王琳琳 劉蕾

摘 要：目的 通過研究CDX2、CYP24A1在大腸癌中的表達研究，探討CDX2和CYP24A1的相關性。方法 應用免疫組化S-P法檢測100例大腸癌組織及20例正常大腸癌組織中CDX2和CYP24A1的表達。結果 大腸癌組織中的CDX2和CYP24A1的蛋白表達低于正常大腸癌組織中的表達（P<0.05）， 以正常大腸組織作為對照，CDX2 的蛋白水平表達量為100.00%， 癌旁組織和大腸癌組織的 CDX2 蛋白的相對表達量分別為77.12%、46.65%。CYP24A1 的蛋白水平表達量為 43.81%， 癌旁組織和大腸癌組織的 CYP24A1 蛋白的相對表達量分別為75.00%、96.82%。通過Pearson相關分析顯示CDX2蛋白表達水平與CYP24A1蛋白表達水平之間呈顯著負相關關系（P<0.05）。結論 CDX2和CYP24A1是具有較高敏感性的腸上皮特異性標志物，聯(lián)合檢測CDX2和CYP24A1的表達有助于鑒別良惡性大腸腫瘤。

關鍵詞：CDX2；CYP24A1；大腸癌；免疫組織化學

中圖分類號：R735.3 文獻標識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.07.023

文章編號：1006-1959（2018）07-0072-03

The Expression of CDX2 and CYP24A1 in Colorectal Cancer

WANG Lin-lin1，2，LIU Lei1

（1.Jiamusi University，Jiamusi 154007，Heilongjiang，China；

2.Mudanjiang Medical University，Mudanjiang 157000，Heilongjiang，China）

Abstract：Objective To study the expression of CDX2 and CYP24A1 in colorectal cancer and to explore the correlation between CDX2 and CYP24A1.Methods The expression of CDX2 and CYP24A1 in 100 cases of colorectal carcinoma and 20 cases of normal colorectal carcinoma were detected by immunohistochemical S-P method.Results The expression is lower than that of normal colorectal carcinoma in colorectal carcinoma CDX2 and CYP24A1 protein expression（P<0.05），in normal colorectal tissues as the control group， the protein level of CDX2 expression was 100.00%， the relative expression of carcinoma and colorectal cancer CDX2 protein were 77.12% and 46.65%.The protein level of CYP24A1 was 43.81%，and the relative expression of CYP24A1 protein in para cancer tissue and colorectal carcinoma tissue was 75.00% and 96.82%，respectively.The Pearson correlation analysis showed a significant negative correlation between CDX2 protein expression and CYP24A1 protein expression（P<0.05）.Conclusion CDX2 and CYP24A1 are highly specific intestinal epithelial specific markers.The combined detection of CDX2 and CYP24A1 expression is helpful to distinguish between benign and malignant colorectal tumors.

Key words：CDX2；CYP24A1；Colorectal cancer；Immunohistochemistry

近些年，我國大腸癌發(fā)病率迅速上升，在黑龍江地區(qū)大腸癌發(fā)生率位居第二位。隨著分子生物學，基因?qū)W的發(fā)展，人們逐漸認識到只有從基因水平著手才能從根本上治愈腫瘤[1] 。CDX2和CYP24A1分別是近年來國內(nèi)外報道的與腸癌相關的分子標記物，但研究成果較少，還需進一步研究證實。CDX2 （caudal type ho-meobox transcriptionfactor 2）是一種新發(fā)現(xiàn)的特異性的核轉錄因子對腸道上皮細胞增殖、 分化的調(diào)控起著重要作用，可能具有抑癌基因的作用。 已有研究表明，CDX2 對大腸癌在內(nèi)的消化道惡性腫瘤的侵襲和轉移具有抑制作用，但具體機制尚未明確[2-4]。有研究報道活性維生素D（1α，25（OH）2D3）不僅能夠抑制細胞增殖、誘導細胞分化與凋亡、增強免疫調(diào)節(jié)作用，還可以降低癌癥發(fā)生風險[5，6]，維生素D的限速酶CYP24A1是一個潛在的癌基因，在乳腺癌、肺癌、食管癌等組織中異常表達且與腫瘤惡性程度及患者不良預后相關[7-9]。本研究通過免疫組化法探討CDX2與CYP24A1在大腸癌發(fā)生的過程中的作用及的相互關系，為臨床診斷、治療大腸腫瘤提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料 本實驗收集牡丹江市腫瘤醫(yī)院2015年1月～2017年1月手術切除并經(jīng)病理證實的石蠟包埋組織標本100例，男54例，女46例，年齡32～89，平均年齡（59.5±11.4）歲。術前均未行放化療。取近端距腫瘤5 cm的10例癌旁組織及病理學檢查證實，無癌腫浸潤的10例正常腸粘膜組織做對照。

1.2主要試劑與方法 兔抗人CYP24A1單克隆抗體、兔抗人CDX2單克隆抗體、SP試劑盒和DAB顯色劑盒均購自福州邁新生物技術公司。實驗采用免疫組織化學法SP法（鏈酶卵白素-過氧化酶法）。以大腸癌陽性切片作陽性對照，PBS代替第一抗體隱性對照。

1.3結果判定 CDX2和CYP24A1均采用隨機選擇 5 個高倍鏡視野（400×）進行判斷，結果判定以細胞內(nèi)染色強度和染色陽性百分率得分的乘積進行評分，按四級分法綜合評定。CDX2判定標準：陽性細胞占視野10%～25%（+）， 25%～50%（++）， >50%（+++），陽性細胞 <10%為（-）。CYP24A1判定標準：①無染色為 0 分，淡黃色為 1 分，棕黃色為 2 分，棕褐色為 3 分；②細胞陽性率陰性為 0 分，陽性細胞≤10%為 1 分，>10%～50%為 2 分，>50%～75%為 3 分，>75%為4 分。將上述 2 種評分相乘之積作為評分標準，分數(shù)為 3分及以上作為陽性結果，<3 分作為陰性結果。

