AST—GN13藥敏卡進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，以了解新疆食源性沙門(mén)氏菌的菌型分布與耐藥情況，有助于食品衛(wèi)生的監(jiān)督檢查和管理。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品

試驗(yàn)材料來(lái)自2016年新疆及兵團(tuán)的6個(gè)市或師的送檢樣品，包括肉與肉制品100份（生禽肉50份和熟肉制品50份）、水產(chǎn)及其制品30份（動(dòng)物性淡水產(chǎn)品20份和動(dòng)物性海水產(chǎn)品10份）、豆制品40份 （即食發(fā)酵豆制品30份和即食非發(fā)酵豆制品10份）、冷凍飲品20份、速凍米面制品20份（速凍面米熟制品）、地方食品 60份（涼皮、涼面、拌面、抓飯等）、餐飲食品60份（街頭流動(dòng)快餐10份和學(xué)生餐50份）、兒童食品20份（學(xué)校周邊即食兒童食品）和堅(jiān)果及籽類10份（熟制堅(jiān)果與籽實(shí)食品），9類11種食品樣品共計(jì)360份。

1.1.2 主要試劑和儀器

緩沖蛋白胨水 （BPW）、四硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液、亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液、亞硫酸鉍（BS）瓊脂、HE瓊脂、木糖賴氨酸脫氧膽鹽（XLD）瓊脂和營(yíng)養(yǎng)瓊脂等，購(gòu)自北京陸橋技術(shù)股份有限公司，科瑪嘉沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基購(gòu)自鄭州博賽生物技術(shù)股份有限公司，GN卡和AST—GN13卡來(lái)自法國(guó)梅里埃公司，沙門(mén)氏菌診斷血清購(gòu)自寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司。標(biāo)準(zhǔn)鼠傷寒沙門(mén)氏菌（ATCC14028）購(gòu)自中監(jiān)所。

1.2 方法

1.2.1 分離鑒定

按照GB 4789.4—2010標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，生化鑒定按照VITEK—2無(wú)菌操作說(shuō)明進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，選用GN鑒定卡。血清學(xué)鑒定按照血清試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 藥敏實(shí)驗(yàn)

將菌液稀釋到0.50—0.63麥?zhǔn)蠞岫?，吸?45 μL加入到 3 mL 0.45%鹽水中混勻，選用AST—GN13卡，按照VITEK—2說(shuō)明書(shū)上機(jī)實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 分離鑒定

360份樣品中分離到7株沙門(mén)氏菌 （編號(hào)為1—7，0為標(biāo)準(zhǔn)菌株），其中生禽肉中分離到6株，3株腸炎沙門(mén)氏菌，2株鼠傷寒沙門(mén)氏菌，1株山夫登堡沙門(mén)氏菌。熟制堅(jiān)果與籽實(shí)食品中分離到1株腸炎沙門(mén)氏菌（表1）。

表1 沙門(mén)氏菌血清型分布Table 1 Serotype distribution of Salmonella

2.2 藥敏實(shí)驗(yàn)

7株食源性沙門(mén)氏菌對(duì)頭孢唑林、頭孢替坦、阿米卡星、慶大霉素和妥布霉素5種抗生素的耐藥率為100%，對(duì)呋喃妥因耐藥率為57.14%，對(duì)氨芐西林和氨芐青霉素/舒巴坦耐藥率為28.57%（表2），標(biāo)準(zhǔn)沙門(mén)氏菌株也對(duì)頭孢唑林、頭孢替坦、阿米卡星、慶大霉素和妥布霉素5種抗生素有耐藥性。1號(hào)和5號(hào)菌藥敏結(jié)果完全一樣且是同一血清型 （腸炎沙門(mén)氏菌），6號(hào)菌與0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)菌株藥敏結(jié)果完全一樣，均是鼠傷寒沙門(mén)氏菌，2號(hào)菌和4號(hào)藥敏結(jié)果完全一樣，3號(hào)和7號(hào)藥敏結(jié)果完全一樣，但都不是同一種血清型。血清型與藥敏結(jié)果沒(méi)有相關(guān)性。

