李曉雨，賀小云，劉秋月，王翔宇，郭曉飛，夏 青，胡文萍，張效生，張金龍，儲明星*，狄 冉*

(1. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，農(nóng)業(yè)部動物遺傳育種與繁殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193；2. 天津市畜牧獸醫(yī)研究所，天津 300381)

在綿羊繁殖周期中，催乳素(Prolactin, PRL)與促性腺激素(Gonadotropins, Gn)釋放模式之間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系：夏季即非繁殖季節(jié)血漿中PRL濃度升高而促性腺激素分泌減弱，綿羊表現(xiàn)為休情[1-4]；秋冬季節(jié)綿羊血漿中PRL濃度降低而促性腺激素分泌增加，表現(xiàn)出發(fā)情特征。與秋冬繁殖季節(jié)相比，非繁殖季節(jié)綿羊垂體中催乳素細(xì)胞(Lactotropes)和濾泡星狀細(xì)胞(Folliculostellate cells, FSC)體積增大，且兩種細(xì)胞之間的縫隙連接增多，暗示這種催乳素細(xì)胞和FSC形態(tài)學(xué)季節(jié)性變化與PRL的分泌相關(guān)[5]。多項(xiàng)研究表明，在受光周期調(diào)控的動物中，促性腺激素細(xì)胞(Gonadotropes)和催乳素細(xì)胞之間的相互作用以及FSC的調(diào)節(jié)作用均響應(yīng)于不同光照周期條件下松果體分泌的褪黑激素(Melatonin, Mel)信號。Mel首先作用于垂體結(jié)節(jié)部(Pars tuberalis, PT)，然后通過PT神經(jīng)肽信號以光周期依賴方式傳遞到遠(yuǎn)側(cè)部(Pars distalis, PD)區(qū)域，并刺激PRL的分泌[6]。綿羊PT組織存在可促進(jìn)PRL分泌的速激肽前體1(Tachykinin precursor 1, TAC1)[7-9]，且TAC1作為綿羊PT中將Mel信號傳遞至PD部位的神經(jīng)肽信號，有強(qiáng)烈的光周期性，TAC1基因可編碼速激肽物質(zhì)P(Tachykinins substance P，SP)和神經(jīng)激肽A (Neurokinin A，NKA)，其中SP在肽鏈內(nèi)切酶的作用下轉(zhuǎn)化為有活性的SP1-7與NKA共同調(diào)節(jié)PRL的分泌[10]。

也有研究表明，在短光照條件下，夜間Mel長時(shí)間持續(xù)存在作用于PT組織中MEL敏感細(xì)胞，通過旁分泌抑制了PD區(qū)域PRL的分泌，PRL與促性腺細(xì)胞上的催乳素受體(Prolactin receptor，PRLR)結(jié)合減弱，減少了對促性腺細(xì)胞的抑制及對FSC的下調(diào)作用；同時(shí)，PRL分泌減少也抑制了下丘腦多巴胺(Dopamine, DA)網(wǎng)絡(luò)的活化，由于DA能夠抑制PRL分泌以及GnRH神經(jīng)元活性，因此此時(shí)GnRH神經(jīng)元的去抑制作用促進(jìn)了GnRH釋放，啟動了繁殖季節(jié)的到來；GnRH分泌的增加也通過促性腺細(xì)胞旁分泌作用于催乳素細(xì)胞，這可能增加了兩種細(xì)胞的相互作用以調(diào)控促性腺細(xì)胞響應(yīng)于性腺反饋的信號。而長光照下，夜間Mel的短暫持續(xù)分泌不能抑制催乳素的分泌，PRL分泌突然增加，通過催乳素受體活化了DA神經(jīng)元，導(dǎo)致GnRH分泌減少，通過FSC、催乳素細(xì)胞和DA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)活動的增強(qiáng)完全抑制了促性腺細(xì)胞，從而使動物表現(xiàn)休情特征[11]。綜上，催乳素主要通過作用于垂體促性腺細(xì)胞和下丘腦神經(jīng)元上的PRLR引起后續(xù)一系列生理變化[12-13]。

