王騰達(dá)，馬　超，張力卜，李佳浩，段小莉，王佰濤，徐　軍，陳　昶

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 植物保護(hù)研究所，北京中保綠農(nóng)科技集團(tuán)有限公司，北京　100193）

1984年，美國Merk公司對阿維菌素的4"-(α-1-齊墩果糖基)-α-1-齊墩果糖上的羥基進(jìn)行了衍生化處理，得到了甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（emamectin benzoate）[1]。經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其具有較好的殺蟲和殺螨活性，遂作為一種新型高效抗生素類殺蟲殺螨劑加以利用。甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽，簡稱甲維鹽，以發(fā)酵產(chǎn)品阿維菌素B1為原料合成而得，含有B1a和B1b組分，通常B1a組分質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于90%。

甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽對鱗翅目害蟲幼蟲和螨類的活性極高，具有胃毒和觸殺作用。其通過增強(qiáng)抑制神經(jīng)遞質(zhì)（如谷氨酸鹽和氨基丁酸）的作用，使大量氯離子進(jìn)入神經(jīng)細(xì)胞，影響細(xì)胞功能，擾亂正常神經(jīng)傳導(dǎo)，使昆蟲癱瘓死亡[2]。

茚蟲威（indoxacarb）是由美國杜邦公司在1992年開發(fā)，并于2001年登記上市的二嗪類殺蟲劑[3]。

茚蟲威的作用機(jī)制與目前各類殺蟲劑作用機(jī)制均有差異，通過阻斷鈉通道，從而導(dǎo)致昆蟲運(yùn)動(dòng)失調(diào)、停止取食、麻痹并死亡。茚蟲威具有殺幼蟲和殺卵作用，對各齡期的幼蟲都有效，具有胃毒和觸殺作用。

茚蟲威有1個(gè)手性中心，存在S型和R型2種異構(gòu)體，其中僅S型異構(gòu)體有殺蟲活性，但開發(fā)的產(chǎn)品多為R、S型混合外消旋體[4]。

甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和茚蟲威復(fù)配，可以減緩害蟲、害螨的抗藥性發(fā)展速度，另外，茚蟲威起效慢、持效期長的特點(diǎn)可以和甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽起效迅速、持效期短的特點(diǎn)形成互補(bǔ)，提高了防治效果[5]。

甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和茚蟲威單劑的分析方法國內(nèi)已有報(bào)道[4,6]，但兩者復(fù)配制劑的高效液相色譜分析方法尚未見報(bào)道。本方法采用梯度洗脫，同時(shí)檢測12%甲維·茚蟲威水乳劑中2種有效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。方法較為快速、簡便，相對于等度洗脫，縮短了出峰時(shí)間，節(jié)約了成本。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1　有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定方法

1.1.1試劑和溶液

甲醇（色譜純）；氨水（分析純），北京試劑廠提供；水（新蒸2次蒸餾水）；甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽標(biāo)樣（≥99.0%）、茚蟲威標(biāo)樣（≥98.0%），中國農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院提供；12%甲維·茚蟲威水乳劑（2%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽＋10%茚蟲威），北京中保綠農(nóng)科技集團(tuán)有限公司生產(chǎn)。

1.1.2儀器

Waters E2695高效液相色譜儀；Waters 2489 UV/Visible檢測器；島津UV-1800紫外分光光度計(jì)；Waters Sunfire不銹鋼色譜柱（150 mm×4.6 mm），內(nèi)裝C18填充物，粒徑5μm；過濾器，濾膜孔徑為0.45μm。1.1.3色譜操作條件

流動(dòng)相A：甲醇；流動(dòng)相B：0.08%氨水溶液（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）。

梯度洗脫：0～6 min，80%A＋20%B（體積分?jǐn)?shù)，下同）；6～8 min，80%A→92%A；8～11 min，92%A；11～13 min，92%A→80%A。流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：5 μL；檢測波長：240 nm；柱溫：25℃。保留時(shí)間：茚蟲威約5.4 min；甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽B1b約10.1 min，B1a約10.9 min，色譜圖見圖1、圖2。

