膝痹膏摩法對膝骨性關節(jié)炎兔血清IL-6、IL-1β、TNF-α水平的影響

擺 雪，劉俊昌,，王新軍,*，孫 蕓，張洪平,，馬鑫文，辛春光

（1.新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，烏魯木齊 830000；2.新疆醫(yī)科大學，烏魯木齊 830011）

1.4 指標檢測及方法

1.4.1 步態(tài)觀察 采用David Coderre法步態(tài)分級評價[10]：Ⅱ級：行走時間＜3 min，中度跛行；I級：行走時間3～5 min，輕微跛行； 0級：行走時間＞5 min，正常行走。

1.4.2 IL-6、IL-1β和TNF-α檢測 給藥干預8周，末次給藥的第二天取樣，經耳緣靜脈取血4 mL，3 000 r/min，離心10 min后，取上清液，用無菌EP管分裝好后置于- 20 ℃冰箱保存，待檢，嚴格按試劑盒說明書采用ELISA法測試血清中IL-6、IL-1β和TNF-α 含量。

1.5 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計量數據采用均數±標準差（±s）表示，各組間比較采用ANOVA，各組間兩兩比較采用LSD-t。

2 結果

2.1 一般情況 正常組：兔膝關節(jié)內外側間隙較明顯，關節(jié)面光滑且平整，關節(jié)軟骨色澤透明；模型組：兔膝關節(jié)內側間隙明顯變窄，關節(jié)面凹凸不平，邊緣可見增生肥厚的軟骨組織和部分剝脫凹陷，滑膜與關節(jié)軟骨有少許黏連；干預組：兔膝關節(jié)內外側間隙較模型組明顯，關節(jié)軟骨大體觀察呈淡藍透明白色，關節(jié)表面平整光滑，軟骨與滑膜無黏連，滑膜表面光滑。

2.2 IL-6、IL-1β和TNF-α檢測結果 運用單因素方差分析（ANOVA）統(tǒng)計各組白兔實驗后血清中IL-6、IL-1β 和 TNF-α濃度。

各組IL-6濃度平均數值為模型組＞膝痹膏低濃度組＞手法組＞膝痹膏高濃度組＞正常組＞膝痹膏中濃度組，通過方差分析，F =12.835，P=0.000。用LSD-t進行兩兩比較分析，得出正常組與模型組比較，P =0.000，膝痹膏中濃度組與模型組比較，P=0.000，膝痹膏高濃度、低濃度和手法組與模型組比較，P=0.000，表明正常組、膝痹膏高濃度、低濃度、中濃度組、手法組與模型組差異皆有統(tǒng)計學意義，其中膝痹膏中濃度組IL-6濃度明顯低于高濃度、低濃度和手法組（P＜0.05），而高濃度、低濃度和手法組之間不能認為有差異（如圖1）。

圖1 各組血清IL-6檢測結果（μg/L）

各組IL-1β濃度平均數值為模型組＞手法組＞膝痹膏高濃度組＞膝痹膏低濃度組＞正常組＞膝痹膏中濃度組，通過方差分析，F=14.201，P=0.000，P＜0.05。用LSD-t進行兩兩比較分析,得出正常組與模型組比較，P=0.000，膝痹膏中濃度組與模型組比較，P=0.000，膝痹膏高濃度、低濃度和手法組與模型組比較，P =0.000，表明正常組、膝痹膏高濃度、低濃度、中濃度組、手法組與模型組的差異皆有統(tǒng)計學意義，其中膝痹膏中濃度組IL-1β濃度明顯低于高濃度、低濃度和手法組（P＜0.05），而高濃度、低濃度和手法組之間不能認為有差異（如圖2）。

圖2 各組血清IL-1β檢測結果（μg/L）

各組TNF-α濃度平均數值為模型組＞手法組＞膝痹膏高濃度組＞膝痹膏低濃度組＞膝痹膏中濃度組＞正常組，統(tǒng)計學上通過方差分析，P＜0.05。用LSD-t進行兩兩比較分析,得出正常組與模型組比較，P =0.000，膝痹膏中濃度組與模型組比較，P=0.000，膝痹膏高濃度、低濃度和手法組與模型組比較，P=0.000，表明正常組、膝痹膏高濃度、低濃度、中濃度組、手法組與模型組的差異皆有統(tǒng)計學意義，其中膝痹膏中濃度組IL-1β濃度明顯低于高濃度、低濃度和手法組（P＜0.05），而高濃度、低濃度和手法組之間不能認為有差異（如圖3）。

