張青，劉益飛，張曙，章建國

(南通大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇南通 226001)

Nocth信號通路是近幾年研究的熱點(diǎn)，其主要由細(xì)胞膜配體、受體和下游分子組成。已有研究證實(shí)，Nocth信號通路在腫瘤發(fā)生、胚胎發(fā)育及血管損傷修復(fù)中具有重要作用[1，2]。Notch信號通路中的Notch受體蛋白是目前研究的熱點(diǎn)，但其在肺腺癌中的作用鮮見報道。本研究觀察了Notch2在肺腺癌組織的表達(dá)變化，并探討其在肺腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1　資料與方法

1.1臨床資料選取南通大學(xué)附屬醫(yī)院病理科2010年1月～2011年12月保存的肺腺癌及其配對癌旁正常肺組織(距離腫瘤邊緣>2 cm)石蠟標(biāo)本各130例份，均經(jīng)HE染色后病理確診，患者術(shù)前均未進(jìn)行放化療、中藥及免疫治療等。130例肺腺癌患者中男62例，女68例；年齡41～83歲、平均61歲，<61歲69例、≥61歲61例；腫瘤最大徑<3 cm 64例，≥3 cm 66例；分化程度：高分化32例，中分化65例，低分化33例；TNM分期：Ⅰ期45例，Ⅱ期40例，Ⅲ期33例，Ⅳ期12例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移51例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移79例。本研究通過醫(yī)院倫理委員會審核，患者及家屬均知情同意。

1.2癌組織及其癌旁組織Notch2蛋白表達(dá)檢測采用免疫組化法。將癌組織及其癌旁組織石蠟標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛固定24 h，常規(guī)4 μm厚切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水；抗原修復(fù)儀中99 ℃條件下修復(fù)22 min，0.3% H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，滴加一抗(1∶250)，4 ℃冰箱過夜；次日取出復(fù)溫，滴加生物素化的兔抗山羊二抗IgG，室溫孵育30 min，PBS沖洗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，鹽酸乙醇分化，脫水封片。以已知的陽性切片作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。Notch2陽性染色定位于細(xì)胞質(zhì)，采用半定量積分法對染色結(jié)果進(jìn)行判斷，每張切片在高倍鏡下隨機(jī)選取10個視野，每個視野計數(shù)200個細(xì)胞。根據(jù)染色強(qiáng)度為無色或淡黃色、黃色、棕黃色和深黃色分別記為0、1、2、3分，根據(jù)每個視野200個細(xì)胞中陽性細(xì)胞比例為0～25%、26%～50%、51%～75%和>75%分別記為1、2、3、4分。將染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞比例得分的乘積作為最終評分，≤6分為陰性，>6分為陽性。由南通大學(xué)附屬醫(yī)院病理科兩名主治以上醫(yī)師采用雙盲法判斷結(jié)果。收集130例患者的臨床病理參數(shù)，術(shù)后隨訪至2016年12月31日，繪制Kaplan-Meier生存曲線，記錄患者3年及5年生存率，分析肺腺癌組織Notch2蛋白表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。

2　結(jié)果

2.1癌組織及其癌旁組織Notch2陽性表達(dá)比較癌組織及其癌旁組織Notch2陽性表達(dá)率分別為54.6%(71/130)、36.2%(47/130)，二者比較P<0.05。

2.2癌組織Notch2表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系癌組織Notch2陽性表達(dá)率與腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)(P均<0.05)，與患者性別、年齡及腫瘤直徑無關(guān)(P均>0.05)。見表1。

表1　　　　癌組織Notch2表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]

2.3癌組織Notch2表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系130例肺腺癌患者中位生存時間為46個月。Notch2陽性表達(dá)者3年生存率為57.3%、5年生存率為14.1%，Notch2陰性表達(dá)者分別為84.7%、40.0%，Notch2陽性表達(dá)者3年及5年生存率均低于Notch2陰性表達(dá)者(P均<0.05)。

