楊再清　楊婷　趙應(yīng)梅　莫我躍

【摘 要】建立了LC-FLD方法測(cè)定奶粉中維生素B1的分析方法。采用Inert sustain C18（4.6×250mm， 5μm）色譜柱，流動(dòng)相以濃度為0.05mol/L乙酸鈉溶液與甲醇比為65：35， 流速為1.0mL/min，進(jìn)樣量為20uL。本方法標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)峰和樣品峰峰型對(duì)稱(chēng)無(wú)拖尾現(xiàn)象，校準(zhǔn)曲線線性0.9999931，精密度試驗(yàn)RSD為0.65%，回收率都在90%以上，本方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度良好，適用于奶粉中維生素B1的測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】奶粉；維生素B1；LC-FLD

中圖分類(lèi)號(hào)： TS252.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 2095-2457（2018）36-0196-002

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.36.083

Determination of vitamin B1 in milk powder by LC-FLD

Yang Zaiqing Yang Ting Zhao Yingmei Mo Yiyue

（Guiyang Food and Drug Inspection and Testing Center）

【Abstract】A method LC-FLD for the determination of vitamin B1 in milk powder was developed. In the method， the chromatographic column is column of Inert sustain C18（4.6×250mm， 5μm）.the mobile phase is 0.05mol/L sodium acetate water solution：methanol（65：35），the flow is 1.0mL/min ，and the injection volume is 20μL. In the method， the Chromatographic peak of standard material and the chromatographic peak of the sample is all symmetric and no trailing. The linear relation of calibration curve is 0.9999931，the experiment of precision RSD is 0.65%， Overall recoveries were up 90%， the sensitivity、degree of accuracy、precision was good. .which can be used to detect vitamin B1 in milk powder.

【Key words】Milk powder；Vitamin B1；LC-FLD

維生素B1又稱(chēng)硫胺素或抗神經(jīng)炎維生素。由嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過(guò)亞甲基結(jié)合而成的一種B族維生素。為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，有微弱的特臭，味苦，有引濕性，露置在空氣中，易吸收水分。嬰幼兒生長(zhǎng)發(fā)育迅速，代謝旺盛，需要得到優(yōu)質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)素，B族維生素對(duì)嬰幼兒的生長(zhǎng)發(fā)育有著至關(guān)重要的作用，其主要來(lái)源是母乳及奶粉等[1]。目前，對(duì)于奶粉中維生素B1含量的測(cè)定方法主要有動(dòng)態(tài)液滴熒光法[2]、紫外可見(jiàn)分光光度法[3]、高效液相色譜法[4-7]等。維生素B1是人體生長(zhǎng)和發(fā)育所必須的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，也被廣泛應(yīng)用于食品和保健食品中，因此，準(zhǔn)確測(cè)定食品中維生素B1的含量具有十分重要的意義。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、標(biāo)準(zhǔn)品與試劑

液相色譜儀（Shimadzu LC-20A，島津），配有熒光檢測(cè)器（FLD）和自動(dòng)進(jìn)樣器；離心機(jī)（TDL-5-A，上海安亭）；壓力蒸汽滅菌器（HRLM-80，海爾）；培養(yǎng)箱（DHP-9082，上海一恒）。

維生素B1標(biāo)準(zhǔn)品，純度為97%，購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院。

甲醇（色譜級(jí)）、正丁醇、鐵氰化鉀、鹽酸、三水乙酸鈉、冰乙酸、氫氧化鈉。

1.2 樣品前處理

稱(chēng)取5g奶粉置于三角瓶中，加入鹽酸溶液（0.1 mol/L）60mL，搖勻封口后放入高壓滅菌鍋內(nèi)，121℃保持30min。冷卻后用乙酸鈉溶液（2.0mol/L）調(diào)pH至4.0左右，加入淀粉酶溶液和木瓜蛋白酶溶液，搖勻后置于培養(yǎng)箱中過(guò)夜。將酶解液定容至容量瓶中，過(guò)濾得濾液加入堿性鐵氰化鉀進(jìn)行衍生，然后用正丁醇萃取，離心后吸取正丁醇溶液進(jìn)液相色譜分析。

1.3 液相色譜條件

色譜柱Inert sustain C18柱（4.6×250mm， 5μm）；流動(dòng)相：0.05mol/L乙酸鈉溶液-甲醇（65：35）； 流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量20uL；柱溫：25℃；檢測(cè)器：FLD；檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)375nm，發(fā)射波長(zhǎng)435nm。

1.4 定性定量分析方法

定性分析：采用標(biāo)準(zhǔn)品的出峰保留時(shí)間對(duì)樣品峰進(jìn)行定性。

定量分析：采用外標(biāo)法以峰面積進(jìn)行定量，配制5個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣分析，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制校準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 校準(zhǔn)曲線

將配制好的5個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液按上述條件進(jìn)行分析，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制校準(zhǔn)曲線，線性方程見(jiàn)表1。維生素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見(jiàn)圖1，校準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖2。

2.2 精密度試驗(yàn)

配制維生素B1濃度0.5ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見(jiàn)表2。

2.3 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

在市場(chǎng)所購(gòu)買(mǎi)的某種含有維生素B1的奶粉3份，準(zhǔn)確稱(chēng)量后加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，與樣品以相同的前處理方法和色譜條件測(cè)定，計(jì)算檢測(cè)結(jié)果和回收率見(jiàn)表2，某奶粉中維生素B1色譜圖見(jiàn)圖3、回收率色譜圖見(jiàn)圖4。

3 結(jié)論

本文建立了LC-FLD法準(zhǔn)確測(cè)定奶粉中維生素B1含量的方法。本方法標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)出峰和樣品峰峰型對(duì)稱(chēng)無(wú)拖尾現(xiàn)象，校準(zhǔn)曲線線性0.9999931，精密度試驗(yàn)RSD為0.65%，回收率都在90%以上，本方法靈敏、準(zhǔn)確度、精密度良好，可以滿足日常維生素B1含量的測(cè)定。

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