羅芳梅，曹 靖，王 婷，劉 輝，田 娟，丁勁松

(1.湖南省兒童醫(yī)院，長(zhǎng)沙 410007；2.中南大學(xué)湘雅藥學(xué)院，長(zhǎng)沙 410013)

馬來(lái)酸桂哌齊特(cinepazide maleate，CMA)具有增加內(nèi)源性腺苷、拮抗鈣離子、擴(kuò)張血管和促進(jìn)腦細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)代謝等作用，對(duì)心腦缺血細(xì)胞具有保護(hù)作用[1-3]。CMA臨床應(yīng)用廣泛，主要用于心腦血管、外周血管疾病及其他疾病的治療，如不穩(wěn)定型心絞痛[4]、高血壓性腦出血[5]、腦梗死[6-7]、蛛網(wǎng)膜下腔出血[8]、腎絞痛[9-10]、糖尿病周圍神經(jīng)病變[11]及急診眩暈[12]等。但CMA注射液的光穩(wěn)定性較差，對(duì)其生產(chǎn)、儲(chǔ)藏、運(yùn)輸和使用帶來(lái)不便，同時(shí)也給臨床安全用藥帶來(lái)隱患[13-15]。為了改善桂哌齊特的光穩(wěn)定性，更好的發(fā)揮其臨床優(yōu)勢(shì)，北京四環(huán)制藥有限公司研制了桂哌齊特(cinepazide，CPZ)的甲磺酸鹽，即甲磺酸桂哌齊特(cinepazide mesylate，CME)。臨床前藥效學(xué)對(duì)比研究發(fā)現(xiàn)，CME與CMA一樣，具有擴(kuò)張血管、改善循環(huán)及保護(hù)腦細(xì)胞的作用。分別以水和甲醇為溶劑比較CME和CMA的溶解度發(fā)現(xiàn)，CME的溶解度高，更適合做成注射劑。理化性質(zhì)的改變可能改變其體內(nèi)處置，而體內(nèi)處置與療效、毒性和不良反應(yīng)等安全性問題密切相關(guān)。此外，心腦血管疾病如心絞痛[16]、腦梗死[17]及蛛網(wǎng)膜下腔出血[18]等臨床治療需多次用藥，而連續(xù)多次給藥后藥物在體內(nèi)可能會(huì)蓄積中毒。因此，對(duì)CPZ改變酸根前后進(jìn)行單次與多次給藥藥動(dòng)學(xué)比較研究是非常必要的。本研究考察了CME和CMA單次與多次給藥的藥動(dòng)學(xué)特征，并比較了單次與多次給藥、酸根改變前后的藥動(dòng)學(xué)特征，為其臨床研究提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1儀器 LC-20AT高效液相色譜儀(日本島津公司)；XW-80A微型渦旋混合儀(上海滬西分析儀器廠有限公司)；TDD5M多管低速離心機(jī)(長(zhǎng)沙平凡儀表有限公司)；TGL16M低溫高速離心機(jī)(長(zhǎng)沙泰英儀器廠)；KL-up-Ⅱ-10型超純水機(jī)(臺(tái)灣艾柯公司)；BP 211D型十萬(wàn)分之一天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)。

1.2試藥 甲磺酸桂哌齊特注射液(規(guī)格：250 mg/10 mL，批號(hào)110902)，馬來(lái)酸桂哌齊特注射液(規(guī)格：320 mg/10 mL，批號(hào)20110940)，桂哌齊特游離堿(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為96.7%，批號(hào)110422-1)，均為北京四環(huán)制藥有限公司生產(chǎn)；鹽酸坦索羅辛對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.8%，批號(hào)1006882004-01)；乙腈(批號(hào)LOT40Y1201SS)，甲醇(批號(hào)LOT1105074)，均為色譜純，購(gòu)自美國(guó)天地有限公司；冰醋酸(批號(hào)T20100519)，乙酸銨(批號(hào)F20091117a)，三乙胺(批號(hào)F20100802)，均為國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；色譜用水為試驗(yàn)自制去離子超純水；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3材料 空白人血漿和尿液(來(lái)自健康受試者)。