1.4統(tǒng)計學分析 應用 SPSS17.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料使用（%）表示，采用χ2檢驗，方差分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1 CDX2在不同大腸組織中的表達 以正常大腸組織作為對照，CDX2 的蛋白水平表達量為 100.00%， 癌旁組織和大腸癌組織的 CDX2 蛋白的相對表達量分別為77.12%、46.65%，見圖 1。 正常大腸組織、癌旁組織、大腸癌組織的 CDX2 RNA 水平及蛋白水平的表達均呈遞減趨勢。正常大腸上皮組織中CDX2 陽性染色位于細胞核，而細胞質(zhì)不著色，見圖2。

圖1 不同大腸組織CDX2 蛋白的相對表達量

注：A為正常組織；B為癌旁組織 ；C為大腸癌組織

圖2 正常大腸上皮組織中CDX2 陽性染色

2.2 CYP24A1在不同大腸癌組織中的表達 正常大腸組織蛋白水平表達量為43.81%；癌旁組織和大腸癌組織的 CYP24A1 蛋白的相對表達量分別為75.00%、96.82%。正常大腸組織、癌旁組織、大腸癌組織的表達呈遞增趨勢，見圖3；CYP24A1陽性染色位于細胞質(zhì)，以核周及核膜明顯，有的胞質(zhì)內(nèi)呈彌漫性均質(zhì)性陽性，細胞核不著色，見圖4。

圖 3 蛋白含量

注：A為正常組織；B為癌旁組織 ；C為大腸癌組織

圖4 CYP24A1陽性染色

2.3 CDX4與CYP24A1表達與大腸癌臨床病理因素的關系 見表1。

2.4 CDX4與CYP24A1之間的相關性 在100例大腸癌患者中，CYP24A1-/CDX2-11 例，CYP24A1+/CDX2-39 例，CYP24A1-/CDX2+45例，CYP24A1+/CDX2+5 例。Pearson相關性分析顯示CDX4與CYP24A1蛋白表達之間成負相關關系（r=-0.673，P<0.05）。

3討論

3.1 CDX2在大腸組織的表達及其與臨床病理因素的關系 CDX2 是一種尾型同源盒基因，主要分布在十二指腸到肛管的腸道上皮細胞中，其主要作用是調(diào)節(jié)正常腸道上皮細胞的正常發(fā)育和分化，研究證實CDX2是一種腫瘤抑制基因，如果 CDX2 的表達降低或者缺失就會引起一系列的基因調(diào)控異常而導致腫瘤的發(fā)生。本研究結果顯示，CDX2陽性染色位于細胞核中，在正常大腸黏膜、癌旁組織及大腸腫瘤中的表達率分別為100.00%、77.12%、46.65% ，呈現(xiàn)下調(diào)表達趨勢，在直結腸癌中的表達隨著細胞分化程度的減低而減少，部分癌組織中表達缺失。說明CDX2參與了大腸癌的發(fā)生，是鑒別大腸腫瘤良惡性非常好的生物學標志物之一，促進CDX2的表達有可能抑制腫瘤細胞的生長及轉移。CDX2在結直癌組織中的表達與浸潤深度、Dukes分期、腫瘤的分化程度和淋巴結轉移密切相關。

3.2 CYP24A1在大腸組織的表達及其與臨床病理因素的關系 許多流行病學證據(jù)表明，維生素 D 缺乏會增加多種癌癥的發(fā)生風險，維生素 D的活性成分，1α，25-二羥基維生素 D3，1α，25（OH）2D3可減低小鼠腸道炎癥程度和范圍[10]，對肝癌、胃癌、結直腸癌、肺癌、鱗狀細胞癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌和前列腺癌等具有一定的抗腫瘤作用，它不僅能抑制腫瘤細胞增殖，還能誘導細胞分化與凋亡。CYP24A1 是主要的1α，25（OH）2D3鈍化酶，被認為是決定 1α，25（OH）2D3生理半衰期的關鍵因子。CYP24A1 的高表達可能是影響癌癥發(fā)生、發(fā)展的重要因素之一，CYP24A1的表達與血清25（OH）2D3水平呈負相關，抑制 CYP24A1 的活性是延緩活性維生素 D3的降解和增強其生理功能的有效方法。研究證實，在結腸癌的發(fā)生過程中1α，25（OH）2D3的代謝酶 CYP24A1的表達量顯著增加，且 CYP24A1 水平越高，大腸癌的惡性程度越高。抑制CYP24A1的表達將增強1α，25（OH）2D3的抗腫瘤活性。

3.3 CDX2和CYP24A1在大腸癌中表達的相關性 本研究通過Pearson相關分析顯示CDX2蛋白表達水平與CYP24A1蛋白表達水平之間呈顯著負相關關系（P<0.05），提示二者可能存有機制上的相關性，因此，通過聯(lián)合檢測CDX2、CYP24A1的表達，更能客觀的反應大腸腫瘤的惡性程度。

綜上所述，CDX2和CYP24A1是具有較高敏感性的腸上皮特異性標志物，在大腸癌的發(fā)生中具有重要作用，通過聯(lián)合檢測CDX2和CYP24A1的表達有助于鑒別良惡性大腸腫瘤，并且在指導臨床治療，判斷患者的預后具有一定的指導意義。

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收稿日期：2017-12-29；修回日期：2018-1-31

編輯/李樺