然而，PRL在動物季節(jié)性繁殖和繁殖時(shí)期轉(zhuǎn)換中的詳細(xì)調(diào)控機(jī)制尚不清楚，本研究針對PRL調(diào)控通路中的2個重要基因TAC1和PRLR在不同光照條件和不同繁殖時(shí)期綿羊垂體等組織中進(jìn)行表達(dá)譜研究，并且分析由短光照變?yōu)殚L光照后2個基因的表達(dá)變化模式，為進(jìn)一步揭示PRL在動物季節(jié)性繁殖和繁殖時(shí)期轉(zhuǎn)換中的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 動物材料

隨機(jī)選取2～3周歲健康、經(jīng)產(chǎn)的空懷蘇尼特母羊和小尾寒羊母羊，飼養(yǎng)于天津市畜牧獸醫(yī)研究所試驗(yàn)羊場。所有羊只的飼養(yǎng)管理方式、飼料配方和環(huán)境一致。每天飼喂2次，時(shí)間分別為05:30和15:30，每天給每只羊提供2.4 kg全混合日糧(2 kg干草與0.4 kg精料)供其自由采食，羊舍內(nèi)提供舔磚補(bǔ)充微量元素，自由飲水。

1.1.1 蘇尼特羊 表達(dá)譜試驗(yàn)：蘇尼特羊在人工控光條件下短光照(光照時(shí)長8 h，SP)第21天和長光照(光照時(shí)長16 h，LP)第49天(每個光照處理?xiàng)l件各3只)處死并分別采集下丘腦、垂體、松果體、大腦、小腦、卵巢、子宮體、輸卵管、腎、腎上腺等組織樣品，采集到的組織樣品經(jīng)液氮速凍后-80 ℃保存。

短光照轉(zhuǎn)為長光照的表達(dá)模式試驗(yàn)：蘇尼特羊在天津市畜牧獸醫(yī)研究所試驗(yàn)羊場摘除卵巢并埋植雌激素處理(OVX+E2)，短光照42 d后轉(zhuǎn)為長光照，并根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[14-17]與本課題組預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，分別在短光照第21天(SP21D)，長光照第3天(LP3D)、15天(LP15D)、21天(LP21D)、42天(LP42D)、49天(LP49D)上述每個時(shí)間點(diǎn)屠宰3只羊并采集上述組織，組織樣品經(jīng)液氮速凍后-80 ℃保存。

1.1.2 小尾寒羊 用孕酮陰道栓(CIDR)對6只小尾寒羊進(jìn)行處理，12 d后撤栓，撤栓之后第45小時(shí)為卵泡期，撤栓第10天為黃體期，在兩個時(shí)期分別屠宰3只后，采取相應(yīng)組織樣品，樣品經(jīng)液氮速凍后-80 ℃保存。

1.2 RNA提取

用Trizol和RNAprep pure動物組織總RNA提取試劑盒(天根生化科技北京有限公司)提取上述組織總RNA，提取過程中用RNase-free DNaseⅠ去除基因組DNA。利用NANODROP 2000檢測總RNA濃度和純度，OD值(A260 nm/A280 nm)為1.8～2.1，并用1%的瓊脂糖凝膠對RNA進(jìn)行電泳檢測，無明顯降解，置于-80 ℃冷凍備用。

1.3 cDNA合成(RT-PCR)

使用PrimeScriptTM RT Reagent Kit反轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa, Japan)，按照說明書操作合成cDNA第一鏈。反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物稀釋后，用持家基因β-actin進(jìn)行PCR檢測，可成功擴(kuò)增。

1.4 定量引物設(shè)計(jì)

根據(jù)NCBI公布的綿羊TAC1 mRNA序列(NM_001082596.1)以及PRLRmRNA序列(GenBank:Y10578.1)，并結(jié)合本課題組RNA-seq序列結(jié)果設(shè)計(jì)引物。引物信息如表1所示，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

表1 熒光定量引物信息

Table 1 The information of primer sequences for qPCR

名稱Name引物序列(5'→3')Primersequence產(chǎn)物大小/bpProductsizeTAC1F:GAAAATCCTCGTGGCCTTGGR:AGATGCTCAAAGGGCTCAGG150PRLRF:TCCAGACTACAAAACCGGGGR:TACATCAGTCAGGGTGGGTG253β-actinF:CCAACCGTGAGAAGATGACCR:CCAGAGGCGTACAGGGACAG97

