麥艷芬，錢懷萍，胡淑娟，陳仰新

佛山市第五人民醫(yī)院1婦產(chǎn)科， 2病理科 廣東 佛山 528211

子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）是指有活性的子宮內(nèi)膜細(xì)胞種植在子宮內(nèi)膜以外的位置而形成[1-2]。子宮內(nèi)膜異位種植后發(fā)生異位增殖生長被認(rèn)為是子宮內(nèi)膜異位癥的主要發(fā)生機(jī)制[3]。子宮內(nèi)膜異位生長雖然被視作一種良性增殖，但與惡性腫瘤一樣極具有超強(qiáng)的侵襲浸潤能力，子宮內(nèi)膜的異位組織可侵襲至腹膜、卵巢和直腸陰道隔等部位[4]，子宮內(nèi)膜異位增殖的分子生物學(xué)基礎(chǔ)很可能與眾多的惡性腫瘤侵襲浸潤相同。子宮內(nèi)膜的異位生長病變伴隨著體內(nèi)多種調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)水平的變化，探討子宮內(nèi)膜組織發(fā)生異位生長和浸潤侵襲的內(nèi)在分子機(jī)制對臨床的治療和預(yù)后都有非常重要的意義。有研究認(rèn)為MALAT1是與EMs發(fā)生、發(fā)展可能相關(guān)的一種基因[5]，另有研究發(fā)現(xiàn)EMs患者的同源框A10基因表達(dá)量低于正常，這可能與子宮內(nèi)膜容受性減低及子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展具有關(guān)系[6]。除此之外，Importin蛋白[7]、MDM2蛋白[8]以及NGF因子[9]等均被認(rèn)為與EMs的發(fā)生發(fā)展有一定相關(guān)性。在EMs的發(fā)生發(fā)展的過程中，必然有多種基因共同調(diào)控，在與眾多腫瘤促進(jìn)基因相比，最近發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞粘附分子1（CADM1）基因是一種腫瘤抑制基因[10-11]。在多種腫瘤組織與癌旁組織CADM1表達(dá)水平對比實(shí)驗(yàn)中，均有CADM1表達(dá)下調(diào)的結(jié)論得出，CADM1的失活或者表達(dá)下調(diào)可能是腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲、浸潤行為的影響因素之一[12-13]。本研究旨在探討CADM1與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生及發(fā)展的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2014年6～12月在我院治療的子宮內(nèi)膜異位患者45例，其中卵巢型21例，腹膜型24例，患者年齡27～41歲（36.5±3.2歲）。選取同期在我院進(jìn)行治療的未發(fā)生子宮內(nèi)膜異位的其他患者30例作為對照組，患者年齡31～43歲（37.4±2.9歲），兩組年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 入選及排除標(biāo)準(zhǔn)

入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）患者月經(jīng)周期表現(xiàn)正常；（2）年齡＜50歲；（3）符合卵巢型及腹膜型子宮內(nèi)膜異位癥診斷標(biāo)準(zhǔn)；（4）對照組患者自愿參與病理檢測。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）多囊卵巢綜合征患者；（2）甲狀腺疾病和糖尿病患者；（3）腫瘤患者。本研究經(jīng)過我院倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.3 研究方法

收集45例子宮內(nèi)膜異位癥患者的異位組織和在位組織以及30例子宮內(nèi)膜正?；颊叩淖訉m內(nèi)膜組織進(jìn)行病理切片機(jī)檢查；利用SABC法進(jìn)行免疫組化染色，進(jìn)行染色效果評價和CADM1陽性率結(jié)果分析，CADM1和Abcam多克隆抗體均購自美國Santa Cruz，SABC三步法試劑盒和二氨基聯(lián)苯胺（DAB）購自武漢博士德生物工程有限公司；利用Western blotting印跡法考察不同組織中CADM1蛋白的相對表達(dá)量。

1.4 染色方法及效果評價

本研究采用鏈霉親和素-生物素復(fù)合物（SABC）法進(jìn)行免疫組化分析。對不同來源子宮內(nèi)膜組織進(jìn)行免疫組化染色后，需對染色強(qiáng)度和陽性率進(jìn)行分析，用以評價CADM1的表達(dá)水平。對組織切片進(jìn)行染色后，置于顯微鏡（Olympus）下觀察并進(jìn)行拍照，本研究采用的圖像分析系統(tǒng)為HMIAS-2000型全自動彩色圖像分析系統(tǒng)。CADM1蛋白表達(dá)于細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜中，因此染色結(jié)果中細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒則作為陽性結(jié)果，對染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)定為無色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。采用染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比乘積計(jì)量陽性情況，乘積≥2分為免疫組織化學(xué)陽性，＜2分為陰性。陽性細(xì)胞百分比：高倍鏡下（×400）按照隨機(jī)選取每張3切片5個視野觀察細(xì)胞，每個視野500個細(xì)胞，根據(jù)計(jì)算陽性細(xì)胞所占百分比：陰性為0分，陽性細(xì)胞＜10%為1分，陽性細(xì)胞10%～50%為2分，陽性細(xì)胞＞50%為3分。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS21.0 軟件，進(jìn)行t檢驗(yàn)和Pearson相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3種內(nèi)膜組織的免疫組化染色結(jié)果

