熊海燕，金鑫，楊瀚琳,3，高擎，葛亞中，彭穎，李曉波

（1.上海交通大學藥學院，上海 200240）（2.無限極（中國）有限公司，廣東廣州 510665）（3.沈陽藥科大學生命科學與生物制藥學院，遼寧沈陽 110016）

脾虛證是中醫(yī)臨床常見證候。中醫(yī)認為脾為后天之本，主運化、升清降濁、統(tǒng)攝血液，是氣血生化之源?，F(xiàn)代醫(yī)學認為，中醫(yī)脾的生理功能與消化系統(tǒng)以及免疫功能關系密切。脾虛時消化系統(tǒng)處于紊亂狀態(tài)[1]?！捌⒉≌?，虛則腹瀉腸鳴，飧泄食不化”，脾虛證臨床表現(xiàn)大部分可歸屬于消化系統(tǒng)功能障礙[2]，故常通過研究胃腸功能的變化來研究脾虛證。脾虛時機體的細胞免疫包括巨噬細胞的吞噬功能、自然殺傷細胞（natural killer cell，NK）活性功能、淋巴細胞轉化率、細胞因子等功能皆低下，細胞免疫紊亂是中醫(yī)脾虛證的另一個重要表現(xiàn)[3]。近年研究表明，腸道菌群與脾虛證的發(fā)生發(fā)展密切相關[4,5]。脾虛時機體胃腸功能異常，各臟器間的平衡遭到破壞而導致腸道的微生態(tài)系統(tǒng)受到嚴重破壞，而腸道菌群的失調又影響機體對營養(yǎng)物質的吸收，降低機體的免疫力，加重脾虛癥狀[6]。基于腸道菌群在脾虛證的重要作用，臨床上常采用益生菌和益生元等微生態(tài)制劑治療脾虛證，如復方嗜酸乳桿菌片、培菲康、雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊、媽咪愛和麗珠腸樂等。微生態(tài)制劑可促進機體對營養(yǎng)物質的消化，促進腸道蠕動，合成機體所需的維生素，提高人體免疫力[7]，產(chǎn)生確切具有健康功效的次級代謝產(chǎn)物，幫助調節(jié)腸道微生態(tài)健康。

四君子湯出自《太平惠民和劑局方》，由人參、白術、茯苓和炙甘草4味藥組成，具有調理脾胃的功效，廣泛應用于臨床，被作為治療脾胃氣虛證的代表方和基本方。雖中醫(yī)臨床對脾虛證的治療是基于辨證施治、整體觀念的理論，靈活調整中藥方劑以治療脾虛證。但研究發(fā)現(xiàn)，四君子湯含量最多的成分是多糖[8]。有報道，多糖作為一種益生元，能夠刺激消化道內(nèi)有益菌的生長繁殖及代謝功能，調節(jié)脾虛時的腸道菌群失調，進而維持機體免疫平衡和免疫耐受而發(fā)揮治療脾虛證的作用[8]?？梢?，四君子湯治療脾虛證的功效可能與調節(jié)腸道菌群關系密切，而四君子湯亦被證明可改善脾虛證大鼠腸道菌群紊亂[9,10]。

益生菌復合劑以改善腸道健康的功效研發(fā)而成，主要成分為山楂粉、山藥粉、菊粉、嗜酸乳桿菌NCFM、乳雙歧桿菌Bi-07、鼠李糖桿菌HN001。其被證明對抗生素誘導的腹瀉模型小鼠腸道菌群具有較強恢復作用[11]。為進一步評價該益生菌復合制劑對脾虛證的治療作用，本文采用番瀉葉塑造脾虛證大鼠模型，通過比較不同劑量益生菌復合制劑及四君子湯對脾虛證大鼠模型血清中血管活性腸肽（Vasoactive intestinal peptide，VIP）、膽囊收縮素（Cholecystokinin，CCK）、P物質（Substance P，SP）、胃泌素（Gastrin，GAS）、胃動素（Motilin，MTL）共5種胃腸激素以及丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、白介素-2（Interleukin-2，IL-2）、白介素-4（Interleukin-4，IL-4）共3種免疫因子水平的調節(jié)作用，探討益生菌復合制劑對番瀉葉誘導脾虛證大鼠的改善作用，為其臨床應用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

