謝 婷，廖安翠，劉杰標(biāo)，唐海燕，曾永姿，韋 瑛，韋喜梅，陳進(jìn)喜

（1. 河池市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西河池 547000；2. 河池市水產(chǎn)畜牧科教站，廣西河池 547000；3. 欽州市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣西欽州 535099；4. 欽州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西欽州 535099）

在飼料中添加抗球蟲(chóng)藥仍是目前最常用的預(yù)防雞球蟲(chóng)病的方法。但是，由于球蟲(chóng)抗藥性的產(chǎn)生，雞球蟲(chóng)病防治效果不佳，甚至是失敗?？骨蛳x(chóng)藥使用年限的逐漸縮短，導(dǎo)致雞球蟲(chóng)臨床或亞臨床感染逐漸加重，造成的經(jīng)濟(jì)損失越來(lái)越大。因此，球蟲(chóng)抗藥性問(wèn)題已成為所有防治雞球蟲(chóng)病對(duì)策中較嚴(yán)重的問(wèn)題之一。合理選擇和正確使用抗球蟲(chóng)藥能夠有效避免或延緩抗藥性的產(chǎn)生，減少經(jīng)濟(jì)損失。陳麗鳳等[1]、肖寒等[2]、韋圓圓[3]、李亞林[4]分別對(duì)河北省秦皇島市、安徽省部分地區(qū)、廣西部分地區(qū)和湖北省不同地區(qū)的雞球蟲(chóng)抗藥性進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)球蟲(chóng)抗藥性普遍存在。河池市是經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)。該地絕大部分養(yǎng)殖戶的動(dòng)物疫病防治意識(shí)滯后，經(jīng)常單一、重復(fù)使用某一種抗球蟲(chóng)藥。這常會(huì)導(dǎo)致球蟲(chóng)病的暴發(fā)，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。目前尚未有對(duì)河池市雞球蟲(chóng)抗藥性研究的報(bào)道。本研究從河池市采集樣品，分離雞球蟲(chóng)混合蟲(chóng)株，并從市場(chǎng)上選購(gòu)常用的抗球蟲(chóng)藥，采用雞體試驗(yàn)法，對(duì)抗球蟲(chóng)藥的療效進(jìn)行綜合測(cè)定，分析評(píng)價(jià)其療效，從而指導(dǎo)生產(chǎn)中正確選擇和使用抗球蟲(chóng)藥。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物

地克珠利溶液：含0.5%地克珠利；鄭州百瑞動(dòng)物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；批準(zhǔn)文號(hào)為獸藥字（2015）160672045。每1 L 水混 0.5～1 mg。

磺胺喹噁啉鈉可溶性粉（商品名球掃）：浙江道格凱特實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)；批準(zhǔn)文號(hào)為獸藥字（2012）110431624。每1 kg飼料混0.5 g。

鹽酸氯苯胍（商品名雞兔血痢康）：四川通達(dá)動(dòng)物保健科技有限公司生產(chǎn)；批準(zhǔn)文號(hào)為獸藥添字（2015）220171377。每1 kg飼料混0.3～0.6 g。

1.2 供試雞只及飼養(yǎng)管理

廣西本地三黃雞：購(gòu)自南寧正大畜牧有限公司。出殼后運(yùn)回，無(wú)球蟲(chóng)環(huán)境下飼養(yǎng)，飼喂常規(guī)雛雞自配料；14日齡時(shí)，糞檢球蟲(chóng)卵囊，選取優(yōu)良陰性雛雞，供試驗(yàn)用。

1.3 球蟲(chóng)混合卵囊

采自河池市轄區(qū)內(nèi)的8個(gè)雞場(chǎng)。按照常規(guī)方法收集培養(yǎng)球蟲(chóng)混合孢子化卵囊（主要包含柔嫩艾美耳球蟲(chóng)、毒害艾美耳球蟲(chóng)、堆形艾美耳球蟲(chóng)、巨形艾美耳球蟲(chóng)和和緩艾美耳球蟲(chóng)5個(gè)種）。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)雛雞養(yǎng)至15日齡時(shí)，從中選擇健康、體重相近、糞檢球蟲(chóng)卵囊呈陰性的雞只，隨機(jī)分為5組，即空白對(duì)照組、感染對(duì)照組、鹽酸氯苯胍組、地克珠利組和磺胺喹噁啉鈉組，每組30羽，單籠隔離飼養(yǎng)。稱重后，除空白對(duì)照組外，對(duì)其他試驗(yàn)組雞只口服球蟲(chóng)混合孢子化卵囊1.2×105個(gè)/羽。同時(shí)，對(duì)3個(gè)藥物組按照各自的使用說(shuō)明飼喂抗球蟲(chóng)藥，直至試驗(yàn)結(jié)束。感染5～8 d后，每天分兩次收集糞便并稱重，用麥克馬斯特蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)法計(jì)算各組每克糞便的卵囊數(shù)（OPG）。感染8 d后，將各試驗(yàn)組雞只稱重后，逐只剖殺，進(jìn)行腸道病變記分和卵囊計(jì)數(shù)。