1.5 熒光定量PCR

使用Roche Light Cycler 480Ⅱ熒光定量PCR儀和SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ(TaKaRa, Japan)試劑盒對2個基因進(jìn)行熒光檢測，每個試驗(yàn)樣品3個技術(shù)重復(fù)，β-actin作為內(nèi)參基因，設(shè)置陰性對照(模板為H2O)。熒光定量PCR擴(kuò)增體系：2×SYBR premix Ex Taq 10 μL，上下游引物各0.8 μL，RNase free H2O 6.4 μL，cDNA模板2 μL，反應(yīng)體系總體積為20 μL。PCR程序：95 ℃ 預(yù)變性5 s；95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，40個循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行熔解曲線分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

采用2-ΔΔCT法計(jì)算目的基因相對表達(dá)量，數(shù)據(jù)差異顯著性用SPSS 20進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較用單因素方差分析(One-way ANOVA)，用最小顯著差異法(Least significant difference, LSD)進(jìn)行多重比較，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean±SE)”表示。

2 結(jié) 果

2.1 TAC1基因在不同光照條件下蘇尼特羊和不同繁殖時(shí)期小尾寒羊的組織表達(dá)譜

TAC1基因在長短光照條件下蘇尼特羊組織中的表達(dá)情況總結(jié)如圖1，該基因在蘇尼特羊下丘腦等10種組織中均有表達(dá)，其中下丘腦中的表達(dá)量明顯高于其他組織，在性腺軸中的表達(dá)量相對較高。各組織在不同光照條件下的表達(dá)趨勢基本一致，均為長光照條件下表達(dá)量高；其中長光照條件下蘇尼特羊垂體和輸卵管中TAC1的表達(dá)量顯著高于短光照(P<0.05)。

黃體期和卵泡期小尾寒羊組織表達(dá)譜結(jié)果如圖2所示，TAC1基因在小尾寒羊大腦等10種組織中均有表達(dá)，其中下丘腦中的表達(dá)量明顯高于其他組織，在性腺軸中的表達(dá)量相對較高，且黃體期小尾寒羊大多數(shù)組織(腎上腺、垂體除外)中表達(dá)量均高于卵泡期，與TAC1在長短光照條件下蘇尼特羊各組織的表達(dá)差異類似。

LP. 長光照；SP. 短光照。柱形上方“*”表示該基因在長光照與短光照蘇尼特羊該組織中表達(dá)量差異顯著(P<0.05)。圖4同LP. Long photoperiod; SP. Short photoperiod. The “*” on the columns indicate the significant difference (P<0.05) at the expression level of gene between the long photoperiod and the short photoperiod in tissues of Sunite sheep. The same as Figure 4圖1 不同光照條件下蘇尼特羊TAC1組織表達(dá)譜Fig.1 Tissue expression of TAC1 in Sunite sheep under different photoperiods

柱形上方“*”表示該基因在黃體期與卵泡期小尾寒羊該組織中表達(dá)量差異顯著(P<0.05)。圖5同The “*” on the column indicate the significant difference (P<0.05) at the expression level of gene between the luteal phase and follicular phase in tissues of STH sheep. The same as Figure 5圖2 不同繁殖時(shí)期小尾寒羊TAC1組織表達(dá)譜Fig.2 Tissue expression of TAC1 in Small Tail Han sheep at different reproductive stages

2.2 短光照轉(zhuǎn)變?yōu)殚L光照后蘇尼特羊垂體中TAC1基因的表達(dá)變化模式

為了闡明TAC1基因在長光照后的表達(dá)變化模式，本研究對長光照后多個時(shí)間點(diǎn)蘇尼特羊垂體進(jìn)行TAC1基因表達(dá)分析(圖3)，結(jié)果表明，短光照條件下蘇尼特羊垂體TAC1基因表達(dá)量最低，轉(zhuǎn)為長光照處理后，TAC1表達(dá)量在長光照的前42 d沒有顯著變化(P>0.05)，但有緩慢上升趨勢，而在LP49D時(shí)表達(dá)量顯著升高并極顯著高于其他時(shí)間點(diǎn)(P<0.01)。