圖3 各組血清TNF-α檢測結果（μg/L）

說明膝痹膏高濃度、中濃度、低濃度和手法組都能降低膝痹兔血清中的IL-6、IL-1β和TNF-α濃度,且膝痹膏中濃度組IL-6、IL-1β和TNF-α濃度含量明顯低于模型組。

3 討論

膝骨性關節(jié)炎屬于祖國醫(yī)學中的“膝痹”范疇。祖國醫(yī)學認為，本病的發(fā)生多由于肝腎不足，精血虧損，風寒濕邪侵入骨骼，以致瘀滯經絡，運行失暢，不通則痛；現代醫(yī)學認為：本病的病理表現主要是關節(jié)軟骨發(fā)生退行性改變，骨質增生、軟骨基質降解、關節(jié)軟骨受損是其病理演變的關鍵[11]。大量研究發(fā)現，膝骨性關節(jié)炎的病變程度與IL-6、IL-1β和TNF-α的含量有關，炎性細胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α是骨性關節(jié)炎發(fā)病過程中的重要介質，其中分解代謝因子IL-1β和TNF-α能夠促進細胞外基質的降解，也能抑制軟骨細胞內蛋白多糖和Ⅱ型膠原的合成[12]；IL-6是單核吞噬細胞等在IL-1、TNF-α等誘導下產生的一種細胞因子，IL-6作為炎癥介質又可以增強TNF-α在關節(jié)疾病中的作用[13]。TNF-α能夠促使滑膜成纖維樣細胞增殖，使得滑膜組織纖維樣變，并且增加滑液中細胞因子[14]。IL-1是最經典的炎癥調節(jié)的始動因素，其IL-1β能促進軟骨細胞凋亡，降解軟骨細胞基質，直接干預滑膜和骨的代謝發(fā)生病變[15]。IL-1β對膝骨性關節(jié)炎的主要作用表現為：促進I、Ⅲ型膠原蛋白的合成；抑制透明軟骨特征性Ⅱ、Ⅸ型膠原蛋白的合成；還能促進軟骨細胞分泌金屬蛋白酶，從而提高蛋白分子酶類的活性，進而對關節(jié)軟骨進行降解[16-18]。大量研究證實：骨性關節(jié)炎的破壞可以被IL-1β、IL-6、TNF-α的選擇性抗體、細胞因子受體拮抗蛋白、可溶性或轉移性細胞因子受體的分子所修復，因此說明骨性關節(jié)炎的破壞與IL-1β、IL-6、TNF-α 的作用密切相關[19-20]。本實驗用ELISA實驗檢測模型組中IL-6、IL-1β和TNF-α的含量，均較高，說明IL-6、IL-1β和TNF-α在骨性關節(jié)炎中起主要調控作用，能夠介導骨性關節(jié)炎炎癥的發(fā)生。

膝痹膏摩法為新疆醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院推拿科治療膝關節(jié)骨性關節(jié)炎的經驗方法，該方法是方藥與推拿手法的完美結合，臨床研究中發(fā)現：該方法能夠緩解膝關節(jié)疼痛和改善功能活動度，在臨床上治療膝骨性關節(jié)炎療效顯著[21]。課題組在前期的實驗研究中亦發(fā)現，膝痹膏摩可以減輕膝骨性關節(jié)炎大鼠關節(jié)軟骨基質的破壞及關節(jié)病損[22]。

本課題研究結果表明：膝痹膏中濃度配合推拿手法即“膝痹膏摩法”最有效地降低IL-6、IL-1β和TNF-α濃度；膝痹膏高濃度可能因為藥物含量太高，凡士林羊毛脂的透皮吸收受到抑制。因此得出膝痹膏摩法能夠抑制膝骨性關節(jié)炎軟骨基質降解和關節(jié)軟骨的破壞，從而延緩關節(jié)軟骨的退變，其中膝痹膏中濃度摩法在降低血清中IL-6、IL-1β和TNF-α療效顯著。

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