黑老虎栽培技術(shù)及其混偽品鑒定研究進(jìn)展

楊銳培　王潔　王德勤

摘要綜述了近10 多年國內(nèi)外學(xué)者對(duì)黑老虎的栽培技術(shù)及其潛在混偽品的性狀鑒別、顯微鑒別、理化鑒別的研究進(jìn)展，為黑老虎的規(guī)范化種植與合理開發(fā)利用提供參考。

關(guān)鍵詞黑老虎； 生藥鑒定；混偽品；栽培技術(shù)

中圖分類號(hào)R282.71文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

A文章編號(hào)0517-6611（2018）08-0026-03

Research Advances in Culture Technique of Kadsura coccinea and Identification of Its Adulterants

YANG Ruipei1，WANG Jie2，WANG Deqin1 et al（1.Hutchison Whampoa Guangzhou Baiyunshan Chinese Medicine Co.，Ltd.，Guangzhou，Guangdong 510515；2.Shenzhen Peoples Hospital，Shenzhen，Guangdong 518020）

AbstractThe research results on Kadsura coccinea at home and abroad are reviewed in the fields of its culture technique，and the research advances in morphological identification，microscopic identification，physicochemical identification of its adulterants.It can provide reference for standardize planting and rational development and utilization of Kadsura coccinea.

Key wordsKadsura coccinea；Biological identification； Adulterants；Culture technique

黑老虎藥材基原為五味子科南五味子屬植物厚葉五味子Kadsura coccinea（Lem.） A.C.Smith的干燥根或異形南五味子K.heteroclita（Roxb.） Craib的干燥藤莖，又名飯團(tuán)藤、大血藤、黑老虎、人頭泡、冷飯薔、臭飯團(tuán)、酒飯團(tuán)，最早記載于《黃帝內(nèi)經(jīng)》[1-2]。據(jù)《中國植物志》[3]記載產(chǎn)于廣東、廣西、云南、貴州、江西等地，多分布于海拔1 500～2 000 m的林地，越南也有分布。黑老虎之名出自《嶺南采藥錄》，《廣西藥植名錄》稱之為血藤[4]。性味溫、辛、微苦，具有行氣活血、散瘀通絡(luò)之功效，主治腸胃性疾病以及風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛經(jīng)、產(chǎn)后瘀血腹痛等癥；其根、藤入藥，其提取物具有抗腫瘤、抗艾滋、抗肝炎、抗氧化和神經(jīng)保護(hù)等作用[5-9]。但目前研究主要集中在中藥化學(xué)和藥理學(xué)等方面[10-14]。

近年來，黑老虎的根作為強(qiáng)腰壯腎丸、舒筋健腰丸、舒筋風(fēng)濕酒和壯血片等的重要原料藥；其果實(shí)含豐富微量元素和氨基酸，具有抗氧化作用，可直接食用和開發(fā)飲料；其植株多做觀賞性植物，在國內(nèi)、外已開始通過提取和加工等多種手段開發(fā)美容和保健品，對(duì)黑老虎的需求越來越大[15]。由于過度采挖及其自身生長、繁育特性等原因，黑老虎野生資源臨近枯竭，產(chǎn)量難以滿足需求。另外，由于黑老虎果實(shí)作為水果經(jīng)濟(jì)價(jià)值要比挖根做藥材高出許多，受市場供求關(guān)系影響，黑龍虎作為藥材銷售較少，另外由于種苗質(zhì)量參差不齊，價(jià)格虛高，市場上藥材以假亂真的情況時(shí)有發(fā)生。石焱芳等[16]指出在廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)中黑老虎的來源應(yīng)為木蘭科植物厚葉五味子的干燥根，并且認(rèn)為現(xiàn)在市場上有大量稱之為黑老虎的藥材其實(shí)并非來源于同一科屬，而是產(chǎn)于越南、緬甸等國，還有少量來自我國各地。

黑老虎作為藥材時(shí)偽品暫未見報(bào)道，但從廣西玉林、廣東清平、江西樟樹等藥材市場上調(diào)研情況來看，多以黑風(fēng)藤等價(jià)格較便宜的藤類根部充當(dāng)黑老虎根作藥用，其與黑老虎的化學(xué)成分、藥理活性差異較大，使用不當(dāng)即可發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng)。故黑老虎的鑒別和栽培具有重要意義，現(xiàn)綜述中藥黑老虎及其潛在偽品鑒別和其栽培技術(shù)的研究進(jìn)展。

