溫福利

(南京軍區(qū)福州總醫(yī)院比較醫(yī)學科, 福州 350025)

我國是養(yǎng)兔大國, 兔不僅是重要的經(jīng)濟動物，也是最早用于實驗的動物之一[1]。實驗兔是現(xiàn)代科學研究的一個重要載體，在熱源試驗中廣泛應用。

兔球蟲病(coccidiosis)是一種最常見病，飲食是兔球蟲的主要傳播途徑。離乳至3月齡的幼兔極易感染球蟲，死亡率達50%以上，混合感染死亡率可達90%[2,3]。使用抗球蟲藥物和環(huán)境衛(wèi)生消毒是預防兔球蟲病的主要手段，日常不當?shù)娘曫B(yǎng)管理也是誘發(fā)兔球蟲病的重要因素[4]。福建省實驗兔的使用量約7 000只/年，其中福州市和廈門市的醫(yī)療、教育、科研單位較多，使用量較大。陳冬金等[5]于2012～2013年對福建省家兔球蟲病感染情況進行了調(diào)查，但未見我省關(guān)于實驗兔球蟲方面的報道。本文對福建省6個地級市2家實驗兔生產(chǎn)企業(yè)和12家使用單位進行了球蟲感染情況的調(diào)查，為我省實驗兔球蟲病防治提供了具有一定參考價值的基礎數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品的采集

采集的糞樣分別來自福建省福州市、廈門市、泉州市、龍巖市、南平市、寧德市6個地區(qū)的14家具有實驗兔生產(chǎn)或使用許可證的單位。糞樣用干凈的自封袋分裝，標明單位、品種、月齡、級別、編號等信息，糞樣用保溫箱帶回實驗室，置于4℃冰箱備查。

1.2 主要試劑、儀器

光學顯微鏡(DM2000，Leica)、麥克馬斯特計數(shù)板(10 mm×10 mm×1.5 mm, 上海潤友科技有限公司)、氯化鈉(分析純, 500 g, 西隴科學股份有限公司)、定制的鋼絲圈糞篩(120目, 福州金泰林生物科技有限公司)、蓋玻片(24 mm×40 mm, 江蘇世泰實驗器材有限公司)、載玻片(25 mm×75 mm,江蘇世泰實驗器材有限公司)。

1.3 蟲卵收集與鑒定

采用飽和鹽水漂浮法進行卵囊收集。將富集后的兔球蟲卵囊置于2.5%的重鉻酸鉀溶液，然后轉(zhuǎn)至28 ℃溫箱中完成孢子化，48 h后將卵囊置于顯微鏡下，進行形態(tài)學觀察鑒定。

1.4 每克糞便中的蟲卵個數(shù)(OPG)測定

OPG值可反映兔球蟲的感染強度。取糞樣2 g置于100 mL燒杯, 加10 mL飽和鹽水, 將糞樣攪碎均勻, 加飽和鹽水至60 mL, 混勻。120目糞篩過濾后, 立即吸取濾液分別注入麥克馬斯特計數(shù)板的2個計數(shù)室(計數(shù)室的容積: 1 cm×1 cm×0.15 cm=0.15 cm3)，靜置5 min后在顯微鏡下(400×)觀察，記錄左右兩個計數(shù)室的卵囊總數(shù)(n1、n2)，OPG=[(n1+n2)/2÷0.15×60÷2)]。

1.5 數(shù)據(jù)處理

用Excel對所收集數(shù)據(jù)進行記錄, 用SPSS 20.0軟件對兔球蟲感染率進行卡方檢驗，OPG經(jīng)對數(shù)化后進行方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 福建省兔球蟲感染情況概述

本次調(diào)查共收集和分析了195個樣本，陽性樣本28個，總感染率為14.36%，OPG平均值(感染強度)為2 333.33。根據(jù)兔球蟲卵囊的形態(tài)學特征進行鑒定，共檢出10種兔球蟲，分別為小型艾美耳、斯氏艾美耳、梨形艾美耳、穿孔艾美耳、盲腸艾美耳、納格浦爾艾美耳、中型艾美耳、腸艾美耳、新兔艾美耳、長型艾美耳，均為混合感染，以斯氏艾美耳球蟲為優(yōu)勢蟲種(圖1)。

2.2 不同級別實驗兔球蟲感染情況

調(diào)查結(jié)果顯示，普通級實驗兔球蟲感染率為15.30%，OPG平均值為2 486.33。清潔級實驗兔未見球蟲感染(表1)。不同級別球蟲感染率差異有極顯著統(tǒng)計學意義(P=0.000)，OPG差異有極顯著統(tǒng)計學意義(P=0.000)。

2.3 不同月齡實驗兔球蟲感染情況

圖 1 福建省實驗兔球蟲種類Figure 1 The species of experimental rabbit coccidia in Fujian province

表 1 不同級別實驗兔球蟲感染情況Table 1 Prevalence and intensity of coccidia in experimental rabbits at different grades