72只SPF級Wistsr大鼠，體重180~220 g，雌雄各半，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，合格證號11400700187485，飼養(yǎng)于上海交通大學實驗動物中心。所有實驗動物均在恒溫、恒濕及晝夜光線變化的環(huán)境下飼養(yǎng)，自由進食、飲水，適應性飼養(yǎng)一周。

1.2 藥物

番瀉葉（Sennae Folium）用10倍蒸餾水浸泡2 h后，煎煮3次，每次15 min，過濾，合并3次濾液，水浴濃縮至1 g生藥/mL，冷卻后置4 ℃保存待用。人參（Ginseng Radix et Rhizoma）、白術（Atractylodis macrocephalae Rhizoma）、茯苓（Poria）、炙甘草（Glycyrrhizae Rhizoma et Rhizoma）原藥材按10:9:9:6比例配制，用10倍蒸餾水浸泡2 h后，煎煮3次，每次40 min，過濾，合并3次濾液，水浴濃縮至0.35 g生藥/mL四君子湯水煎液，冷卻后置4 ℃保存待用。以上藥材均購自上海華宇藥業(yè)有限公司，經(jīng)由上海交通大學藥學院李曉波教授鑒定符合藥典規(guī)定，標本存放于上海交通大學藥學院。

益生菌復合制劑（產(chǎn)品批號 20160706），由無限極（中國）有限公司提供。

1.3 試劑

大鼠GAS酶聯(lián)免疫試劑盒（LOT #R20170218）、MTL酶聯(lián)免疫試劑盒（LOT #R20170319）、VIP酶聯(lián)免疫試劑盒（LOT #R20170320）、CCK酶聯(lián)免疫試劑盒（LOT #R20170326）、SP酶聯(lián)免疫試劑盒（LOT#R20170325）。

大鼠MDA酶聯(lián)免疫試劑盒（貨號A003-1，LOT#R20170405）、IL-2酶聯(lián)免疫試劑盒（LOT#R20170301）、IL-4酶聯(lián)免疫試劑盒（LOT#R20170302）。以上試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.4 方法

1.4.1 動物造模和給藥治療

72只Wistar大鼠，適應性飼養(yǎng)一周后，隨機分為空白組、模型組、四君子湯組、益生菌復合制劑低、中、高劑量組，每組12只，雌雄各半。參考文獻復制脾虛證大鼠模型[9]，采用番瀉葉水煎液（10 g生藥/kg）灌胃大鼠。

每天2次，連續(xù)10 d塑造脾虛證模型。造模結束后，陽性藥組大鼠灌胃給予四君子湯水煎液 3.5 g/kg（臨床等效劑量，按照實驗動物研究70 kg成人體表面積換算），益生菌復合制劑低、中、高劑量組分別灌胃給予60、180（臨床等效劑量）、540 mg/kg的益生菌溶液，連續(xù)給藥治療10 d，空白組、脾虛模型組大鼠灌胃給予同體積蒸餾水。

1.4.2 脾虛證表觀指標

參考文獻[12]，觀察動物造模前后及給藥治療后的排便、毛發(fā)、精神狀態(tài)等體征變化，記錄各組大鼠造模及治療期間體重變化。（參照衛(wèi)生部藥政司“關于中藥治療脾虛證的臨床研究指導原則”的脾虛證診斷標準，脾虛證動物模型評估標準[12]為具備兩項主癥及兩項兼癥。

其中，①大便溏泄，嚴重者甚至脫肛；②食少納呆；③消瘦，體質量減輕；④精神萎靡嗜臥，四肢不收，豎毛、脫毛、毛發(fā)黯淡無華；⑤蜷縮扎堆；⑥易疲勞。第①、②項為主癥，第③~⑥項為兼癥。）