1鑒定研究

由于黑老虎可做藥材使用的資源不多，臨床需求量又非常大，市場混偽品時(shí)?？梢?。早在20 世紀(jì)90 年代就有學(xué)者關(guān)注黑老虎的鑒別研究，致力于規(guī)范藥材的來源，為保障市場藥材的質(zhì)量以及確保黑老虎臨床應(yīng)用的安全有效做出貢獻(xiàn)。

1994年，譚立英等[17]總結(jié)黑老虎藥材的性狀鑒別、組織鑒別（根和藤莖的橫切面）、藥材粉末鑒別和理化鑒別方法。張春輝等[18]在薄層鑒別的基礎(chǔ)上，又基于高效液相技術(shù)針對(duì)黑老虎中原兒茶酸建立了含量測定方法。王秀芹等[19]基于2015版中國藥典薄層色譜法建立黑老虎藥材的定性鑒別方法。同時(shí)，徐亮[11]利用日本南五木脂素A對(duì)照品對(duì)17批次的黑老虎進(jìn)行薄層鑒定和基于高效液相色譜法技術(shù)以日本南五木脂素 A、乙?；毡灸衔迥局?A、二氫愈創(chuàng)木脂素、kadsuralignan I對(duì)照品建立對(duì) 17 批不同產(chǎn)地黑老虎特征譜圖的檢測方法，還按照 2010 版《中國藥典》的相關(guān)要求測定黑老虎藥材中的浸出物、水分、灰分、重金屬和有害元素以及農(nóng)藥殘留等的含量，初步建立黑老虎的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1.1性狀鑒別

黑老虎[1，3，11]主根呈圓柱形，直徑1～5 cm。表面色澤黑褐或灰褐，常見多數(shù)縱皺紋和橫裂紋，皮孔橢圓形。質(zhì)地堅(jiān)韌，不容易被折斷，斷面呈粗纖維性，皮部為棕色，容易剝離。木質(zhì)部為淺棕色，可見放射狀導(dǎo)管小孔密布。氣微香，味微苦澀。

黑風(fēng)藤[17]為番荔枝科瓜馥木屬植物黑風(fēng)藤Fissisfigma polyanthum （Hook.f.et Thoms.） Merr.，民間以根和藤入藥。主根呈圓柱形，長20～60 cm，直徑2～8 cm，表面色澤灰黃或棕褐，體輕，質(zhì)地較硬，不容易折斷，斷面呈纖維性。切片為橢圓形的斜切片，厚1～2 cm，外皮色澤灰褐，皮厚2～3 mm，色澤棕，易與木質(zhì)部分離；木部色澤灰白，有放射狀紋理和密集小孔。氣微，味苦而澀。

黑老虎與黑風(fēng)藤的主要區(qū)別是黑老虎主根略為扭曲，直徑略小。側(cè)根上有許多須根。表面色澤為黑褐或灰褐，同時(shí)還可見多數(shù)縱皺紋和橫裂紋，彎曲處常裂成橫溝，具橢圓形皮孔。

1.2顯微鑒別

1.2.1黑老虎。黑老虎[14]藤莖橫切面：木栓層為4列細(xì)胞，皮孔明顯，栓內(nèi)層為4～8列細(xì)胞組成，常散有石細(xì)胞。中柱鞘部位可見少量石細(xì)胞，微木化的纖維群斷續(xù)成環(huán)。韌皮部窄，薄壁細(xì)胞含有少量的石細(xì)胞，形成層明顯。木質(zhì)部射線寬廣；導(dǎo)管散在，類圓形，直徑39～195 μm。髓部發(fā)達(dá)，由較大的薄壁細(xì)胞組成，并散有石細(xì)胞。

黑老虎[11，14]藥材粉末鑒別：本品粉末介于紅棕色和黑褐色之間。纖維單一或成束，草酸鈣小方晶密布在纖維壁中，構(gòu)成嵌晶纖維，直徑為20 ～80 μm。多破碎的網(wǎng)紋導(dǎo)管和具緣紋孔導(dǎo)管，直徑為30～50 μm。淀粉粒單粒或復(fù)粒。石細(xì)胞類方形或橢圓形，偶有嵌晶，壁孔明顯。

