◎ 肖植國，梅 群，孔維芬，張 馨

（曲靖市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，云南 曲靖 655000）

氯霉素類藥物具有廣譜抗菌能力，在水產(chǎn)養(yǎng)殖和畜牧養(yǎng)殖中都廣泛應(yīng)用。這些藥物基本性質(zhì)一般都比較穩(wěn)定，而且不容易降解，尤其在水產(chǎn)品中的殘留物可以通過食物鏈循環(huán)進(jìn)入人體，激素類，主要有氯霉素和甲砜霉素還有氟苯尼考等組成。氯霉素具有很強(qiáng)毒副作用，可抑制人體骨髓造血功能，不斷影響人類的再生障礙性貧血和粒狀白細(xì)胞缺乏癥等[1-3]。是白色或無色的針狀或片狀結(jié)晶，熔點(diǎn)149.7～150.79 ℃，易溶于甲醇、乙醇、丙醇及乙酸乙酯，微溶于乙醚及氯仿，不溶于石油醚及苯。氯霉素極穩(wěn)定，其水溶液經(jīng)5 h煮沸也不失效。

氯霉素分子中含有對(duì)位硝基苯基基團(tuán)、丙二醇和二氯乙酰胺基。由于氯霉素分子中有2個(gè)不對(duì)稱碳原子，所以氯霉素有4個(gè)光學(xué)異構(gòu)體，其中只有左旋異構(gòu)體具有抗菌能力。氯霉素類藥物殘留檢測方法主要有微生物法、酶聯(lián)免疫法、氣相色譜法、液相色譜法、超高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法和超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等[4-6]。

其中超高效液相色譜-超高效液相色譜借助于HPLC的理論及原理，涵蓋了小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積及快速檢測手段等全新技術(shù)，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量，具有分析速度快、選擇性強(qiáng) 、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，是氯霉素類藥物分析首選的方法。處理一般采用乙酸乙酯或乙腈反復(fù)多次提取、正己烷萃取、濃縮溶解，過固相萃取柱（SPE）凈化，再氮吹濃縮，定容測定。

原料熟肉出現(xiàn)問題，需要快速準(zhǔn)確可靠的檢測方法進(jìn)行佐證。對(duì)熟肉制品中氯霉素和中氯霉素類藥物殘留的檢測具有很重要的意義。較好的樣品前處理方法具有有機(jī)試劑消耗量少、測定周期短、選擇性好、靈敏度高和定性定量準(zhǔn)確等特點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

島津30A超高效液相色譜儀（日本島津），島津8040質(zhì)譜儀（日本島津），Mettler TLEDO205DU電子天平，PURELAB F1一體式超純水儀（英國ELGA公司），TGL-10B型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠），10～1000 μL移液器（Transferpette德國），ZH-2DLENDER型渦旋振蕩器（杭州高德泰林）。

1.2 儀器條件

1.2.1 色譜條件

選擇SHIMADZUShimpack FCODS柱（85 mm×4.6 mm，3 μm）為分析柱，甲醇（A）和0.1%甲酸（B）作流動(dòng)相，流速0.2 mL/min，柱溫40.0 ℃。采用梯度洗 脫：0～ 2 min，20% ～ 95% A；2.0～ 2.01 min，95%～20%A；2.01～11.0 min，20% A。色譜柱：島津Shim-Pack FC-ODS75 mm×4.6 mm；流速：0.3 mL/min；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：5 μL；流動(dòng)相：甲醇+水，洗脫液。

1.2.2 質(zhì)譜條件

采用多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式，使用TIS（+）源分析。多反應(yīng)監(jiān)測（MRM），離子源溫度（TEM）550 ℃；輔助氣流速（GS2）：70 psi；發(fā)現(xiàn)樣品測試結(jié)果和加標(biāo)回收率無差別，標(biāo)準(zhǔn)溶液溶劑的選取分別比較了甲醇、超純水、0.1%甲酸。使用甲醇作溶劑時(shí)，定量離子對(duì)、碰撞氣能量（CE）及碰撞室出口電壓（CXP）、碰撞室入口電壓（EP）和去簇電壓（DP）。使用超純水和甲酸水溶液作溶劑時(shí)3種峰的峰型對(duì)稱且尖銳，同時(shí)考慮到與實(shí)際水樣分析時(shí)的一致性，故選擇超純水作溶劑。同內(nèi)徑（0.22 μm）的水相濾頭進(jìn)行實(shí)際水樣、濾頭不同品牌材質(zhì)（PES）、加標(biāo)水樣的比較，3種化合物的峰型毛刺很多，甚至出現(xiàn)雙頭峰。