1.4.3 脾虛證診斷的生化指標

給藥治療結束后，各組大鼠經(jīng)10%水合氯醛麻醉，剖開腹腔，腹主動脈采血5~6 mL于真空采血管管中，4 ℃靜置24 h，吸取上清液，分裝后置于-20 ℃冰箱待測。采用ELISA試劑盒法對各組大鼠血清GAS、MTL、VIP、CCK、SP、MDA、IL-2和IL-4含量進行測定，具體操作按照試劑盒說明書進行。

1.4.4 統(tǒng)計分析

實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準誤差（Mean±SE）表示，采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，不同實驗組之間的差異分析采用t檢驗，p<0.05則表示差異具有顯著性統(tǒng)計學意義，p<0.01則表示差異具有極顯著性統(tǒng)計學意義。

2 結果與分析

2.1 脾虛證大鼠體重、胃腸及免疫功能變化

造模期間，正常組大鼠精神良好，毛色順滑有光澤，自主活動較多，反應靈敏，大便呈顆粒狀。各造模組大鼠經(jīng)灌胃給予番瀉葉水煎劑后開始出現(xiàn)大便稀溏或便軟，并夾雜粘液，尿液呈橘黃色，肛門污穢，進食量明顯減少。隨后出現(xiàn)精神萎靡嗜臥，蜷縮扎堆，動作遲緩，拱背、倦怠乏力、四肢不收等現(xiàn)象，自主活動減少，并出現(xiàn)豎毛、脫毛、背部毛發(fā)黯淡無華等較明顯的脾虛癥狀。實驗期間各組大鼠的體重變化如表1。

各造模組大鼠造模后體重增長緩慢，造模第10 d各造模組大鼠體重均明顯低于空白組，造模前后體重差與空白組相比具有極顯著性差異（p<0.01）。血清胃腸激素及免疫功能指標測定結果表明，與空白組相比，模型組大鼠血清GAS、MTL、VIP、CCK、SP含量均顯著升高（p<0.05），表明脾虛證大鼠胃腸激素分泌紊亂，胃腸道功能失調；且模型組大鼠血清MDA和IL-4水平顯著高于空白組（p<0.05），IL-2水平顯著低于空白組（p<0.05），表明脾虛證大鼠體內(nèi)脂質過氧化程度較高，免疫功能紊亂。

綜合分析大鼠的一般體征觀察、體重、胃腸及免疫功能指標在造模前后的變化情況，表明脾虛證模型大鼠塑造成功。

表1 各組大鼠體重變化（n=12）Table 1 Weight changes of rats in each group ( n = 12)

2.2 益生菌復合制劑對脾虛證大鼠血清胃腸激素的影響

藥物治療后，各組大鼠血清中胃腸激素變化如圖1所示。益生菌復合制劑劑量依賴性改善脾虛證大鼠血清VIP、CCK和SP水平。其中，益生菌復合制劑高劑量能極顯著降低脾虛證大鼠血清 VIP水平（p<0.01），并顯著降低CCK和SP水平（p<0.05）；低、中劑量能顯著降低脾虛證大鼠血清 VIP水平（p<0.01）和SP水平（p<0.05）。而四君子湯能極顯著降低脾虛證大鼠血清 GAS、MTL和 VIP含量（p<0.01）。以上結果表明，四君子湯及益生菌復合制劑對脾虛證大鼠胃腸激素異常變化均有一定改善作用，但對各指標的改善程度不同。在改善GAS、MTL和VIP方面，四君子湯作用強于益生菌復合制劑；而益生菌復合制劑則主要是通過改善CCK、SP、VIP來調節(jié)脾虛大鼠胃腸激素分泌。

圖 1 各組大鼠胃腸激素 GAS（a）、MTL（b）、VIP（c）、CCK（d）、SP（e）含量變化Fig.1 Changes of GAS (a), MTL (b), VIP (c), CCK (d) and SP (e)levels of rats in each group