1.2.2黑風(fēng)藤。

黑風(fēng)藤[20]莖橫切面：表皮細(xì)胞1 列，長方形，棕黃色，小莖有非腺毛。皮層細(xì)胞5～10列，長圓形，棕黃色，部分細(xì)胞間有空隙。韌皮部為披針形，韌皮射線由內(nèi)向外漸寬，薄壁細(xì)胞可見棕黃色分泌物質(zhì)。木質(zhì)部寬廣，約為莖的2 /3，木射線細(xì)胞1～3 列，長方形，導(dǎo)管單或幾個(gè)相連，呈放射狀分布，直徑36～156 μm。射線細(xì)胞散有草酸鈣小方晶。髓部小，由圓形或多角形薄壁細(xì)胞組成。

黑風(fēng)藤[21]藥材粉末：本品粉末呈淡黃色。纖維成束或分離，韌皮纖維壁較厚，微木化，直徑20～36 μm；木纖維壁較薄，木化，胞腔較大。具緣紋孔導(dǎo)管，淡黃色，直徑23～126 μm。草酸鈣方晶散在或分布在細(xì)胞中，直徑15～26 μm。非腺毛細(xì)胞2～6 個(gè)。石細(xì)胞方圓形或不規(guī)則形，孔溝明顯。

1.3理化鑒別

1.3.1顯色鑒別[17]。

取樣品粉末1 g，加蒸餾水10 mL，混勻，浸泡30 min，濾過，備用。另取試管2只，各取濾液l mL，一只滴入三氯化鐵試液3～5滴；另一只滴入碘化秘鉀試液5滴。黑老虎供試品溶液遇三氯化鐵試液有棕色沉淀生成，遇碘化秘鉀試液有紅棕色沉淀生成，而黑風(fēng)藤無此特征性反應(yīng)。

1.3.2泡沫鑒別 [17]。取樣品粉末1 g，加蒸餾水10 mL浸泡30 min，濾過；取濾液2 mL，置于試管內(nèi)，用力激烈振搖，黑老虎供試品溶液會(huì)有大量泡沫生成，并且在2 h內(nèi)不會(huì)消失，而黑風(fēng)藤無此特征性反應(yīng)。

1.3.3薄層色譜鑒別。

方法1[12，18-19]。取樣品粉末各1 g，加甲醇20 mL，超聲處理 30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?20 mL 使其溶解，再用氯仿振搖提取2次，每次 30 mL，合并氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状?2 mL使溶解，再加在中性氧化鋁柱（100～200 目，4 g，內(nèi)徑約 1.5 cm）上，用甲醇 30 mL 洗脫，收集甲醇洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?0.5 mL 使溶解，作為供試品溶液備用。取黑老虎對(duì)照藥材 1 g，同法處理后作為對(duì)照藥材溶液。薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述 3 種溶液 5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠 G 薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（7∶12∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴 5 %香草醛硫酸溶液，在 105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。黑老虎供試品溶液與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置有相同的紫紅色斑點(diǎn)，而黑風(fēng)藤供試品色譜中無此特征斑點(diǎn)。

方法2[22]。取樣品粉末各1 g，加甲醇30 mL，超聲處理1 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取黑風(fēng)藤對(duì)照藥材1 g，同法處理后作為對(duì)照藥材溶液。薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5～10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，展開劑為石油醚─甲酸乙酯─甲酸（15∶5∶0.4），展開，取出，晾干，再置于紫外燈（365 nm）下檢視，黑風(fēng)藤供試品溶液與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置有相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而黑老虎供試品色譜中無此特征斑點(diǎn)。