1.3 樣品前處理

1.3.1 液體熟肉

用1000 mL棕色玻璃瓶采集滿瓶水樣，不留頂空，采集后儲(chǔ)存在4 ℃暗處，當(dāng)天分析。地表水及飲用水源地等干凈水樣可直接進(jìn)樣，廢水或較臟的水樣可過0.22 μm水相濾頭后再進(jìn)樣。準(zhǔn)確稱取5 g試樣于50 mL離心管中，加入50μL氘代氯霉素內(nèi)標(biāo)100 μg/L的工作溶液，加入10 mL乙腈和1 g氯化鈉，以8000 r/min離心10 min，上清液轉(zhuǎn)移至另一個(gè)20 mL試管中，合并乙腈提取液于50 ℃水浴氮?dú)獯抵良s3 mL，加入乙腈飽和正己烷約3 mL渦旋混合萃取3次，氣吹至近干，20%（v∶v）甲醇水定容至1.0 mL，過0.22 μm水相濾膜后上機(jī)測定。

1.3.2 熟肉粉

試樣于50 mL離心管中，準(zhǔn)確稱取2 g，在加入50 μL氯霉素-D5，準(zhǔn)確稱取100 μg/L溶液，加入15 mL水振蕩至奶粉完全溶解，以后步驟與之前的相同。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理方法的優(yōu)化

在肉制品加工中，常加入一定量的天然物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，這對(duì)肉制品加工的質(zhì)量提高有一定的作用，而且正確使用輔料，也對(duì)提高肉制品的質(zhì)量和產(chǎn)量有著很重要的作用，尤其要增加肉制品的花色品種，提高商品價(jià)值和營養(yǎng)價(jià)值，都具有十分重要的意義。熟肉粉的前處理，先采用16 mL純凈水充分溶解奶粉中沉淀物質(zhì)，超聲15 min，再加入乙腈提取，這種分解式的提取方法效果更好。節(jié)約了成本，節(jié)約處理時(shí)間。這種方法與國家標(biāo)準(zhǔn)相比較，樣品前處理基質(zhì)干擾較小，縮短了分析周期，節(jié)省了大量濃縮和固相萃取凈化的時(shí)間[7]。

2.2 不同條件下色譜條件的選擇

國家標(biāo)準(zhǔn)：采用甲醇水（60∶60=V∶V）∶乙腈水（60∶60=V∶V）比例同等梯度洗脫?；蛘哌x擇SHIMADZU Shimpack FCODS柱（75 mm×4.6 mm，5 μm），甲醇（A）和0.3%甲酸（B）作流動(dòng)相，流速0.2 mL/min，柱溫40.0 ℃。采用梯度洗脫：0～5 min，30% ～ 95%A；4.0～ 2.01 min，95% ～ 20%A；4.01～11.0 min，20%A。在不同的環(huán)境下實(shí)際測量定樣品時(shí)，分流進(jìn)樣，降低樣品進(jìn)入色譜柱的量。原料的濃度不同時(shí)，一般可以用分流。微量組分一般不用分流，分流比太小或進(jìn)樣量太大，目標(biāo)物與干擾不同雜質(zhì)的液體流出，在不同的環(huán)境下會(huì)對(duì)目標(biāo)物的離子化產(chǎn)生嚴(yán)重的抑制作用。采用甲醇溶液梯度洗脫，目標(biāo)物得到很好的分離，不同色譜條件選擇的同時(shí)檢測中雜質(zhì)對(duì)目標(biāo)物質(zhì)離子化具有抑制作用。

3 結(jié)語

樣品凈化的之前的步驟處理優(yōu)化很關(guān)鍵，乙腈使用量減少，避免了凈化柱的污染。這不但意味著此次試驗(yàn)具有簡單、快速、靈敏度高、準(zhǔn)確性強(qiáng)等特點(diǎn)。同時(shí)也降低了時(shí)間成本，還可以減少了實(shí)驗(yàn)過程中有機(jī)試劑對(duì)身體的危害。這種方法同時(shí)也可以適用于熟肉制品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素含量的測定。