陳向丹 王峻 萬(wàn)珊 董書香 丁陽(yáng)

摘要：建立了二嗪農(nóng)溶液中二嗪農(nóng)含量的反相HPLC測(cè)定方法。采用C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），檢測(cè)波長(zhǎng)225 nm，流動(dòng)相為甲醇-水（75∶25），流速1.0 mL/min。結(jié)果顯示，二嗪農(nóng)在0.2～4.0 mg/mL范圍內(nèi)，含量與峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 9（n=6），平均回收率100.5%，RSD為0.9%。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速、重現(xiàn)性好，可用于該制劑的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：二嗪農(nóng)溶液;反相HPLC法;含量測(cè)定

中圖分類號(hào)：O657.7+2? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? 文章編號(hào)：1007-273X（2018）11-0008-02

二嗪農(nóng)又名二嗪磷，英文通用名Dimpylate，化學(xué)名稱為O，O一二乙基一O一（2一異丙基一4一甲基嘧啶基一6）硫代磷酸醇，是一種廣譜、高效有機(jī)磷殺螨劑。二嗪農(nóng)具有觸殺、胃毒、熏蒸和一定的內(nèi)吸作用，有較強(qiáng)的殺螨活性，是世界上大噸位有機(jī)磷農(nóng)藥品種之一[1]。獸用二嗪農(nóng)溶液用于觸殺家禽的體表寄生蟲蜱、螨、虱，其含量測(cè)定方法為氣相色譜法[2-3]。而氣相色譜會(huì)使某些如不穩(wěn)定性有機(jī)磷農(nóng)藥產(chǎn)生熱分解，因而需要把有機(jī)磷衍生化，增加了分析過(guò)程的復(fù)雜性;高效液相色譜法檢測(cè)有機(jī)磷以其直接、快速、高效、簡(jiǎn)便和適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)而得到迅速發(fā)展[4]。同時(shí)由于氣相色譜法測(cè)定二嗪農(nóng)溶液的含量方法需要使用大量對(duì)照品及內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，且部分企業(yè)缺少相關(guān)檢驗(yàn)儀器及專業(yè)檢驗(yàn)人員，給檢驗(yàn)工作帶來(lái)了諸多不利于控制的因素。為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文探討了反相高效液相法測(cè)定二嗪農(nóng)溶液中二嗪農(nóng)的含量測(cè)定方法。

1? 材料與方法

1.1? 儀器

島津20AD高效液相色譜儀配紫外檢測(cè)器;Agilent Eclipse Plus C18色譜柱，4.6 mm×250 mm（i.d.），粒徑5 μm;Mettler AE240 電子天平;MILIPORE超純水處理器等。

1.2? 試劑與材料

二嗪農(nóng)對(duì)照品含量為98.0%（批號(hào)為06087，購(gòu)于上海某科技有限公司）;甲醇為色譜純;水為二次純化水;二嗪農(nóng)原料、輔料，25%二嗪農(nóng)溶液供試品（批號(hào)為170106，170107，170108）均由武漢某獸藥公司提供。

1.3? 試驗(yàn)方法

1.3.1? 溶液的配制? 精密稱取二嗪農(nóng)對(duì)照品50 mg，置50 mL量瓶中，加入甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，作為對(duì)照品溶液。稱取二嗪農(nóng)供試品適量（約相當(dāng)于二嗪農(nóng)50 mg），置50 mL量瓶中，加入甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，作為供試品溶液。

1.3.2? 色譜條件? 色譜柱：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑流動(dòng)相：甲醇∶水（75∶25）流速：1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：225 nm;進(jìn)樣量：10 μL。

1.3.3? 線性試驗(yàn)? 精密稱取二嗪農(nóng)對(duì)照品500 mg，置50 mL量瓶中，加入甲醇至刻度，搖勻，作為貯備液。分別精密量取貯備液適量，用甲醇分別稀釋至二嗪農(nóng)濃度為0.2、0.5、1.0、2.0、2.5、4.0 mg/mL的溶液，各取10 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，以濃度（C，mg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積（mV）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.4? 專屬性試驗(yàn)? 在“1.3.2“色譜條件下，分別取供試品輔料空白溶液、對(duì)照品溶液以及供試品溶液注入液相色譜儀，考察其專屬性。