1.4黑老虎與其混偽品黑風(fēng)藤之間通用的可行性

廣州白云山和記黃埔中藥有限公司黑老虎主要作為強(qiáng)腰壯腎丸、舒筋健腰丸的重要原料藥，而在現(xiàn)行局頒標(biāo)準(zhǔn)中，對(duì)壯腰健腎丸的含量測定方法是對(duì)原兒茶醛、原兒茶酸進(jìn)行測定[18-19]。關(guān)于黑老虎和黑風(fēng)藤的藥材質(zhì)量研究較少，其中黑老虎收載在《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》《中華本草》和《廣西瑤族習(xí)用藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》，而黑風(fēng)藤還沒有法定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[22]。大量的文獻(xiàn)調(diào)研顯示，原兒茶酸和原兒茶醛是黑老虎、金毛狗脊、桑寄生、雞血藤和金櫻子等藥材的共有成分，而黑風(fēng)藤中暫未發(fā)現(xiàn)原兒茶酸和原兒茶醛[23-24]。市面上由于黑風(fēng)藤價(jià)格較黑老虎價(jià)格低，時(shí)有用其根冒充黑老虎藥材使用的情況，但從來源、性味、功效、化學(xué)成分和藥理作用等多個(gè)角度分析，二者區(qū)別較大，其通用可行性和鑒別方法有待進(jìn)一步深入研究。

2栽培技術(shù)研究

2.1種苗繁殖技術(shù)

吳智濤[26]指出黑老虎育苗方式有實(shí)生育苗、嫁接育苗、扦插育苗和壓條育苗4種，其中后2種相對(duì)其他技術(shù)要求高，根系也稍差；而采用種子育苗的苗木根系較發(fā)達(dá)，環(huán)境的適應(yīng)能力更強(qiáng)，移栽成活率更高。若選用嫁接育苗技術(shù)時(shí)可用黑老虎和漲風(fēng)藤（Kadwura heteroclite）的實(shí)生苗為砧木。

黑老虎在實(shí)際生產(chǎn)中多以種子育苗為主，但由于其喜濕，故而在生態(tài)環(huán)境濕度大的條件下，更有利于種子萌發(fā)、幼苗生長。同時(shí)其根系淺，不耐瘠，要求種植在地勢(shì)平緩、土層厚、保水保肥、質(zhì)地疏松、排水優(yōu)良的砂質(zhì)壤土中。龍世林等[25]對(duì)黑老虎的單株雌花占比率調(diào)查指出其為雌雄同株單性花常綠植物，其調(diào)查結(jié)果與吳智濤[26]的冷飯團(tuán)雌雄花比例約為1∶4相符。

趙艷等[27]分析不同種子處理效果指出0.5 % CaCl2+50 μg/mg GA混合溶液浸種能較好地提高出苗率，使出苗整齊、健壯，出苗率比40 ℃的溫水浸泡對(duì)照提高8 %。尹艾萍等[28]針對(duì)不同種源的黑老虎實(shí)生容器苗制定其苗木分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，指出相同培育條件下不同種源的苗木藤高、地莖存在極顯著差異，因而在不同地區(qū)苗木標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)有所不同。

2.2營養(yǎng)生理

在黑老虎的野生居群生長方面，付玉嬪等[29]研究影響黑老虎野外生長的主要因素，黑老虎和許多木質(zhì)藤本植物一樣具有進(jìn)行遠(yuǎn)距離克隆繁殖的特點(diǎn)，藤莖從林冠垂落到地面產(chǎn)生根系或根系沿林下地面不斷伸長再產(chǎn)生根系的方式克隆出新的藤莖。黑老虎居群在幼年階段較高的集群強(qiáng)度有利于存活和發(fā)揮群體效應(yīng)，而成年時(shí)由于個(gè)體增大，自疏作用增強(qiáng)，集群強(qiáng)度降低則利于獲得足夠的環(huán)境資源。

段永泉等[30]和黃鎖義等[31]認(rèn)為黑老虎是一種生長在較高海拔、喜濕潤氣候、常見于山林里和水溝邊的常綠木質(zhì)藤本植物。通過原子吸收光譜法檢測顯示，云南和廣西黑老虎含鐵、錳、銅、鎂、鋅、鈣等多種人體所需微量元素。漆小雪等[32]報(bào)導(dǎo)不同光照對(duì)黑老虎生長及葉片SPAD值的影響，指出黑老虎屬于喜陰植物，光照在30%～50%是其最適宜的遮蔭度，強(qiáng)光和弱光都不利于黑老虎的生長發(fā)育。陳銀華[33]提出在營養(yǎng)生長期，黑老虎的管理為定植后插竹竿，打頂，促發(fā)分枝，同時(shí)應(yīng)注意及時(shí)摘心打頂，保證藤蔓的均勻分布。