1.5 抗藥性評(píng)價(jià)指標(biāo)

抗藥性評(píng)價(jià)指標(biāo)主要有相對(duì)卵囊產(chǎn)量（Relative oocyst production，ROP）、病變記分減少率（Reduction of lesion scores，RLS）、 最 適 抗 球蟲(chóng)活性百分率（Percent of optimum anticoccidial activity，POAA）、 抗 球 蟲(chóng) 指 數(shù)（Anticoccidial index，ACI）[5-6]。

1.5.1 相對(duì)卵囊產(chǎn)量 ROP=（感染給藥組平均卵囊產(chǎn)量/感染不給藥組平均卵囊產(chǎn)量）×100%。ROP≥15%為抗藥陽(yáng)性；ROP＜15%為抗藥陰性。

1.5.2 病變記分減少率 按照J(rèn)ohnson等[7]的方法，對(duì)盲腸進(jìn)行病變記分。兩側(cè)盲腸病變不一致時(shí)，以嚴(yán)重的一側(cè)為準(zhǔn)。RLS=[（感染不給藥組平均病變記分-感染給藥組平均病變記分）/感染不給藥組平均病變記分]×100%。RLS≤50%為抗藥陽(yáng)性；RLS＞50%為抗藥陰性。

1.5.3 最適抗球蟲(chóng)活性百分率 POAA=[（感染給藥組GSR-感染不給藥組GSR）/（不感染不給藥組GSR-感染不給藥組GSR）]×100%；GSR=籠末重/籠初重。POAA≤50%為抗藥陽(yáng)性；POAA＞50%為抗藥陰性。

1.5.4 抗球蟲(chóng)指數(shù) ACI=（存活率+相對(duì)增重率）×100-（病變值+卵囊值）。其中，存活率=（組內(nèi)存活只數(shù)/組內(nèi)總雞數(shù)）×100%；相對(duì)增重率=（感染給藥組或感染不給藥組平均增重/不感染不給藥組平均增重）×100%；病變值=組內(nèi)平均病變記分×10。卵囊值換算方法：ROP為0～l%，卵囊值為0；ROP為l%～25%，卵囊值為5；ROP為26%～50%，卵囊值為10；ROP為5l%～75%，卵囊值為 20；ROP為 76%～100%，卵囊值為40。ACI≥160為抗藥陰性；ACI＜160為抗藥陽(yáng)性。

1.5.5 抗藥性綜合判定標(biāo)準(zhǔn) 運(yùn)用ROP、RLS、POAA、ACI 4項(xiàng)指標(biāo)綜合判定抗藥程度。無(wú)抗藥性（Sensitive）：4項(xiàng)指標(biāo)均為陰性；輕度抗藥（Light resistant）：4項(xiàng)指標(biāo)中有3項(xiàng)指標(biāo)為陰性；中度抗藥（Middle resistant）：4項(xiàng)指標(biāo)中有2項(xiàng)指標(biāo)為陰性；完全抗藥（Complete resistant）：4項(xiàng)指標(biāo)中有3項(xiàng)及3項(xiàng)以上指標(biāo)為陽(yáng)性。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗藥性測(cè)定

各組的相對(duì)增重率因受球蟲(chóng)影響都有所降低，其中鹽酸氯苯胍組的相對(duì)增重率最低；3個(gè)藥物試驗(yàn)組均有較高的卵囊值，除磺胺喹噁啉鈉組為20外，其余2組均為40；受抗球蟲(chóng)藥影響，各試驗(yàn)組的病變值都不太高。各試驗(yàn)組雞的相對(duì)增重率、存活率、卵囊值及病變值等情況見(jiàn)表1。