2.3 益生菌復合制劑對脾虛證大鼠血清免疫因子的影響

藥物治療后，各組大鼠血清中MDA、IL-2和IL-4水平變化如圖2所示。

益生菌復合制劑低、中劑量和四君子湯均能極顯著降低脾虛證大鼠血清MDA水平（p<0.01），而益生菌復合制劑高劑量組對脾虛大鼠血清MDA雖有一定的降低作用，但與模型組相比無顯著性差異，表明益生菌復合制劑低、中劑量和四君子湯均具有一定抗氧化活性，改善脾虛證大鼠體內(nèi)脂質過氧化程度。此外，四君子湯、益生菌復合制劑中劑量可顯著升高脾虛證大鼠血清 IL-2水平（p<0.05），益生菌復合制劑低、高劑量雖有升高IL-2水平的趨勢，但無顯著性差異。

以上結果表明四君子湯、益生菌復合制劑中劑量可通過調節(jié) IL-2分泌提高大鼠免疫力，減輕脾虛癥狀。在抑制IL-4過度分泌方面，益生菌復合制劑的低、中劑量只表現(xiàn)出降低IL-4水平的趨勢，相比于模型組并無顯著性差異，益生菌復合制劑高劑量可顯著降低脾虛證大鼠血清 IL-4水平（p<0.05），表明益生菌復合制劑高劑量對IL-4有顯著改善作用，其可改善大鼠免疫調節(jié)網(wǎng)絡，治療脾虛證。

以上結果表明，四君子湯能夠調節(jié)脾虛證大鼠血清MDA和IL-2紊亂，而益生菌復合制劑則對MDA、IL-2和IL-4有一定改善作用。

圖2 各組大鼠胃腸激素MDA（a）、IL-2（b）、IL-4（c）含量變化Fig.2 Changes of MDA (a), IL-2 (b), IL-4 (c) levels of rats in each group

為進一步探討益生菌復合制劑產(chǎn)品顯著改善的脾虛證大鼠血清胃腸激素水平與MDA、IL-2和IL-4水平之間的關聯(lián)，采用Pearson相關系數(shù)法對血清CCK、VIP和SP水平與MDA、IL-2和IL-4水平進行了相關性分析，結果顯示血清CCK和SP水平與MDA水平呈負相關，相關系數(shù)分別為-0.20和-0.19，但相關性均不顯著（p>0.05）；血清VIP水平與MDA水平之間則無相關性，相關系數(shù)為0；血清CCK、VIP和SP水平與IL-2和IL-4水平均顯著正相關（p<0.05），三者與IL-2水平的相關系數(shù)分別為0.34、0.38和0.55，與IL-4水平的相關系數(shù)分別為0.29、0.53和0.66。

3 討論

脾虛證是中醫(yī)臨床常見虛證。脾虛時機體各臟器間的平衡破壞，胃腸道功能及免疫功能等紊亂，腸蠕動加快，大便溏泄，腸道中有益菌大量排除體外，機體腸道內(nèi)的雙歧桿菌和乳桿菌等益生菌數(shù)量降低，腸桿菌、腸球菌數(shù)量顯著增多，腸道菌群紊亂[13]。腸道菌群紊亂反之又減弱胃腸道功能，降低免疫力，加速脾虛證發(fā)展，兩者互為因果關系。研究表明，治療脾虛證經(jīng)典方劑四君子湯能使脾虛證動物腸絨毛的形態(tài)恢復正常，改善腸道微生物群落定植環(huán)境，促進腸道有益菌的生長繁殖，治療脾虛證[14]。因此，臨床常采用微生態(tài)制劑通過調節(jié)機體的腸道菌群平衡治療脾虛證。本文采用傳統(tǒng)脾虛治療方劑四君子湯為陽性對照，比較益生菌復合制劑對脾虛證大鼠的改善作用，對深入探討益生菌復合制劑和四君子湯對脾虛證的作用機制及臨床應用具有重要意義。