調(diào)查結(jié)果顯示，幼兔球蟲檢出率最高，感染率為17.50%，OPG為805。青年兔感染率僅次于幼兔，但是感染強度最低，OPG平均值為126.92。成年兔感染率為11.65%，感染強度最高，OPG平均值為4 427.66(表2)。各月齡階段球蟲感染率差異不顯著(P=0.615)，OPG差異極顯著(P=0.000)。

2.4 不同品種實驗兔球蟲感染情況

調(diào)查結(jié)果顯示，新西蘭兔感染率為12.23%，OPG平均值為2 511.11。日本大耳白兔感染率為40%, 但其感染強度極低, OPG平均值為200(表3)。不同品種實驗兔球蟲感染率差異有統(tǒng)計學意義(P=0.032), OPG差異有極顯著統(tǒng)計學意義(P=0.000)。

2.5 不同類別單位實驗兔球蟲感染情況

調(diào)查結(jié)果顯示, 我省實驗兔生產(chǎn)企業(yè)感染率較高, 達22.22%, OPG平均值為111.11。生物制藥企業(yè)感染率次之(19.28%), 但OPG最高, 達5 678.39。醫(yī)療衛(wèi)生單位感染率為11.11%，OPG平均值為1 044.44。高等院校感染率為6.52%, OPG最低。檢驗檢疫單位實驗兔未檢測到球蟲感染(表4)。不同品種實驗兔球蟲感染率不差異顯著(P=0.209)，OPG差異極顯著(P=0.000)。

表 2 不同月齡實驗兔球蟲感染情況Table 2 Prevalence and intensity of coccidia in experimental rabbits with different age

表 3 不同品種實驗兔球蟲感染情況Table 3 Prevalence and intensity of coccidia in experimental rabbits with different species

表 4 不同類別單位實驗兔球蟲感染情況Table 4 Prevalence and intensity of rabbit coccidia in different categories of units

3 討論

實驗兔是約定俗成的一個名詞, 現(xiàn)已得到國內(nèi)科研人員的一致認可。我國實驗兔的品種主要有日本大耳白兔、新西蘭兔、青紫藍兔和中國白兔4種,其中新西蘭兔使用最為廣泛[6]。在地方品種資源中，浙江中醫(yī)藥大學實驗動物中心培育的白毛黑眼兔較為成功[7]。福建黃兔是國家級畜禽遺傳資源保護的地方品種，具有成為實驗用家兔新品種的開發(fā)價值[8]。福建中醫(yī)藥大學實驗動物中心對福建黃兔進行了相關(guān)研究, 但尚未完成實驗動物化過程[9-11]。本次調(diào)查結(jié)果顯示，新西蘭兔為我省使用量最大的實驗兔品種，其感染率約為日本大耳白兔的1/3，這可能與日本大耳白兔樣本采集量較少有關(guān)。

近年來，實驗兔使用量逐漸增加，實驗兔的質(zhì)量要求也越來越高，但少有關(guān)于實驗兔球蟲病的調(diào)查。周智君等[12]對湖南省3個縣實驗用家兔寄生蟲病的調(diào)查結(jié)果顯示，兔球蟲感染率為100%。宋鴻雁等[13]調(diào)查了江蘇省4個實驗兔場球蟲感染情況，兔球蟲感染率為100%，且均為混合感染。樵星芳等[14]對重慶市中藥研究院實驗兔場的實驗兔球蟲感染種類進行了調(diào)查。為更好地了解我省實驗兔球蟲感染情況，本文對福建省現(xiàn)有的2家實驗兔場進行了調(diào)查，球蟲的感染率低于前述省市(40%)，說明我省較為注重實驗兔球蟲病的防治工作。

在現(xiàn)行實驗動物國家標準中, 未有強制使用清潔級和SPF級實驗兔的相關(guān)規(guī)定，普通級實驗兔在藥品檢驗、科研試驗中應用廣泛[19]。兔球蟲病是一種極易感染傳播的常見寄生蟲病，兔感染后會出現(xiàn)消瘦、腹瀉、生長緩慢、免疫力下降等癥狀[3]。艾美耳球蟲的檢測在普通級實驗兔中不作要求，兔球蟲病在普通級實驗兔的質(zhì)量控制中易被忽視。本次調(diào)查結(jié)果顯示，我省使用的實驗兔大部分為普通級，清潔級使用量極少, 我省實驗兔生產(chǎn)企業(yè)也僅限于生產(chǎn)普通級實驗兔。對我省不同類別單位兔球蟲感染情況的調(diào)查結(jié)果顯示，普通級實驗兔已廣泛用于我省生命科學和醫(yī)學研究的眾多領域，生物制藥企業(yè)實驗兔球蟲感染強度最大(OPG達5 678.39)，感染率也較高。在醫(yī)院、高校等科研單位，實驗兔也存在一定程度的球蟲感染。為此，應進一步加強實驗兔球蟲病的監(jiān)測與防治，并建議將兔球蟲病納入國家標準中普通級實驗兔必要時的檢測項目，進一步提高實驗兔的質(zhì)量標準，更好地為科研、教學提供質(zhì)量合格的實驗兔，保障相關(guān)科研實驗數(shù)據(jù)的準確性。

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