補(bǔ)骨脂素的植物雌激素作用及其機(jī)制

（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院動(dòng)物藥學(xué)系，黑龍江大慶 163000）

婦女保健是醫(yī)療發(fā)展中的重要研究項(xiàng)目，在婦科病癥研究中，逐漸將中草藥滲透其中，因?yàn)橹参镏邪罅看萍に?，補(bǔ)骨脂素對(duì)人體具有重要作用。雌激素其活性化學(xué)成本具有明顯生物學(xué)研究效應(yīng)。比如補(bǔ)需藥其主要選擇補(bǔ)骨脂，屬于豆科草本植物果實(shí)，具有很好的補(bǔ)腎壯陽(yáng)功效。對(duì)補(bǔ)骨脂素中的植物雌激素作用展開(kāi)實(shí)驗(yàn)研究，針對(duì)乳腺癌細(xì)胞分析其作用，為婦科臨床治療的發(fā)展提供更多幫助。

1 補(bǔ)骨脂素的植物雌激素內(nèi)涵

所謂植物雌激素，主要是植物在光合條件下因?yàn)槿醮萍に刈饔盟a(chǎn)生的化合物。因?yàn)榇萍に卦诘陀H和度條件下，與植物產(chǎn)生雌激素樣效應(yīng)，所以產(chǎn)生植物雌激素。從分子結(jié)構(gòu)上分析，補(bǔ)骨脂素的植物雌激素與哺乳動(dòng)物身體中所包含的雌激素結(jié)構(gòu)具有相似之處，都屬于生物活性成分，都對(duì)婦女保健具有治療作用。在植物雌激素其本身并不屬于激素，補(bǔ)骨脂素的植物雌激素包含大豆、亞麻籽等。

2 補(bǔ)骨脂素的植物雌激素作用

補(bǔ)骨脂素的植物雌激素屬于外源性激素類型，其不需要其他途徑能夠直接在機(jī)體內(nèi)參與內(nèi)分泌調(diào)節(jié)程序。雌激素在一定劑量條件下，將其結(jié)合ER，能夠很好地激發(fā)出雌激素的作用。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)其相似于身體中雌二醇17β的功效，因?yàn)槭澄镏邪拇萍に貏┝砍渥?，其?duì)婦科炎癥與更年期病癥具有很好的治療作用，同時(shí)也能夠緩解絕經(jīng)后的骨質(zhì)疏松病癥，主要治療方法是代替治療手段。因?yàn)榇萍に仡愋筒煌?，所產(chǎn)生的治療效果也存在很多差別，比如內(nèi)源性的雌激素，尤其是異黃酮中的雌激素，其治療功效明顯，并且能夠代替子宮切除后的作用。對(duì)于補(bǔ)骨脂素的植物雌激素研究，很多發(fā)達(dá)國(guó)家針對(duì)其功效，采取人工合成的方式，利用雌激素為原材料制作雌激素代用品依普黃酮，主要治療病癥為骨質(zhì)疏松。

如果應(yīng)用低劑量的植物雌激素，將其與ER相結(jié)合，繼而形成復(fù)合物，其本身會(huì)受到結(jié)合部位的影響，幫助人體很好的組織過(guò)多雌激素分子與身體中的受體結(jié)合，從而削減靶細(xì)胞的應(yīng)答效率，不僅能夠達(dá)到抗刺激素的目的，還能增強(qiáng)人體抵抗能力。補(bǔ)骨脂素的植物雌激素，將其結(jié)合乳腺細(xì)胞，提升ER競(jìng)爭(zhēng)地位，并且球蛋白在刺激性激素刺激下形成，這樣一來(lái)很好的抑制絡(luò)氨酸酶活性變化，降低促細(xì)胞增殖效果，很好的組織了子宮癌以及乳腺癌病癥的出現(xiàn)。

植物雌激素對(duì)于乳腺疾病的治療，還體現(xiàn)在乳腺癌細(xì)胞增殖方面，當(dāng)然這方面內(nèi)容還處于研究狀態(tài)，很多機(jī)制并不清晰。相關(guān)研究資料顯示，因?yàn)檠a(bǔ)骨脂素的植物雌激素具有亞型ERα、ERβ，這與雌激素關(guān)系緊密。乳腺組織中兩種受體本身都處于正常狀態(tài)，其中優(yōu)勢(shì)方為ERβ，但是一旦比例發(fā)生變化，作為優(yōu)勢(shì)方的ERβ將會(huì)提升腫瘤出現(xiàn)的可能性。這期間需要補(bǔ)骨脂素的植物在雌激素利用ERα為載體進(jìn)行細(xì)胞增殖，防止細(xì)胞繼續(xù)惡變。