3.1 益生菌復合制劑治療脾虛證的意義

益生菌的作用依賴于菌株的特異性，不同的菌株具有不同的功效。本實驗中的益生菌復合制劑含有的嗜酸乳桿菌NCFM、乳雙歧桿菌Bi-07和鼠李糖桿菌HN001三種菌株，經(jīng)臨床證實，嗜酸乳桿菌NCFM具有調節(jié)免疫，改善腸炎，降低膽固醇，改善乳糖的不耐受性，恢復抗生素導致的腸道菌群失調，抑制腸道病原菌等作用[15~18]；乳雙歧桿菌Bi-07具有促進腸道健康、改善腹瀉和便秘、調節(jié)免疫等作用[19,20]。

鼠李糖桿菌HN001則具有調節(jié)免疫、抑制病原菌和緩解過敏性濕疹等作用，而且定植于腸道中的HN001還能夠促進其他益生菌的增殖[21~23]。此外，益生菌復合制劑成份中還有山藥粉、山楂粉和菊粉。山藥常出現(xiàn)在治療脾胃病的中藥方劑中，有補脾益氣之功效，臨床上用于治療脾虛不思飲食，泄瀉便溏；山楂，有消食化積之功，研究表明[24]，口服山楂能夠調節(jié)胃腸功能紊亂，健脾消食；菊粉，俗稱菊糖，是一種優(yōu)質的水溶性纖維，被公認為世界三大益生元之一。人體口服菊粉后，通常不會被胃和小腸吸收，而是在結腸處被雙歧桿菌以及乳桿菌發(fā)酵，從而促進腸道益生菌的產(chǎn)生，改善腸道微生態(tài)環(huán)境，調節(jié)胃腸道生理功能。因此，該產(chǎn)品中的山藥、山楂和菊粉也有助于發(fā)揮治療脾虛證的作用。

3.2 益生菌復合制劑對大鼠體重及胃腸功能的調節(jié)作用

體重是評價脾虛模型的一個重要指標，觀察造模后大鼠體重變化以及藥物治療組大鼠的體重恢復情況，可幫助判斷脾虛模型是否成功建立以及評價藥物的療效。本文采用番瀉葉水煎液灌胃大鼠塑造脾虛模型，造模后，各造模組大鼠造模前后體重差值極顯著低于空白組，表明大鼠脾虛時體質量明顯下降。在治療后，模型組和各給藥組大鼠體重均反彈明顯。治療后體重的恢復情況可以一定程度上反應藥物的治療作用，但不能作為大鼠治療后恢復健康的唯一指標。

中醫(yī)學理論認為“脾主運化”，“運”是指運輸分布，“化”是指消化吸收，故脾虛患者存在脾失健運，胃腸道運動異常的現(xiàn)象，食物不能與消化液進行充分接觸，胃排空、腸道推進性運動異常，消化、吸收功能減退，臨床主要表現(xiàn)為脘腹脹滿、呃逆、嘔吐或腹瀉等癥狀。說明中醫(yī)理論中“脾”的主要生理作用及其病理機制與現(xiàn)代醫(yī)學中消化系統(tǒng)關系密切。胃腸道既是消化器官，也是內(nèi)分泌器官，遍布著分泌胃腸激素的細胞。研究表明[25]，胃腸激素能夠調節(jié)胃腸道的吸收、分泌及運動等方面的生理功能。胃腸激素主要通過兩個途徑發(fā)揮調節(jié)胃腸運動的作用，其一是以內(nèi)分泌形式通過血液作用于胃腸肌細胞相應的受體，如MTL以及CCK。二是以胃腸肽釋放遞質的形式調節(jié)胃腸功能。