2 方法

2.1志愿者 篩選12名中國(guó)健康志愿者，男女各半，年齡為20～27歲，身高150～176 cm，體質(zhì)量45.5～65.5 kg。試驗(yàn)方案經(jīng)中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且試驗(yàn)前所有志愿者均簽署知情同意書。

2.2試驗(yàn)方案 采用2×2交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，12名健康志愿者，男女各半，在兩周期內(nèi)分別靜脈滴注CME 250 mg和CMA 320 mg(以CPZ計(jì)，為等摩爾劑量)，每周期連續(xù)給藥5 d，每日1次。洗脫期為10 d。

血樣采集與保存：于每周期給藥的第1和5天給藥前(0 h)分別采靜脈血5 mL，給藥開始后0.5，1，1.5，2 h(滴完)，2.5，3，3.5，4，5，6，8，10，12和14 h以及第3和4天給藥前分別采靜脈血5 mL，血樣立即離心，-80 ℃保存待測(cè)。

尿樣采集與保存：在每周期第1天給藥前采集尿液樣本并排空膀胱，于給藥開始后0～2，2～4，4～8，8～12和12～24 h分段收集尿液樣本，測(cè)量體積后，留取5 mL樣品，-80 ℃保存待測(cè)。

2.3測(cè)定方法 采用HPLC-UV法測(cè)定血樣和尿樣中的CPZ[19]。

2.3.1色譜條件 色譜柱：依利特C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm)；保護(hù)柱：Security Guard C18柱(4 mm×3.0 mm，Phenomenex，USA)；流動(dòng)相：乙腈∶乙酸銨緩沖溶液(1 mL·L-1醋酸+2 mL·L-1乙酸銨+1 mL·L-1三乙胺)=29∶71；柱溫：40 ℃；流速：1 mL·min-1；進(jìn)樣量：30 μL。

2.3.2樣品處理 血樣處理：取血樣200 μL，置于2 mL EP管中，精密加入25 μL 質(zhì)量濃度為200 μg·mL-1的鹽酸坦索羅辛內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋30 s，加入100 μL甲醇-50 g·L-1硫酸鋅(70∶30)沉淀劑，渦旋振蕩1 min，以13 500 r·min-1離心10 min，取上清200 μL，置于進(jìn)樣瓶的內(nèi)襯管中，進(jìn)樣30 μL。

尿樣處理：取尿樣200 μL，置于2 mL EP管中，精密加入25 μL質(zhì)量濃度為 2 mg·mL-1的鹽酸坦索羅辛內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋30 s，加入1 mL甲醇-水(30∶80)溶液，渦旋振蕩1 min，以13 500 r·min-1離心10 min，取上清200 μL，置于進(jìn)樣瓶的內(nèi)襯管中，進(jìn)樣30 μL。

2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用DAS Ver 2.1計(jì)算CPZ的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，采用非房室模型擬合法計(jì)算各志愿者血漿中CPZ的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。利用SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

對(duì)CPZ的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)lnCmax、lnAUC0～t、lnAUC0～∞、V和CL進(jìn)行方差分析，并對(duì)參數(shù)t1/2和MRT0～t進(jìn)行非參數(shù)檢驗(yàn)，對(duì)尿累積排泄率進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1方法學(xué)驗(yàn)證 血樣中CPZ、內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間分別為8.0和6.8 min，尿樣中分別為7.9 和6.6 min，特異性良好。分別配制CPZ質(zhì)量濃度為15，10，5，1，0.5，0.1和0.05 μg·mL-1的CPZ標(biāo)準(zhǔn)血樣和CPZ質(zhì)量濃度為300，150，50，25，5，1和0.5 μg·mL-1的CPZ標(biāo)準(zhǔn)尿樣，按照2.3.2項(xiàng)下方法處理后，采用內(nèi)標(biāo)法計(jì)算質(zhì)量濃度。血樣、尿樣中CPZ的線性回歸方程分別為y=1.24x-0.046 4(r=0.997 7)和y=6.86×10-5x+0.16(r=0.998 0)，線性范圍分別為0.05～15.0和0.5～300 μg·mL-1，定量下限分別為0.05和0.5 μg·mL-1(S/N≥10)。血樣、尿樣的提取回收率見表1。日內(nèi)、日間精密度見表2。CPZ血樣及尿樣室溫避光放置6 h穩(wěn)定(RSD<7.0%，3.3%)。血樣及尿樣處理液室溫避光放置24 h穩(wěn)定(RSD<5.4%，5.3%)，4 ℃避光放置48 h穩(wěn)定(RSD<7.2%，6.3%)。CPZ血樣和尿樣均在3次凍融過(guò)程中穩(wěn)定(RSD<3.2%，2.9%)。CPZ血樣及尿樣在-80 ℃放置60 d穩(wěn)定(RSD<10.4%，5.2%)。