3 結(jié)論與討論

本次共檢測(cè)9類11種食品樣品共計(jì)360份樣品，在50份生禽肉中分離到6株沙門(mén)氏菌，占生禽肉樣品數(shù)的12%，血清型以腸炎沙門(mén)氏菌為主。堅(jiān)果及籽類也檢出一株腸炎沙門(mén)氏菌，新疆地區(qū)生禽肉沙門(mén)氏菌血清型以腸炎沙門(mén)氏菌為主。

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)沙門(mén)氏菌的防治通常選用傳統(tǒng)的抗生素類藥物，有研究表明，在動(dòng)物中使用抗生素造成非傷寒沙門(mén)氏菌產(chǎn)生耐藥性，這種耐藥菌可通過(guò)食品或直接接觸感染人。由耐藥菌引起的沙門(mén)氏菌爆發(fā)流行，在世界各國(guó)都有發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，沙門(mén)氏菌對(duì)阿米卡星、慶大霉素、妥布霉素等氨基糖苷類的藥物和頭孢唑林、頭孢替坦等頭孢類藥物100%耐藥。食源性沙門(mén)氏菌對(duì)常用抗菌藥物的耐藥性日趨嚴(yán)重，且耐藥譜越來(lái)越廣，不但給食品安全造成極大危害，也對(duì)人類健康產(chǎn)生巨大威脅。

本文只針對(duì)新疆兵團(tuán)9類11種食品進(jìn)行了沙門(mén)氏菌分離鑒定和耐藥性研究，期望實(shí)驗(yàn)結(jié)果能為建立公共衛(wèi)生預(yù)警數(shù)據(jù)庫(kù)和開(kāi)展食品安全危險(xiǎn)性評(píng)估提供科學(xué)依據(jù)。

表2 沙門(mén)氏菌藥敏試驗(yàn)Table 2 Antimicrobial susceptibility test of Salmonella

[1]Majowicz S E，Musto J，Scallan E，et al.The global burden of nontyphoidal Salmonella gastroenteritis.Clin Infect Dis，2010，50（6）：882-889.

[2]Voetsch A C，Van Gilder T J，Angulo F J，et al.FoodNet estimate of the burden of illness caused by nontyphoidal Salmonella in fections in the UnitedStates.Clin Infect Dis 2004，38 （Suppl 3）：127-134.

[3]楊懷珍，牟亞，羅薇.食源性沙門(mén)氏菌的研究進(jìn)展.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2016（4）：69-71，75.Yang H Z，Mu Y，Luo W.Research progress of foodborne Salmonella.Heilongjiang Animal Science And Veterinary Medicine，2016（4）：69-71，75.（in Chinese）

[4]World Health Organization.Overcoming antimicrobial resistance，World Health Organization Report on Infectious Diseases.Publication Code：WHO/CDS/2000.

[5]Su L H，Chiu C H，Chu C，et al.Antimicrobial resistance in non typhoidal Salmonella serotypes：A global challenge.Clinical Infectious Disease，2004，39：546-551.

[6]Kariuki S，Revathi G，Kariuki N.In creasing prevalence of muhidrug resistant non-typhoidal salmonella，Keny a，1994—2003.International Journal of Antimicrobial Agents，2005，25：38-43.

[7]郭云昌，劉秀梅.市售雞肉中沙門(mén)氏菌分離株多重耐藥譜測(cè)定.中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2005，17：100-103.Guo Y C，Liu X M.Determination of multiple drug resistance profiles of Salmonella isolates from commercially available chicken.Chinese JournalofFood Hygiene，2005，17：100-103.（in Chinese）

[8]康立超，王東健，劉長(zhǎng)勇，等.新疆餐飲食品中食源性致病菌污染情況分析.預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志，2016，32（7）：700-703.Kang L C，Wang D J，Liu C Y，et al.Analysis of foodborne pathogenic contamination in Catering Food in Xinjiang.Journal of Preventive Medicine Information，2016，32（7）：700-703.（in Chinese）