2.3 PRLR基因在不同光照條件下蘇尼特羊和不同繁殖時(shí)期小尾寒羊的組織表達(dá)譜

本研究檢測了長短光照條件下蘇尼特羊多個組織中PRLR基因的表達(dá)情況，結(jié)果如圖4所示。PRLR基因在各個組織中均有表達(dá)，在垂體、腎上腺中的表達(dá)量較高，其他組織中較低；其中腎上腺和垂體中的表達(dá)量明顯高于其他組織。各組織不同光照條件下的表達(dá)趨勢基本一致，均為長光照表達(dá)量高(小腦除外)；其中長光照條件下下丘腦、輸卵管和腎上腺中PRLR的表達(dá)量顯著高于短光照下表達(dá)量(P<0.05)。

本研究也檢測了不同繁殖時(shí)期小尾寒羊PRLR基因的組織表達(dá)情況，結(jié)果如圖5所示。PRLR基因在小尾寒羊各組織中的表達(dá)情況與蘇尼特羊幾乎一致，在垂體、下丘腦、腎上腺、腎中表達(dá)較高，而其他組織中的表達(dá)水平較低。相對于黃體期，PRLR在卵泡期各組織(除小腦、輸卵管和子宮)中的表達(dá)量均較低，其中卵泡期卵巢中該基因的表達(dá)量顯著低于黃體期(P<0.05)。

柱形上方不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同字母表示差異不顯著(P>0.05)。圖6、7同Different letters above the column indicate significant differences (capital letter: P<0.01, lowercase letter: P<0.05), the same letter above the column indicate no significant difference (P>0.05). The same as Figure 6, 7圖3 短光照轉(zhuǎn)變?yōu)殚L光照后蘇尼特羊垂體TAC1基因的表達(dá)變化模式Fig.3 The expression pattern of TAC1 during the transition from SP to LP in pituitary of Sunite sheep

圖4 不同光照條件下蘇尼特羊PRLR組織表達(dá)譜Fig.4 Tissue expression of PRLR in Sunite sheep under different photoperiods

圖5 不同繁殖時(shí)期小尾寒羊PRLR組織表達(dá)譜Fig.5 Tissue expression of PRLR in STH sheep at different reproductive stages

2.4 短光照轉(zhuǎn)變?yōu)殚L光照后蘇尼特羊垂體和下丘腦中PRLR基因的表達(dá)變化模式

如圖6所示，由短光照轉(zhuǎn)為長光照第3天后，蘇尼特羊垂體中PRLR基因表達(dá)量顯著升高(P<0.05)，至長光照21天時(shí)表達(dá)量達(dá)到峰值并顯著高于其他時(shí)間點(diǎn)，LP42D和LP49D時(shí)表達(dá)量有所下降，但LP42D仍顯著高于短光照時(shí)的表達(dá)量(P<0.05)。圖7表明，由短光照轉(zhuǎn)為長光照時(shí)，蘇尼特羊下丘腦中PRLR基因表達(dá)逐漸升高，且從LP15D開始其表達(dá)量顯著高于短光照(P<0.05)。

圖6 短光照轉(zhuǎn)變?yōu)殚L光照后蘇尼特羊垂體中PRLR基因的表達(dá)變化模式Fig.6 The expression pattern of PRLR during the transition from SP to LP in pituitary of Sunite sheep

圖7 短光照轉(zhuǎn)變?yōu)殚L光照后蘇尼特羊下丘腦中PRLR基因的表達(dá)變化模式Fig.7 The expression pattern of PRLR during the transition from SP to LP in hypothalamus of Sunite sheep