圖1　標(biāo)樣色譜圖

圖2　甲維·茚蟲威水乳劑色譜圖

1.1.4溶液配制

稱取甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽標(biāo)樣約0.025 g（精確至0.000 2 g）、茚蟲威標(biāo)樣0.125 g（精確至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，加入40 mL甲醇，超聲15 min至標(biāo)樣完全溶解，用甲醇稀釋至刻度，混勻制得標(biāo)樣溶液。

稱取約含甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽0.025 g、茚蟲威0.125 g的試樣，置于50 mL容量瓶中，加入40 mL甲醇，超聲15 min至樣品完全溶解，用甲醇稀釋至刻度，混勻制得試樣溶液。

1.1.5測定

在1.1.3所述的色譜條件下，平衡色譜柱，待檢測器基線穩(wěn)定后，連續(xù)進(jìn)數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針相對響應(yīng)值。待相鄰2針響應(yīng)值變化小于1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

1.1.6計(jì)算

試樣中的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（或茚蟲威）質(zhì)量分?jǐn)?shù)w1（%）按式（1）進(jìn)行計(jì)算。

式中：A1—標(biāo)樣溶液中甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（或茚蟲威）色譜峰面積的平均值；A2—試樣溶液中甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（或茚蟲威）色譜峰面積的平均值；m1—甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（或茚蟲威）標(biāo)樣的質(zhì)量（g）；m2—試樣的質(zhì)量（g）；P—標(biāo)樣中甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（或茚蟲威）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）。

1.2　S-茚蟲威的測定

1.2.1試劑和溶液

正己烷、異丙醇、乙醇（色譜純）；水（新蒸2次蒸餾水）；S-茚蟲威標(biāo)樣（≥81.0%），中國農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院提供。

1.2.2儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀，具可變波長紫外檢測器；Agilent色譜工作站；色譜柱：不銹鋼柱（250 mm×4.6 mm），內(nèi)裝CHIRALCEL OD-H填充物，粒徑5 μm。

1.2.3色譜操作條件

檢測波長：285 nm；流動(dòng)相：V（異丙醇）∶V（乙醇）∶V（正己烷）=30∶10∶60；流速：0.8 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：25℃。保留時(shí)間：R-茚蟲威約8.4 min，S-茚蟲威約10.9 min。典型色譜圖見圖3、圖4。

圖3　S-茚蟲威標(biāo)樣液相色譜圖

圖4　試樣液相色譜圖

1.2.4溶液的配制

稱取S-茚蟲威標(biāo)樣約0.010 g（精確至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，先用適量乙醇溶解，再用流動(dòng)相稀釋至刻度，混勻制得標(biāo)樣溶液。

稱取約含S-茚蟲威0.010 g的試樣于50 mL容量瓶中，先用乙醇溶解，再用流動(dòng)相稀釋至刻度，混勻制得試樣溶液。

1.2.5測定

在1.2.3色譜條件下，平衡色譜柱，待檢測器的基線穩(wěn)定后，連續(xù)進(jìn)數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針相對響應(yīng)值。待相鄰2針響應(yīng)值變化小于1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

1.2.6計(jì)算

試樣中S-茚蟲威的比例K，按式（2）計(jì)算。

式中：AS—試樣溶液中S-茚蟲威峰面積的平均值；AR—試樣溶液中R-茚蟲威峰面積的平均值。

試樣中S-茚蟲威質(zhì)量分?jǐn)?shù)w2（%）按式（3）計(jì)算。

2　結(jié)果分析與討論

2.1　檢測波長的選擇

對甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和茚蟲威標(biāo)樣溶液分別進(jìn)行紫外掃描，獲得二者的紫外光譜圖（圖5）。在240 nm波長條件下，2種有效成分均有較強(qiáng)吸收，且雜質(zhì)響應(yīng)值小，流動(dòng)相無吸收。因此，綜合考慮多種因素，最終選定240 nm作為檢測波長。