表1 河池市雞球蟲(chóng)抗藥性測(cè)定結(jié)果

2.2 抗藥性綜合判定

運(yùn)用ROP、RLS、POAA、ACI 等4項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行雞球蟲(chóng)抗藥性綜合判定發(fā)現(xiàn)：磺胺喹噁啉鈉組2項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，2項(xiàng)指標(biāo)陰性；地克珠利組3項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，1項(xiàng)指標(biāo)陰性；鹽酸氯苯胍組4項(xiàng)指標(biāo)均為陽(yáng)性。分離的雞球蟲(chóng)對(duì)磺胺喹噁啉鈉中度抗藥，對(duì)鹽酸氯苯胍和地克珠利完全抗藥（表2）。

表2 河池市雞球蟲(chóng)抗藥性綜合判定結(jié)果

3 討論

從20世紀(jì)40年代開(kāi)始，人們就一直在尋找和使用有效藥物對(duì)雞球蟲(chóng)病進(jìn)行預(yù)防。目前仍在應(yīng)用的抗球蟲(chóng)藥有20余種，可大致分為離子載體和化學(xué)合成兩大類[8]。鹽酸氯苯胍、地克珠利和磺胺喹噁啉鈉均屬于常用的化學(xué)合成類抗球蟲(chóng)藥。但不管是哪一類的抗球蟲(chóng)藥，在經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的使用后，都會(huì)不可避免地產(chǎn)生抗藥性。國(guó)內(nèi)外大量的研究事實(shí)亦證明了這一點(diǎn)[9-11]。

既然球蟲(chóng)抗藥性的產(chǎn)生不可避免，那么定期對(duì)市場(chǎng)上的抗球蟲(chóng)藥進(jìn)行抗藥性測(cè)定，指導(dǎo)養(yǎng)殖戶合理選擇抗球蟲(chóng)藥，克服用藥的盲目性，減少經(jīng)濟(jì)損失，便顯得尤為重要。判定抗藥性的指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)并不相同。目前運(yùn)用得較多的是黃兵等[12]的方法，即用ROP、RLS、POAA、ACI 4項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行綜合判定。這4項(xiàng)指標(biāo)涉及的數(shù)據(jù)較為全面，可以相互補(bǔ)充，相互校正，從而可提高球蟲(chóng)抗藥性判定的準(zhǔn)確性[3]。

在生產(chǎn)實(shí)踐中，市場(chǎng)導(dǎo)向在雞球蟲(chóng)病的有效防治上亦占據(jù)著相當(dāng)重要的位置。本研究在選定藥物時(shí)發(fā)現(xiàn)，轄區(qū)內(nèi)獸藥店正在銷售的球蟲(chóng)藥幾乎都是本試驗(yàn)選定的這幾種，不同的僅僅是獸藥的生產(chǎn)廠家和商品名。市場(chǎng)有限的藥物可選性和養(yǎng)殖戶專業(yè)知識(shí)的匱乏，導(dǎo)致出現(xiàn)球蟲(chóng)病防治效果不佳或失敗亦是必然。但是也不難發(fā)現(xiàn)，一些球蟲(chóng)疫苗和中草藥產(chǎn)品正逐漸進(jìn)入市場(chǎng)。相對(duì)于球蟲(chóng)活疫苗不易保存、毒力易返強(qiáng)等缺點(diǎn)[13]，中草藥卻因其毒副作用小、藥物殘留低、對(duì)環(huán)境友好等特點(diǎn)而備受世人關(guān)注[14]。中草藥雖然起效慢，治療期長(zhǎng)，在治療雞球蟲(chóng)病過(guò)程中受到了限制，但一些學(xué)者在研究中發(fā)現(xiàn)，中西藥配伍不但可以減少西藥的劑量，還能夠增強(qiáng)療效，促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育，提高養(yǎng)雞業(yè)經(jīng)濟(jì)效益[15]。因此，養(yǎng)殖戶在選購(gòu)抗球蟲(chóng)藥時(shí)，可以考慮將中草藥產(chǎn)品和西藥產(chǎn)品進(jìn)行適當(dāng)配伍使用。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，河池市分離的雞球蟲(chóng)對(duì)磺胺喹噁啉鈉中度抗藥，對(duì)鹽酸氯苯胍和地克珠利完全抗藥。建議選購(gòu)其他類的抗球蟲(chóng)藥進(jìn)行雞球蟲(chóng)病防治，并注意輪換用藥；有條件的場(chǎng)可先進(jìn)行抗藥性實(shí)驗(yàn)，然后選擇有效藥物進(jìn)行防治。此外，將中草藥和西藥進(jìn)行適當(dāng)配伍使用，也是一種不錯(cuò)的選擇。這樣可以減少西藥用藥劑量，增強(qiáng)抗球蟲(chóng)療效。

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