本實驗中模型組大鼠與空白組相比，血清GAS、MTL、VIP、CCK以及SP含量均顯著性升高，表明脾虛大鼠存在胃腸激素分泌紊亂，胃腸功能失調。經(jīng)四君子湯治療后，脾虛證大鼠血清GAS、MTL和VIP含量顯著降低。GAS是由胃竇、十二指腸和小腸黏膜G細胞分泌的一種重要的胃腸激素，其生理功能主要有營養(yǎng)胃黏膜并促進其增殖，促進胃酸、胃蛋白酶和內(nèi)因子分泌，促進胃腸道平滑肌收縮，可作為胃分泌功能的客觀指標[26]。研究證明，脾虛狀態(tài)下會導致GAS含量異常升高[27]。血清及細胞中胃泌素水平紊亂是脾胃運化功能障礙的重要原因，血清胃泌素水平可作為脾虛證診斷及療效評定的客觀指標[28]。G細胞增生時，分泌大量的胃泌素，作用于胃腸效應細胞的受體，使消化道分泌功能亢進，運動功能紊亂，因而出現(xiàn)食欲不振、食后腹脹和便溏等脾虛的證候。血清中GAS水平升高可導致基礎胃酸分泌增加，胃蛋白酶和胰液、膽汁分泌增加，加快胃腸肌收縮，促進胃腸運動。GAS還可促胰島素釋放，增加食道下括約肌張力，松馳幽門、膽道和回盲部括約肌，促進胃、小腸、結腸及膽囊的收縮和運動。MTL是一種由22個氨基酸殘基組成的的直鏈多肽，是一種腦腸肽，具有強烈的刺激上消化道的機械運動和點活動的作用[29]。MTL能刺激胃蛋白酶和胰液分泌，促進胃排空，在消化間期胃動素呈周期性釋放，引起胃和小腸產(chǎn)生消化間期移行性復合運動（migrate motor complex，MMC）。已有研究表明[30,31]，脾虛患者 MTL水平顯著升高，促進小腸明顯的分節(jié)運動，使胃腸功能紊亂，出現(xiàn)脾虛泄瀉等脾虛癥狀。VIP是由28個氨基酸組成的肽類物質，既是胃腸道激素又是神經(jīng)肽。VIP作為抑制性神經(jīng)遞質，可減慢胃排空，抑制胃酸及胃蛋白酶的分泌，能夠松弛胃腸道血管平滑肌，擴張血管，抑制胃蠕動和膽囊收縮，抑制小腸環(huán)形括約肌收縮，降低十二指腸收縮頻率，松弛結腸平滑肌，抑制結腸和直腸的緊張性，減弱結腸運動，并刺激大、小腸分泌[32]。已有文獻報道[33,34]，脾虛患者和實驗性脾虛動物均存在VIP含量異常升高的現(xiàn)象。VIP含量異常升高，可引起腸道黏膜血管擴張（導致黏膜充血或水腫），能使乙狀結腸平滑肌松弛，使糞便在乙狀結腸停留時間過短，水分吸收減少，同時刺激腸道水分、電解質的分泌，引起大便稀溏，大便次數(shù)增多，從而引發(fā)腹瀉[35]。這提示我們，四君子湯可通過抑制GAS、MTL和VIP的過多分泌，抑制胃腸肌收縮和小腸明顯的分節(jié)運動，促進乙狀結腸平滑肌的收縮，同時降低腸道水及電解質的分泌，進而減輕食欲不振、食后腹脹、脾虛泄瀉等脾虛的證候。