圖5　紫外吸收譜圖

2.2　流動(dòng)相的選擇

在甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、茚蟲威質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測中，最初選定以甲醇＋氨水溶液（體積比80∶20）為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽出峰時(shí)間較長，且峰形不佳。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)以甲醇＋氨水作為流動(dòng)相，采取1.1.3中的梯度洗脫程序，可以縮短甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽的出峰時(shí)間，且色譜峰峰形尖銳，可滿足分析要求。

在S-茚蟲威檢測中，采用不同體積比的異丙醇＋乙醇＋正己烷作為流動(dòng)相對試樣進(jìn)行分離檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，異丙醇、乙醇和正己烷三者體積比為30∶10∶60時(shí)，分離效果最好，出峰時(shí)間短，且色譜峰尖銳。

2.3　分析方法的線性關(guān)系

稱取一定質(zhì)量的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和S-茚蟲威標(biāo)樣，使用梯度稀釋的方法配制不同質(zhì)量濃度的標(biāo)樣溶液，在1.1.3色譜操作條件下測定相應(yīng)響應(yīng)值。以標(biāo)樣溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和S-茚蟲威的線性方程。甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽線性方程為y=8 586.8 x-76 916，相關(guān)系數(shù)為0.999 9；S-茚蟲威線性方程為y=5 602.0 x-304 240，相關(guān)系數(shù)為0.999 5。表明方法線性關(guān)系良好（見圖6、圖7）。

2.4　分析方法的精密度

在上述色譜操作條件下，對同一12%甲維·茚蟲威水乳劑進(jìn)行5次重復(fù)測定。甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和S-茚蟲威的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.046和0.130，變

異系數(shù)分別為2.07%和1.20%，結(jié)果見表1。

圖6　甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽線性關(guān)系圖

圖7　S-茚蟲威線性關(guān)系圖

表1　方法精密度測定結(jié)果

2.5　分析方法的準(zhǔn)確度

稱取5個(gè)已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的12%甲維·茚蟲威水乳劑樣品，分別加入一定量的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、S-茚蟲威標(biāo)樣，分別測定其中的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和S-茚蟲威總質(zhì)量，并計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和S-茚蟲威的平均回收率分別為100.34%和99.85%。

表2　方法回收率測定結(jié)果

3　結(jié)論

本文建立了同時(shí)對樣品中甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和茚蟲威進(jìn)行檢測的方法，具有較高的準(zhǔn)確度和精密度。通過梯度洗脫，節(jié)約了檢測成本，同時(shí)縮短了檢測時(shí)間，可以用于產(chǎn)品的質(zhì)量檢測。

[1]陳鐵春,李國平,趙永輝.農(nóng)藥分析手冊[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2012:105.

[2]畢富春,趙建平.甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽對主要害蟲藥效概述[J].現(xiàn)代農(nóng)藥,2003,2(2):34-36.

[3]李富根,艾國民,李友順,等.茚蟲威的作用機(jī)制與抗性研究進(jìn)展[J].農(nóng)藥,2013,52(8):558-559.

[4]徐強(qiáng),劉奎濤,湯飛榮,等.15%茚蟲威懸浮劑的液相色譜分析[J].現(xiàn)代農(nóng)藥,2010,9(1):31-32;35.

[5]周承松,劉小琴,姚文.20%甲維鹽·茚蟲威防治稻縱卷葉螟藥效試驗(yàn)[J].福建農(nóng)業(yè)科技,2011(2):53-54.

[6]畢富春,吳國旭.甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽高效液相色譜分析方法研究[J].現(xiàn)代農(nóng)藥,2005,4(4):17-19.