[9]蔡擴(kuò)軍，齊新林，歐秀玲.烏魯木齊市屠宰場(chǎng)三種食源性細(xì)菌的污染情況調(diào)查.甘肅畜牧獸醫(yī)，2016，21（46）：91-92.Cai K J，Qi X L，Ou X L.Urumqi City slaughterhouse three food borne bacterial contamination survey.Gansu Animal Husbandry and Veterinary，2016，21（46）：91-92.（in Chinese）

[10]葛琨，武運(yùn)，楊保偉.烏魯木齊牛羊肉源沙門(mén)氏菌對(duì)喹諾酮類藥物的耐藥狀況及相關(guān)基因.食品科學(xué)，2017（4）：11-12.Ge K，Wu Y，Yang B W.The status of quinolone resistant Salmonella in Urumqi beef and mutton and related genes.Food Science，2017（4）：11-12.（in Chinese）

[11]張濤，尹明遠(yuǎn)，王威.烏魯木齊市零售牛羊肉中沙門(mén)氏菌的調(diào)查.食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2015，6（9）：3 480-3 484.Zhang T，Yin M Y，Wang W.Investigation of Salmonella in retail lamb and beef meats in Urumqi.Journal of Food Safety and Quality，2015，6（9）：3 480-3 484.（in Chinese）

[12]尹明遠(yuǎn)，張曉燕，艾乃吐拉，等.2010—2012年新疆烏魯木齊地區(qū)零售生肉中沙門(mén)菌污染情況調(diào)查.中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2014，26（2）：172-175.Yin M Y，Zhang X Y，Ainatula，et al.Investigation of Salmonella contamination in retail meats in Urumqi，Xin jiang in 2010—2012.Chinese Journal of Food Hygiene，2014，26（2）：172-175.（in Chinese）

[13]曾曉芳.畜產(chǎn)品中沙門(mén)氏菌污染的檢測(cè)與控制.四川畜牧獸醫(yī)，2003，30（4）：28-29.Ceng X F.Detection and control of Salmonella contamination in livestock products.Sichuan Animal Husbandry and Veterinary Medicine，2003，30（4）：28-29.（in Chinese）

[14]薛成玉，遇曉杰，謝平會(huì)，等.食品中沙門(mén)氏菌污染狀況分析及VITEK微生物鑒定系統(tǒng)的應(yīng)用.中國(guó)初級(jí)衛(wèi)生保健，2011，25（5）：75-76.Xue C Y，Yu X J，Xie H P，et al.Analysis of Salmonella contamination in food and the application of VITEK microbial identification system.China Primary Health Care，2011，25（5）：75-76.（in Chinese）

[15]諸葛石養(yǎng)，韋程媛，李秀桂.廣西食源性與禽源性沙門(mén)氏菌血清型分布及耐藥性研究.中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2013，9（13）：1061-1063.ZhuGe，S Y，Wei C Y，Li X G.Serotype distribution and drug resistance offood—borne and poultry—borne salmonella in Guangxi.Chinese Tropical Medicine，2013，9（13）：1061-1063.（in Chinese）

[16]楊修軍，劉桂華，黃鑫，等.吉林省沙門(mén)菌污染監(jiān)測(cè)分析.中國(guó)衛(wèi)生工程學(xué)，2011，10（1）：58-59.Yang X J，Liu G H，Huang X，et al.Contamination Status of Food-born Surveillance in Jilin province.China Journal of Public Health Engineering.2011，10 （1）：58-59.（in Chinese）

[17]Breuil J，Brisabis A，Casin I，et al.Antibiotic resistance in Salmonellae isolated from humans and animals in France：comparative data from 1994 and 1997.JAntmicrob Chemother，2000，46 （6）：965-971.

[18]張秀麗，楊保偉，廖興廣，等.河南省鶴壁市食源性和禽源性沙門(mén)氏菌耐藥性研究.中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào)，2010，26 （12）：1 134-1 136.Zhang X L，Yang B W，Liao X G，et al.Study on drug re sistance and Avian Salmonella strains in Henan，Hebicity.Chinese Journal of Zoonosis，2010，26 （12）：1134-1136.（in Chinese）