本文研究結果顯示，與模型組相比，益生菌復合制劑能顯著降低脾虛大鼠血清CCK、SP和VIP含量，減輕大鼠脾虛癥狀。CCK主要由十二指腸和空腸黏膜的I細胞合成，具有廣泛的生物作用，可抑制胃排空和近端十二指腸蠕動，促進遠端十二指腸蠕動、空腸蠕動、膽囊收縮和胰腺分泌，促進結腸平滑肌興奮收縮，促進胃腸運動并縮短內(nèi)容物通過時間[36]。CCK分泌減少或 CCK受體阻斷，則膽囊收縮功能和胰腺分泌功能受損，使饑餓感增強，促進攝食。已有研究表明[37]，脾虛患者以及脾虛實驗動物均存在 CCK含量升高的現(xiàn)象。SP是具有11個氨基酸的促炎癥性多肽，廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)及免疫器官等部位，對消化道平滑肌有強烈的刺激作用，促進腸蠕動、增高結腸內(nèi)壓力、參與痛覺傳導、刺激小腸和結腸黏膜分泌水分及電解質、促進胃腸道血管擴張等[38]。SP還可促進肥大細胞脫顆粒反應，釋放組胺、前列腺素、白三烯、緩激肽等活性介質，可引起組織炎癥性反應、神經(jīng)性疼痛，介導內(nèi)臟高敏反應等[39]。動物實驗研究表明[37]，實驗性脾虛大鼠血清SP含量顯著高于空白組。臨床研究亦發(fā)現(xiàn)[33]，脾虛泄瀉患者回腸末端 SP含量較無腹瀉組和非脾虛泄瀉組顯著增加，提示回腸組織中 SP含量的升高，引起腸蠕動加快，是脾虛泄瀉的原因之一。因此，推測益生菌復合制劑可通過抑制CCK、SP和VIP的過多分泌，抑制空腸蠕動，降低小腸和結腸黏膜水分及電解質的分泌量，相應地減輕脾虛證大鼠的腹脹、納呆、腹瀉癥狀；抑制膽囊收縮和胰腺分泌功能，增強大鼠的饑餓感，促進大鼠進食，使大鼠體重增加。

3.3 益生菌復合制劑對脾虛大鼠免疫的調節(jié)作用

中醫(yī)學中的“脾”的概念既包含了其生理學結構，也體現(xiàn)了其功能。脾是人體最大的淋巴網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)?！捌橹l(wèi)”、“脾為后天之本”，傳統(tǒng)中醫(yī)理論表明脾與機體的防御功能有關。而現(xiàn)代醫(yī)學研究表明[40]，這種防御功能主要與機體的非特異性免疫、特異性免疫中的體液免疫和細胞免疫功能有關，還與多種免疫細胞和細胞因子有關。

本文實驗結果顯示，與空白組相比，脾虛模型組MDA及IL-4含量顯著升高，IL-2含量顯著性降低。經(jīng)四君子湯治療后，脾虛模型大鼠血清MDA含量顯著降低，IL-2含量顯著升高。給予益生菌復合制劑治療后，脾虛證大鼠血清MDA及IL-4含量均顯著降低，IL-2含量顯著升高。MDA即血漿中脂質過氧化物（LPO）的代謝產(chǎn)物，其含量可反映機體內(nèi)脂質過氧化物的程度，間接地反映出機體細胞受氧自由基攻擊的嚴重程度和機體清除自由基的能力。研究表明[41]，脾虛時機體脂質過氧化損傷和抗氧化酶活性降低，致使機體氧化和抗氧化失衡，MDA分泌水平異常升高，提示中醫(yī)的脾虛證與衰老相關。實驗表明，益生菌復合制劑和四君子湯可通過有效抑制體內(nèi)脂質過氧化發(fā)揮治療脾虛證的作用。IL-2是輔助性T淋巴細胞分泌的一種調節(jié)免疫應答的重要介質，其分泌量決定免疫反應的幅度，可刺激NK細胞的生長，提高細胞溶解活性，使其變?yōu)長AK細胞[42]，另外還能作用于B細胞，促進其生長及抗體合成，并可誘生干擾素等，它在體液免疫和細胞免疫中具有重要作用。研究表明[43]，IL-2分泌量降低或IL-2受體在免疫細胞表面表達不足會導致多種疾病。已有文獻報道[3]，大鼠脾虛狀態(tài)下，血清IL-2分泌水平顯著低于正常大鼠。IL-4主要由活化的T細胞、肥大細胞及嗜堿性粒細胞產(chǎn)生，可輔助B細胞分化為抗體分泌細胞，是參與體液免疫的重要細胞因子，同時它還具有促進B細胞活化、增殖、分化和產(chǎn)生Ig的作用[44]。據(jù)文獻報道，脾虛狀態(tài)下，脾虛泄瀉可引起炎癥反應，刺激大鼠產(chǎn)生應激反應，而使IL-4分泌紊亂[45]。IL-2是一種Th1型細胞因子，IL-4是最具代表性的Th2型細胞因子。研究人員根據(jù)大鼠脾虛時免疫力降低，推測細胞因子、抗原刺激、信號轉導通路、以及其他綜合因素，促使了脾虛證Th1細胞向Th2偏移，導致了Th1/Th2細胞比例失衡[46]。本文結果提示，益生菌復合制劑和四君子湯均能調節(jié)脾虛證大鼠血清MDA和IL-2水平，在細胞免疫和體液免疫中均能發(fā)揮重要作用，提高大鼠免疫力，減輕脾虛證大鼠脾虛癥狀。