CADM1的陽性染色結(jié)果主要表現(xiàn)為在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜內(nèi)出現(xiàn)成功染色的顆粒（圖1），CADM1在異位內(nèi)膜組織中的染色強(qiáng)度明顯低于在位內(nèi)膜組織染色強(qiáng)度，在位內(nèi)膜組織的染色強(qiáng)度又明顯低于正常內(nèi)膜組織的染色強(qiáng)度。

2.2 3種內(nèi)膜組織染色陽性率結(jié)果

采用染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比乘積計(jì)量陽性情況：乘積≥2分為免疫組織化學(xué)陽性，＜2分為陰性，結(jié)果如表1。

2.3 Western blotting法檢測CADM1的表達(dá)

異位組織中CADM1表達(dá)水平灰度值為19.331±2.239，在位組織中CADM表達(dá)水平灰度值為46.789±3.941，正常組織中CADM1表達(dá)水平灰度值為63.487±2.651，異位組織中CADM1的表達(dá)水平低于在位組織和正常組織（P＜0.05），在位組織中CADM1的表達(dá)水平低于正常組織（P＜0.05）。

表1 CADM1在不同內(nèi)膜組織中染色陽性率結(jié)果統(tǒng)計(jì)

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥是一種與雌性激素有關(guān)的疾病，主要表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜良性增殖組織的異位生長[14]。做為一種育齡婦女常見婦科疾病，子宮內(nèi)膜異位發(fā)生部位主要包括腹膜、卵巢和直腸陰道隔等。痛經(jīng)、慢性盆腔炎、不育或者性交困難是子宮內(nèi)膜異位癥的主要癥狀，這些癥狀的發(fā)生大大的降低了患病婦女的生活質(zhì)量[15]。子宮內(nèi)膜異位組織與子宮內(nèi)膜正常組織在組織形態(tài)結(jié)構(gòu)特征是具有很大的相似性，但仍在以下幾個方面具有一定差異：相關(guān)基因和蛋白質(zhì)表達(dá)、類固醇和細(xì)胞因子的合成和響應(yīng)、免疫組件、粘附分子和蛋白水解酶等[16]。

多項(xiàng)研究證明CADM1在癌變組織或者其他疾病組織中因?yàn)閱幼拥母叨燃谆鴮?dǎo)致其表達(dá)減少或者或者缺失，從而進(jìn)一步影響了癌變組織細(xì)胞的侵襲和浸潤特性和能力，CADM1在肝細(xì)胞肝癌組織中的陽性表達(dá)率明顯低于癌旁組織（41.7%vs58.33%）[17]，研究認(rèn)為CADM1與肝細(xì)胞肝癌患者年齡、組織分型無關(guān)而與臨床分期有關(guān)。CADM1在結(jié)直腸癌組織中具有維持癌變組織粘附作用且能夠組織腸上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)變的功能，研究表明結(jié)直腸癌組織的CADM1蛋白陽性表達(dá)率僅有25.7%，同時正常結(jié)直腸組織的陽性表達(dá)率高達(dá)80%，CADM1表達(dá)下調(diào)可能是結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的原因之一[18]。本研究顯示子宮內(nèi)膜異位組織中CADM1陽性表達(dá)率僅為37.78%，與正常組織93.33%相比，顯著降低。CADM1作為一種細(xì)胞粘附因子，表達(dá)下調(diào)使得細(xì)胞的轉(zhuǎn)移或者異位生長變得更為容易。在其他如口腔鱗狀細(xì)胞癌組織[19]、卵巢癌組織[20]、食管鱗癌組織[21]以及骨肉瘤組織[22]中的均有CADM1表達(dá)下調(diào)的相關(guān)研究。

為了進(jìn)一步深入研究異位組織與在位組織的差異性，以及與正常子宮內(nèi)膜組織的差異性，本研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞中的CADM1的表達(dá)量明顯低于正常內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞，這體現(xiàn)了CADM1與異位內(nèi)膜中的表達(dá)下調(diào)或者失活與異位組織發(fā)生種植后的生長發(fā)展的相關(guān)性。進(jìn)一步研究，在位內(nèi)膜與正常內(nèi)膜組織之間CADM1之間存在的顯著差異，表明發(fā)生子宮內(nèi)膜異位癥的在位內(nèi)膜組織仍具有較強(qiáng)的侵襲和浸潤能力。

本研究通過免疫組化法分析了子宮內(nèi)膜異位癥患者的異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜組織中CADM1表達(dá)水平的變化，結(jié)果表明，CADM1在異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜中的表達(dá)下調(diào)與子宮內(nèi)膜異位組織發(fā)生侵襲和浸潤具有密切相關(guān)性，臨床上對其表達(dá)水平進(jìn)行分析有助于判斷子宮內(nèi)膜異位癥的侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后評估。

[1]Sikora J, Mielczarek-Palacz A, Kondera-Anasz Z. Association of the precursor of interleukin-1 and peritoneal InflammationRole in pathogenesis of endometriosis[J]. J Clin Lab Anal, 2016, 30(6):831-7.