3 某實(shí)驗(yàn)室補(bǔ)骨脂素的植物雌激素實(shí)驗(yàn)操作

①細(xì)胞培養(yǎng)

在細(xì)胞培養(yǎng)中，具體培養(yǎng)對(duì)象為乳腺癌細(xì)胞與子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞，以常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)的方式，選擇小牛血清，含量為10%，融入高糖溶液之后，注意培養(yǎng)的溫度必須為37℃，同時(shí)含有5%的CO2，飽和度濕度也必須符合試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。具體細(xì)胞培養(yǎng)之前，需要提前4d洗滌細(xì)胞，應(yīng)用PBS，之后培養(yǎng)先選擇無(wú)酚紅DMEM培養(yǎng)，這樣就能將細(xì)胞中的雌激素消耗殆盡。

②細(xì)胞增殖試驗(yàn)

細(xì)胞增殖步驟操作期間，首先T47D細(xì)胞傳代必須滿足3次，完成上一培養(yǎng)步驟之后，選擇處于生長(zhǎng)期的細(xì)胞，同時(shí)以胰蛋白酶進(jìn)行消化，含量為0.25%，利用PBS洗滌，確保洗滌次數(shù)在2次以上，及時(shí)往其中加入無(wú)血清DMEM，將細(xì)胞密度控制在有限的孔板內(nèi)，并且保證培養(yǎng)液的體積控制在200μL。等到24h培養(yǎng)結(jié)束之后，細(xì)胞會(huì)發(fā)生明顯變化，緊貼細(xì)胞壁，這樣需要將細(xì)胞轉(zhuǎn)換為1×10-8mol·L-1ICI182，780，在此條件下受試物必須設(shè)置不同復(fù)孔，滿足試驗(yàn)需要。將其中的培養(yǎng)液吸去，以酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀為主要檢測(cè)手段進(jìn)行吸光度測(cè)定，并且計(jì)算具體的增殖率。具體增殖率計(jì)算公式如下：

PR（%）=（實(shí)驗(yàn)組A/溶劑對(duì)照組A）×100%

根據(jù)具體試驗(yàn)計(jì)算獲得計(jì)算數(shù)據(jù)，同時(shí)測(cè)定期間因?yàn)門(mén)47D細(xì)胞相同，所以補(bǔ)骨脂素藥物主要為1×10-7mol·L-1，或者是1×10-6mol·L-1。

③細(xì)胞株培養(yǎng)與計(jì)算之后，需要測(cè)定PRmRNA，主要以RTPCR法進(jìn)行檢測(cè)。需要選擇無(wú)酚紅DMEM，含量為5%，將已經(jīng)培養(yǎng)了4d的細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)，以培養(yǎng)瓶為設(shè)備，進(jìn)行無(wú)血清借種，靜置24h之后觀察細(xì)胞的貼壁情況，隨即進(jìn)行試劑提取，根據(jù)藥物說(shuō)明書(shū)應(yīng)用，將試驗(yàn)情況詳細(xì)記錄。

④流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)步驟中，仔細(xì)觀察細(xì)胞中ER-α，ER-β變化情況，并且準(zhǔn)確記錄。與此同時(shí)還需要與上述的細(xì)胞培養(yǎng)銜接，觀察靜置24h后的細(xì)胞壁變化。時(shí)間加到48h，并且洗滌細(xì)胞，用PBS洗滌次數(shù)為2，進(jìn)行細(xì)胞重懸，以5%血清為輔助，將ER-α，ER-β抗體進(jìn)行冰孵，時(shí)間為40min。避光放置，以免因?yàn)楣庹沼绊懺囼?yàn)結(jié)果。最后利用細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞檢測(cè)。

⑤試驗(yàn)操作期間必須仔細(xì)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，所有數(shù)據(jù)結(jié)果都必須以±s的形式表示，同時(shí)利用數(shù)據(jù)處理軟件將數(shù)據(jù)專業(yè)處理，參考統(tǒng)計(jì)學(xué)原理展開(kāi)檢驗(yàn)分析。