3 討 論

3.1 TAC1基因發(fā)揮作用的主要組織及對動物繁殖的影響

本研究對TAC1基因在季節(jié)性發(fā)情綿羊品種蘇尼特羊和常年發(fā)情品種小尾寒羊大腦等10個組織中做了表達(dá)量分析。TAC1基因在兩個品種綿羊大腦等10個組織中均有表達(dá)，且組織表達(dá)特征基本一致，其在性腺軸組織和大腦中的表達(dá)量相對較高，暗示該基因在綿羊的這些組織中發(fā)揮主要作用，與繁殖性能密切相關(guān)。對人該基因的組織表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，它幾乎在所有組織中都有表達(dá)，特別是腦部組織、心、大腸、脾以及乳腺表達(dá)較高，僅在非外周神經(jīng)系統(tǒng)支配的胎盤組織中未發(fā)現(xiàn)表達(dá)[18-21]。在鯉魚體內(nèi)，TAC1基因主要表達(dá)于垂體、下丘腦、小腦、脊髓、鰓、心、腸、肝、肌肉和性腺組織中，在腎、血液和嗅球中沒有檢測到表達(dá)，將TAC1基因克隆于鯉魚垂體中，發(fā)現(xiàn)其編碼產(chǎn)物SP和NKA可以觸發(fā)促黃體素(Luteinizing hormone，LH)和PRL的分泌[22]。TAC1基因編碼的產(chǎn)物SP廣泛分布于大腦中，在下丘腦中高度表達(dá)，與Kiss1和GnRH神經(jīng)元密切接觸，提示其可能與這些神經(jīng)元存在相互作用[23-24]，且研究顯示，雄性小鼠TAC1基因敲除后青春期明顯推遲[24]，因此TAC1的表達(dá)對動物繁殖起著非常重要的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，長光照條件下蘇尼特羊各個組織中該基因的表達(dá)量均高于短光照條件下表達(dá)量，黃體期小尾寒羊各組織中表達(dá)量幾乎都高于卵泡期；這些結(jié)果表明，該基因可能在綿羊季節(jié)性繁殖和繁殖時(shí)期轉(zhuǎn)換中扮演了一定角色。研究發(fā)現(xiàn)，小鼠下丘腦組織中TAC1基因的表達(dá)受雌激素抑制[25]，本研究結(jié)果也顯示卵泡期小尾寒羊下丘腦的TAC1基因表達(dá)量低于黃體期，暗示卵泡期綿羊下丘腦中該基因的表達(dá)可能受到高水平雌激素的調(diào)控。長短光照對比中，TAC1表達(dá)差異在垂體和輸卵管組織中達(dá)到顯著水平，暗示該基因最有可能在這2個組織中參與季節(jié)性繁殖的調(diào)控。由短光照轉(zhuǎn)為長光照處理后，蘇尼特羊垂體中TAC1基因表達(dá)量逐步上升，長光照49天時(shí)表達(dá)量達(dá)到最高值，并極顯著高于其他光照時(shí)長處理組。S. M. Dupré等[10]的研究表明，TAC1基因在綿羊PT表達(dá)受光照調(diào)節(jié)，長光照處理時(shí)表達(dá)顯著高于短光照。這些研究結(jié)果暗示TAC1是調(diào)節(jié)動物季節(jié)性繁殖的一個重要信號。

3.2 PRLR基因發(fā)揮作用的主要組織及對動物繁殖的影響

目前已經(jīng)確定PRLR是細(xì)胞因子受體超家族成員之一，催乳素受體信使RNA(mRNA)先后在大鼠、綿羊和馬的垂體中得到鑒定[26-28]。本研究發(fā)現(xiàn)，PRLR基因在不同繁殖狀態(tài)綿羊各個組織中均有表達(dá)，在垂體和下丘腦中的表達(dá)量較高，其中垂體PRLR表達(dá)量遠(yuǎn)高于其他各組織。這與趙強(qiáng)[29]通過免疫組化方法對成年小尾寒羊進(jìn)行PRLR組織定位結(jié)果一致，他報(bào)道PRLR在綿羊的垂體、下丘腦、子宮和卵巢組織中均有陽性反應(yīng)，且在垂體遠(yuǎn)側(cè)端最為明顯。另外，在綿羊其他部位如腹股溝竇[30]、脂肪[31]等組織中也存在該基因的表達(dá)。吳憲紅等[32]發(fā)現(xiàn)，PRLR基因的mRNA在處于發(fā)情期的樂至黑山羊和藏山羊組織中廣泛表達(dá)，并且垂體中的表達(dá)量高于肝、子宮內(nèi)膜和卵巢。M. Hasiec等[33]用熒光定量方法研究了休情期哺乳母羊腦部若干組織中PRLR的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)該基因在視前區(qū)(Preoptic areas)、下丘腦視上核(Supraoptic nucleus)、室旁核(Paraventricular nucleus)、脈絡(luò)叢(Choroid plexus)和垂體前葉(Anterior pituitary)均有表達(dá)。D. J. Tortonese 等[27]報(bào)道，PRLR基因在綿羊促性腺激素細(xì)胞中選擇性表達(dá)。以上研究表明綿羊PRLR基因主要在垂體和下丘腦中發(fā)揮作用。