[2]林 杰, 賴志文, 林 潔, 等. EGR-1及MMP-9在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及意義[J]. 海南醫(yī)學(xué), 2017, 28(7): 1101-3.

[3]程 虹, 黃守國, 王海燕. 臨床癥狀和婦科檢查對深部浸潤型子宮內(nèi)膜異位癥的評估價值研究[J]. 重慶醫(yī)學(xué), 2016, (3): 414-7.

[4]汪胡風(fēng), 趙 蕾. 子宮內(nèi)膜異位癥診治的研究進(jìn)展[J]. 浙江臨床醫(yī)學(xué), 2016, 18(11): 2156-8.

[5]曹穎麗, 石 婷, 胡 蓉, 等. MALAT1在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及研究[J]. 臨床檢驗(yàn)雜志, 2017, 24(11): 849-52.

[6]溫夢喬, 張 偉, 徐 琳. HOXA10在子宮內(nèi)膜異位癥患者在位子宮內(nèi)膜中表達(dá)的Meta分析[J]. 中國婦幼保健, 2017, 32(21):5486-9.

[7]龍行濤, 王 冬, 田桂蘭, 等. Importin13在子宮內(nèi)膜異位癥和子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義[J]. 中國癌癥雜志, 2012, 22(1): 10-4.

[8]桑 琳, 趙衛(wèi)東, 杜世華. p53p21MDM2蛋白在卵巢子宮內(nèi)膜異位癥和子宮腺肌癥中的表達(dá)及意義[J]. 安徽醫(yī)學(xué), 2012,33(10): 1346-50.

[9]李曉燕, 冷金花, 郎景和. NGF及其受體trkA及p75NTR在子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜中的表達(dá)及其與內(nèi)異癥疼痛的關(guān)系[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展, 2012, 21(6): 435-9.

[10]費(fèi)懷君, 胡 容. 細(xì)胞間粘附分子-1在腫瘤研究中的進(jìn)展[J]. 藥物生物技術(shù), 2017, 20(3): 259-62.

[11]Sabari V, Sage EK, Kolluri KK, et al. CADM1 inhibits squamous cell carcinoma progression by reducing STAT3 activity[J]. Sci Rep, 2016, 15(6): 24006-9.

[12]Iwasaki T, Matsushita M, Nonaka D, et al. Lower expression of CADM1 and higher expression of MAL in Merkel cell carcinomas are associated with Merkel cell polyomavirus infection and better prognosis[J]. Hum Pathol, 2016, 48(5): 1-8.

[13]王曉鳳, 柳艷飛, 田 勇, 等. 過表達(dá)細(xì)胞黏附分子1抑制卵巢癌細(xì)胞遷移及侵襲[J]. 臨床與病理雜志, 2017, 37(1): 29-34.

[14]Okamoto M, Nasu K, Abe W, et al. Enhanced miR-210 expression promotes the pathogenesis of endometriosis through activation of signal transducer and activator of transcription 3[J]. Human Reproduction, 2015, 30(3): 632-41.

[15]李雅男, 王丹波, 陳英漢, 等. 不同類型子宮內(nèi)膜異位癥臨床特點(diǎn)及意義分析[J]. 實(shí)用婦產(chǎn)科雜志, 2015, 31(1): 34-6.

[16]黃鳳英, 王煥萍, 伍 媚, 等. GnRHⅡ與GnRH Ⅰa對子宮內(nèi)膜異位癥患者離體間質(zhì)細(xì)胞增殖抑制的影響[J]. 中南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版, 2011, 36(6): 554-8.

[17]隋東明. CADM1, E-cad在肝細(xì)胞肝癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J]. 中國普通外科雜志, 2015, 24(7): 1046-9.

[18]張 茹, 徐正磊, 譚慶紅. CADM1與DAL-1/4.1 B在結(jié)直腸癌中的表達(dá)[J]. 中國老年學(xué), 2014, 33(14): 3845-7.

[19]李男男, 胡 敏, 王金蕊, 等. 口腔鱗狀細(xì)胞癌中CADM1蛋白的表達(dá)及意義[J]. 口腔醫(yī)學(xué)研究, 2011, 27(2): 145-8.

[20]夏 芬, 胡燕玲, 李 莉. 卵巢癌組織細(xì)胞黏附分子1的表達(dá)變化及意義[J]. 山東醫(yī)藥, 2016, 56(29): 14-6.

[21]劉宏斌, 朱 燕, 張曉娟, 等. 食管鱗癌組織CADM1mRNA的表達(dá)及臨床病理意義[J]. 江蘇醫(yī)藥, 2015, 41(17): 2042-4.

[22]何凱元, 梁偉國. 淺談CADM1在骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)及其與MMP-2, MMP-9的關(guān)系[J]. 當(dāng)代醫(yī)藥論叢, 2015, 32(3): 11-3.