1.3.5? 回收率試驗(yàn)? 按處方比例配制25%的二嗪農(nóng)溶液。分別精密稱取40、50和60 mg的二嗪農(nóng)原料及0.12、0.15、0.18 g的輔料置50 mL具塞容量瓶中，加甲醇至刻度，振搖使其溶解，濾過(guò)，按“1.3.2“色譜條件進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算二嗪農(nóng)的含量，計(jì)算回收率。

1.3.6? 精密度試驗(yàn)? 取對(duì)照品溶液（二嗪農(nóng)500 μg/mL），按“1.3.2“色譜條件測(cè)定峰面積，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，考察精密度。

1.3.7? 穩(wěn)定性試驗(yàn)? 取對(duì)照品溶液（二嗪農(nóng)500 μg/mL），按“1.3.2“色譜條件測(cè)定峰面積，在不同時(shí)間（0、2、4、6、8、10、12、24 h）分別進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，考察對(duì)照品穩(wěn)定性。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 線性試驗(yàn)

以濃度（C，mg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積（mV）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸（圖1），得回歸方程：Y=5×106X+89 331，r=0.999 9?？梢?jiàn)在此色譜條件下二嗪農(nóng)在0.2～4.0 mg/mL范圍內(nèi)線性良好。

2.2? 專屬性試驗(yàn)

在“1.3.2“色譜條件下，色譜圖中二嗪農(nóng)與各雜峰分離效果好，含量測(cè)定不受其他雜質(zhì)峰的干擾。具體見(jiàn)圖2、圖3、圖4。

2.3? 回收率試驗(yàn)

加樣回收率考察結(jié)果見(jiàn)表1。試驗(yàn)結(jié)果表明，二嗪農(nóng)平均回收率為100.5%，RSD為0.9%，表明該法符合試驗(yàn)分析要求，準(zhǔn)確度高。

2.4? 精密度試驗(yàn)

連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得二嗪農(nóng)峰面積平均值為5 525 032 mV，RSD為0.1%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5? 穩(wěn)定性試驗(yàn)

在不同時(shí)間（0、2、4、6、8、10、12、24 h）分別進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得二嗪農(nóng)峰面積平均值為5 528 576，RSD為0.1%，結(jié)果表明對(duì)照品溶液在室溫下24 h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定。

2.6? 樣品的測(cè)定

分別取同一廠家不同批號(hào)的樣品，采用“1.3.2”色譜條件進(jìn)行測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。樣品測(cè)定結(jié)果可以看出本法與氣相色譜法測(cè)定的結(jié)果基本一致。

3? 討論

二嗪農(nóng)溶液分別在200～400 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，二嗪農(nóng)在波長(zhǎng)為（225±2） nm處有最大紫外吸收，分別選定了210、225和245 nm在相同試驗(yàn)條件下測(cè)定，結(jié)果顯示在波長(zhǎng)為225 nm時(shí)可以得到較好的峰形且基線穩(wěn)定，故本文采用以上色譜條件測(cè)定二嗪農(nóng)溶液的含量。

4? 結(jié)論

本法測(cè)定二嗪農(nóng)溶液中主藥的含量時(shí)，操作簡(jiǎn)單、快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為該制劑的含量測(cè)定方法的參考。特別是在獸藥企業(yè)的內(nèi)部質(zhì)量控制方面有一定的指導(dǎo)作用。

參考文獻(xiàn)：

[1] 饒? 勇，曾振靈，劉滌潔，等.二嗪農(nóng)在豬組織中的GC—NPD殘留分析方法[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2003，23（4）：385-387.

[2] 中國(guó)獸藥典委員會(huì).獸藥國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（化學(xué)藥品、中藥卷）第一冊(cè)[S].

[3] 中國(guó)獸藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)獸藥典二○一五年版（一部）[S].

[4] 宣秋江，周傳光，徐恒振，等.高效液相色譜分離10種有機(jī)磷農(nóng)藥[J].分析試驗(yàn)室，2008，27（S1）：273-275.