3　討論

1917年，Notch基因被美國著名遺傳學(xué)家Thomas首次發(fā)現(xiàn)，由于其基因突變可以引起果蠅出現(xiàn)殘翅的現(xiàn)象，因此命名為Notch。Notch基因編碼的蛋白屬為單次Ⅰ型跨膜蛋白，為高度保守的細(xì)胞表面受體，分子質(zhì)量約為300 kb。Notch基因在細(xì)胞膜上主要以異二聚體的形式進(jìn)行表達(dá)，通過受體與相應(yīng)配體結(jié)合形成信號通路來調(diào)控細(xì)胞增殖和凋亡[3]。目前，在哺乳動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)4種Notch受體(Notch 1～Notch 4)及5種相應(yīng)配體(DLL-1、DLL-3、DLL-4和Jagged-1、Jagged-2)[4]。已有研究證實(shí)，Notch信號通路可以在胚胎發(fā)育、血細(xì)胞形成、腫瘤發(fā)生等生理病理過程中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，Notch信號通路與其他信號通路不同，不需要第二信使及蛋白激酶的參與，其調(diào)節(jié)作用主要在細(xì)胞分化過程中進(jìn)行，從而影響組織發(fā)生變化。因此，Notch信號通路往往表現(xiàn)為雙重性，可以根據(jù)腫瘤細(xì)胞的不同類型和生長環(huán)境的差異發(fā)揮促癌或者抑癌基因作用，從而影響腫瘤患者的預(yù)后[4～6]。

Notch2是Notch信號通路中重要的受體蛋白，當(dāng)Notch2受體與其配體結(jié)合后，暴露TACE金屬蛋白酶切位點(diǎn)，經(jīng)過酶切作用后釋放出胞內(nèi)域NICD；NICD進(jìn)入細(xì)胞核后與轉(zhuǎn)錄抑制因子CSL/CBF1結(jié)合，活化Hes等特定基因的轉(zhuǎn)錄，從而進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)精確調(diào)控，進(jìn)而影響細(xì)胞凋亡、增殖和分化[3,7,8]。Notch2在不同腫瘤中發(fā)揮的作用不同。在乳腺癌、胰腺癌、腎透明細(xì)胞癌中，Notch2可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移[9～11]；在甲狀腺髓樣癌、結(jié)直腸癌中Notch2起到抑制腫瘤發(fā)生、發(fā)展的作用[12，13]；在肝細(xì)胞癌中Notch2在癌組織及正常肝組織中的表達(dá)水平總體一致，沒有出現(xiàn)明顯差異[14]。Notch2在淋巴瘤組織中的表達(dá)情況也存在一定的差異，Notch2在B細(xì)胞淋巴瘤及NK/T細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)明顯高于其他類型的T細(xì)胞淋巴瘤[15]。針對這一特殊現(xiàn)象，有學(xué)者對大鼠早期肺發(fā)育過程中Notch2的作用進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)Notch2廣泛存在于肺泡上皮細(xì)胞、間質(zhì)成纖維細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞，其主要通過調(diào)控肺泡上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖來維持肺功能[16]。已有研究證實(shí)，Notch2在肺鱗形細(xì)胞癌中起到促進(jìn)癌癥發(fā)生的作用，但其在肺腺癌中的具體作用鮮見報道。本研究結(jié)果顯示，肺腺癌組織石蠟標(biāo)本中Notch2陽性表達(dá)率均明顯高于癌旁正常肺組織，說明Notch2參與了肺腺癌的發(fā)生。本研究結(jié)果顯示，肺腺癌組織石蠟標(biāo)本中Notch2陽性表達(dá)率與患者的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，且Notch2陽性表達(dá)者3年及5年生存率均低于Notch2陰性表達(dá)者，說明Notch2表達(dá)升高可能參與了肺腺癌的進(jìn)展，并提示患者預(yù)后不良。

綜上所述，肺腺癌組織Notch2表達(dá)升高；Notch2表達(dá)升高可能參與了肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展，并提示患者預(yù)后不良。Notch2在肺腺癌發(fā)生的過程中起到促癌基因作用，特異性抑制Notch2蛋白可能成為肺腺癌的一個治療靶點(diǎn)，但是Notch2的作用機(jī)制仍需深入探討。

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