研究表明，PRLR在動物機(jī)體不同組織中的表達(dá)存在差異并且其表達(dá)水平會隨動物的繁殖周期變化而變化。本研究發(fā)現(xiàn)，PRLR基因在不同繁殖時(shí)期小尾寒羊和不同光照時(shí)長處理下蘇尼特羊垂體等10個組織中均有不同程度的表達(dá)但存在差異，蘇尼特羊在短光照條件下(繁殖季節(jié))幾乎所有組織中PRLR的表達(dá)量顯著低于長光照條件下(休情季節(jié))表達(dá)量，暗示該基因可能參與綿羊季節(jié)性繁殖的調(diào)控；小尾寒羊PRLR在卵泡期各組織中的表達(dá)量均顯著低于黃體期，暗示該基因可能與綿羊繁殖時(shí)期轉(zhuǎn)換有關(guān)。R. A. Picazo 等[34]研究了PRLR在綿羊整個發(fā)情周期卵巢中的表達(dá)變化和細(xì)胞定位，發(fā)現(xiàn)在發(fā)情周期的第0、10和15天中PRLR在促性腺激素依賴性原始卵泡中的細(xì)胞定位是相似的，并且原始卵泡和初級卵泡中陽性信號最強(qiáng)，而在即將排卵的成熟卵泡顆粒細(xì)胞中幾乎沒有陽性信號，卵母細(xì)胞一直顯示PRLR陽性免疫染色。對雞顆粒細(xì)胞中PRLR表達(dá)的研究表明，該基因的轉(zhuǎn)錄物水平在直徑小于2 mm的卵泡基質(zhì)和壁細(xì)胞中最高，隨著卵泡的成熟表達(dá)水平逐漸下降[35]。這表明，PRLR基因高表達(dá)可能對動物繁殖活動有抑制作用，或者發(fā)情和排卵可能抑制PRLR基因的表達(dá)。

在季節(jié)性繁殖的動物(如羊和馬)中，GnRH和促性腺激素的分泌受季節(jié)性變化即日照時(shí)長控制。光周期信息由松果體夜間分泌褪黑激素的模式解碼[36]，腦垂體中高密度的褪黑激素受體被褪黑激素激活后可直接調(diào)控垂體內(nèi)催乳素的分泌模式[37]。催乳素可能通過2種途徑調(diào)控下游因子，一種途徑是：綿羊下丘腦接收了催乳素信號后PRLR基因高表達(dá)，然后通過下丘腦-垂體-性腺軸進(jìn)行繁殖信號的傳遞；另外一種途徑是垂體內(nèi)局部旁分泌機(jī)制：垂體前葉接收催乳素信號后PRLR基因高表達(dá)，抑制促性腺細(xì)胞分泌LH和FSH。蘇尼特羊垂體中PRLR基因在短光照條件下表達(dá)量相對較低，轉(zhuǎn)為長光照處理后逐步上升，長光照第21天時(shí)表達(dá)量達(dá)到最高值，并極顯著高于其他光照處理組，長光照第42天和第49天時(shí)表達(dá)量有所下降，但仍高于短光照；由短光照條件下轉(zhuǎn)為長光照處理后，下丘腦中PRLR基因表達(dá)量逐步增加，且從長光照15 d后開始顯著高于短光照。S. Wood 等[38]研究表明，綿羊短光照處理的12周內(nèi)其血漿催乳素水平處于穩(wěn)定低水平狀態(tài)，而轉(zhuǎn)為長光照后前2周明顯升高，3周之后處于較高水平。本研究表明，催乳素受體是在長光照之后發(fā)生響應(yīng)并與催乳素變化的趨勢基本一致，而且在垂體和下丘腦中顯示出不同的變化模式。

4 結(jié) 論

TAC1主要表達(dá)于性腺軸組織，PRLR基因主要在垂體和腎上腺中表達(dá)。這2個基因在不同光照條件和不同繁殖時(shí)期綿羊各組織中的表達(dá)差異暗示它們可能涉及綿羊季節(jié)性繁殖和繁殖時(shí)期轉(zhuǎn)換的調(diào)控。由短光照轉(zhuǎn)為長光照條件后PRLR基因在季節(jié)性發(fā)情綿羊的垂體和下丘腦中具有不同的響應(yīng)模式，暗示存在不同的調(diào)控方式。

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