3.2受試者入組及完成情況 12名健康志愿者參與本試驗(yàn)，其中1名于第1周期給藥第4天因個(gè)人時(shí)間原因撤銷知情同意，退出試驗(yàn)，共11名志愿者完成全部試驗(yàn)。

表1血樣、尿樣中CPZ和內(nèi)標(biāo)的提取回收率

3.3藥時(shí)曲線

3.3.1血藥質(zhì)量濃度的測(cè)定 11名志愿者單次、多次靜脈滴注CME和CMA后CPZ平均血藥質(zhì)量濃度時(shí)間曲線見圖1。

3.3.2尿藥質(zhì)量濃度的測(cè)定 12名志愿者參與本試驗(yàn)的尿液樣本收集，其中10號(hào)因試驗(yàn)中途退出，第2周期的尿液樣本缺失，6號(hào)第1周期因生理期未收集尿液樣本，其余志愿者均按照試驗(yàn)方案收集尿液樣本。志愿者靜脈滴注CME 250 mg和CMA 320 mg后24 h內(nèi)CPZ尿累積排泄率分別為55.30%±3.39%和56.22%±3.61%。平均尿累積排泄率-時(shí)間曲線見圖2。

表2血樣、尿樣中CPZ的精密度

圖1受試者單次、多次靜脈滴注CME/CMA后CPZ平均血藥質(zhì)量濃度-時(shí)間曲線(n=11)

Fig.1 Mean plasma concentration(μg·mL-1)-time(h) curve of CPZ after single and multiple intravenous drip of CME/CMA(n=11)

圖2志愿者單次靜脈滴注CME和CMA后尿中CPZ平均累積排泄率-時(shí)間曲線(n=11)

Fig.2 Mean urine cumulative excretion rate(%)-time(h) curve of CPZ after single intravenous drip of CME and CMA(n=11)

3.4藥動(dòng)學(xué)參數(shù) 11名志愿者單次和多次靜脈滴注CME 250 mg和CMA 320 mg后CPZ的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表3。

表3CPZ的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

注：—表示未檢測(cè)到數(shù)據(jù)。

3.5統(tǒng)計(jì)分析

3.5.1單次與多次給藥比較 與單次給藥比較，連續(xù)多次靜滴CME或CMA后主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(lnAUC0～t、lnAUC0～∞、lnCmax、V、CL、t1/2和MRT0～t)間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且谷濃度低于定量下限，表明CME或CMA多次給藥后無(wú)藥物蓄積，多次給藥不改變其體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過(guò)程。

3.5.2CME與CMA比較 CME和CMA單次或多次給藥后主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(lnAUC0～t、lnAUC0～∞、lnCmax、V、CL、t1/2和MRT0～t)間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。單次給藥后尿累積排泄率在不同酸根間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

4 討論

與單次給藥相比，連續(xù)多次給藥后CPZ的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且多次給藥后谷濃度樣本中未檢測(cè)出CPZ，提示多次給藥不影響CPZ的代謝消除，無(wú)藥物蓄積。CME與CMA單次與多次給藥后的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，單次給藥后CPZ尿累積排泄率在不同酸根間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示CME與CMA在人體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為相似。

5 結(jié)論

甲磺酸桂哌齊特與馬來(lái)酸桂哌齊特單次與多次給藥后在人體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為相似，連續(xù)多次給藥，體內(nèi)無(wú)蓄積。

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