2.3栽培技術(shù)措施

鄧冬梅等[34]對(duì)粵北黑老虎的高產(chǎn)栽培技術(shù)進(jìn)行闡述。早在2006年唐輝等[35]開展黑老虎野生馴化和引種栽培的試驗(yàn)研究。表明野生冷飯團(tuán)馴化為栽培品種是成功的，對(duì)其進(jìn)行人工栽培并規(guī)模化發(fā)展是可行的。吳智濤等[26]詳細(xì)介紹黑老虎的栽培技術(shù)，主要包括造地林選擇、林地清理、整地施肥、適時(shí)播種移栽、合理密植、加強(qiáng)肥水管理、撫育管理、整形修枝、 注意病蟲害防治。付玉嬪等[29]通過調(diào)查研究，總結(jié)了云南黑老虎的居群結(jié)構(gòu)和居群發(fā)展動(dòng)態(tài)，指出黑老虎這一植物居群目前更新的方式主要為克隆繁殖，種子自我更新能力極弱，居群數(shù)量少，正處于衰退狀態(tài)，且目前還在不斷、大量的利用野生資源的現(xiàn)狀都預(yù)示著該居群的生存和發(fā)展十分堪憂。應(yīng)該積極倡導(dǎo)對(duì)黑老虎野生資源的保護(hù)、收集保存和盡快開展人工引種馴化。陳銀華[33]和陶光林等[36]報(bào)導(dǎo)黑老虎定植分為春植和秋植，春植時(shí)間為2月下旬至3月上旬之間植株萌芽前，秋植時(shí)間為10月下旬至11月上旬。秋植的好處在于根系分裂生長提早，有利于加快第2年樹體的生長發(fā)育。

2.4病蟲害防治

吳智濤[26]和陳銀華[33]均認(rèn)為黑老虎在抗病害方面能力強(qiáng)，暫未見危害性病害。而其他病害主要是葉枯病，防治措施為加強(qiáng)田間的管理和通風(fēng)透光，發(fā)病初期可用波爾多液按1∶1∶100 噴施，每7 d噴1次，連續(xù)噴施數(shù)周即可。田定科[38]和陶光林等[39]給出了紅蜘蛛（危害植株嫩梢和葉）、卷葉蟲（危害葉部，適成卷葉，影響果實(shí)生長）、鱗翅目粉蝶（6月中下旬至11月下旬為害葉部、果實(shí)）、鞘翅目葉甲科的藍(lán)翅瓢螢葉甲（4月底至5月初為幼蟲危害，6月中下旬為成蟲危害，為害葉部）的詳細(xì)防治方法。

鄧冬梅等[34]和鄧定洪[40]認(rèn)為蟲害主要有白蟻，主要為害根部，要用石灰、草木灰或螞蟻藥等，而尺蠖主要為害葉和花蕾，防治可用氯氰菊酯和阿維菌素。

3結(jié)語

黑老虎作為我國傳統(tǒng)中藥，應(yīng)用廣泛，其主要化學(xué)成分較為復(fù)雜，普遍認(rèn)為木脂素類和三萜類是其主要的生物活性成分，同時(shí)還含有倍半萜、揮發(fā)油、甾體類等化學(xué)成分[26]和木脂素類、三萜類化合物。而黑風(fēng)藤屬于稀用中藥材[16]，化學(xué)成分研究不夠深入，化學(xué)成分不夠明確，未能找到合適的化學(xué)成分對(duì)照品，所以進(jìn)行薄層色譜研究時(shí)只能以黑老虎和黑風(fēng)藤各自的對(duì)照藥材為對(duì)照。

從以上黑老虎及其混偽品的鑒別分析來看，黑風(fēng)藤與黑老虎在性狀上較相似、差異較?。辉陲@微鑒別、薄層鑒別及理化鑒別方面，黑老虎與其混偽品均有較為獨(dú)立的鑒別方法。故中藥黑老虎在購買及使用時(shí)，一定要仔細(xì)辨別真?zhèn)危乐挂蛘`用、冒用、錯(cuò)用偽品而發(fā)生藥品不良反應(yīng)，乃至中毒。

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