此外，相關性分析結果表明，脾虛證大鼠血清VIP水平與IL-2和IL-4水平具有顯著正相關，這與文獻報道相符[47]。胃腸激素VIP是一種潛在的免疫調節(jié)劑，其對免疫因子 IL-2分泌水平在不同條件下表現(xiàn)出不同趨勢的調節(jié)作用[47]，其既能調節(jié)固有免疫，也可調節(jié)獲得性免疫，具有較好的抗炎作用[48]。亦有研究報道VIP受體在浸潤性炎癥細胞中大量表達，在潰瘍性結腸炎患者中，VIP受體表達的數(shù)量與IL-4陽性表達的細胞正相關[49]。研究表明，SP與炎癥細胞表面的受體相結合時，能夠促進炎性細胞因子的釋放和合成，主要是與Th1型細胞表面受體結合促進Th1型細胞因子如IL-2和IL-12等表達量的升高[50]；而脾虛證大鼠血清SP水平與IL-2水平顯著正相關，與研究報道一致。有研究報道，胃損傷的病理機制包括了機體內(nèi)脂質過氧化損傷反應的發(fā)生[51]，脂質過氧化損傷會導致溶酶體酶的分泌，胃組織損傷后，會產(chǎn)生大量MDA，可作為胃潰瘍指數(shù)[52]。而發(fā)酵乳桿菌可通過其抗氧化作用發(fā)揮減輕胃損傷的作用[53]。本文研究結果顯示，脾虛證模型大鼠血清胃腸激素VIP、CCK和SP水平與MDA水平之間并無顯著相關性，且未見胃腸激素與脂質過氧化特征指標MDA之間的關聯(lián)報道，因此益生菌復合制劑對胃腸功能的調節(jié)作用與降低體內(nèi)脂質過氧化損傷的聯(lián)系還有待進一步研究。

4 結論

綜上所述，番瀉葉致脾虛證模型大鼠胃腸功能紊亂，免疫力下降。傳統(tǒng)健脾藥物四君子湯主要可以調節(jié)胃腸激素GAS、MTL和VIP的分泌以及MDA和IL-2的分泌，改善大鼠胃腸道功能，提高大鼠的免疫力。而益生菌復合制劑主要是顯著改善胃腸激素CCK、SP和VIP，調節(jié)脾虛大鼠胃腸道功能；并且顯著調節(jié)MDA、IL-2和IL-4的分泌，減輕機體脂質過氧化損傷程度，通過調節(jié)細胞免疫、體液免疫來提高機體免疫力，從而改善脾虛證的癥狀。二者均能一定程度上改善脾虛證大鼠的脾虛癥狀，調節(jié)紊亂的胃腸激素和免疫因子水平，為臨床上應用益生菌復合制劑治療脾虛證提供了一定理論和實驗依據(jù)。值得注意的是，二者顯著改善胃腸激素及免疫因子指標存在差異，

這提示，二者可能是通過不同作用機制來治療脾虛證。

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