蘇占輝，李冬云，孫 寒，趙春穎，謝利德

（承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所/河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室，河北承德 067000）

《中國藥典》規(guī)定，升麻藥材是毛茛科植物升麻、興安升麻、大三葉升麻的干燥根莖。興安升麻Cimicifuga dahurica(Turcz.)Maxim為毛茛科金蓮花亞科多年生草本植物，又稱北升麻、窟窿牙根、苦老菜根[1-2]，主產(chǎn)于我國華北、東北地區(qū)。興安升麻幼苗可食，通常根莖入藥。研究發(fā)現(xiàn)，興安升麻地上部分富含三萜皂苷成分，抗炎、抗病毒等藥理作用明顯[3-5]，具有一定的開發(fā)應(yīng)用前景。由于同屬植物眾多，為有效區(qū)分興安升麻，本研究對興安升麻地上部分莖、葉的顯微結(jié)構(gòu)進行了觀察，以期為興安升麻質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 主要儀器 BT-2型顯微鏡及攝像裝置（日本Olympus公司），TK-218型恒溫攤片烤片機（湖北泰維醫(yī)療科技有限公司），RM2125型常規(guī)輪轉(zhuǎn)石蠟切片機（德國Leica公司），恒溫箱（天津?qū)嶒炘O(shè)備廠），CSR-1-30型超純水機（北京愛思泰克科技開發(fā)有限責(zé)任公司）。

1.2 材料 興安升麻地上部分，采自河北省承德市豐寧縣，經(jīng)承德醫(yī)學(xué)院趙春穎教授鑒定為毛茛科植物興安升麻。

1.3 試藥 番紅、固綠、乙醇、冰醋酸、甲醛、二甲苯、石蠟、稀甘油、水合氯醛，均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 石蠟切片法

2.1.1 方法：⑴取材和固定。取興安升麻的莖、葉處理干凈，按照直徑、長度≤0.5cm進行切割。將處理后的材料放在固定液（FAA液）中24h，固定液的用量約是植物的50倍。因升麻莖髓部較大，固定過程中用鑷子輕輕夾住莖的外圍擠壓排氣，每1h一次，直到第四次輕擠時莖的中心沒有氣泡冒出為止[6]。⑵脫水、透明、包埋、切片。固定后的材料在蒸餾水中浸泡，每1h更換一次，更換6次后梯度乙醇（50%、70%、85%、95%、100%）脫水，100%乙醇重復(fù)一次[8]；脫水后，梯度二甲苯（濃度分別為50%、75%、100%）透明，100%二甲苯重復(fù)浸泡一次。透明后的材料浸蠟3次后包埋，切片，厚度為5μm。⑶染色制片。用粘附劑將展平的蠟片貼于載玻片上，烘干后脫蠟。采用固綠番紅雙重染色法染色，最后用加拿大樹膠封片，置于顯微鏡下觀察。

2.1.2 結(jié)果：興安升麻莖被番紅染成紅色的為木質(zhì)部的導(dǎo)管部分，木質(zhì)部外圍被固綠染成綠色的為韌皮部的篩管部分。鏡下觀察可見，興安升麻的莖中心髓部較大，莖表皮細(xì)胞排成一列，完整、有規(guī)律，表皮細(xì)胞上有腺毛，靠近皮層的細(xì)胞壁明顯增厚；興安升麻葉中導(dǎo)管細(xì)胞明顯。見圖1-2：

圖1 興安升麻莖的木質(zhì)部和韌皮部

2.2 粉末制片法

2.2.1 方法：⑴稀甘油裝片。取少量莖葉粉末放在載玻片中間，滴加2滴稀甘油，輕輕攪拌后用蓋玻片封片顯微鏡鏡下觀察。⑵水合氯醛裝片。取少量莖葉粉末放在載玻片中間，滴加2滴水合氯醛溶液，輕輕攪勻后于酒精燈上微微加熱，冷卻后再滴加一滴稀甘油，蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去多余液體，顯微鏡下觀察。

2.2.2 結(jié)果：莖、葉粉末用水合氯醛和稀甘油制片，可在粉末中觀察到大量的導(dǎo)管，還可以觀察到針晶、淀粉粒、針晶束及柱晶；水合氯醛透化制片觀察的效果較好。見圖3-4：

圖3 莖葉粉末中導(dǎo)管(水合氯醛透化)

圖4 莖葉粉末中導(dǎo)管(稀甘油透化)

2.3 表面制片法

2.3.1 方法：用鑷子撕取升麻細(xì)莖的一小片表皮，制成0.2cm×0.5cm的小塊，置于載玻片上，滴加蒸餾水后蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去多余液體，置于顯微鏡下觀察。

2.3.2 結(jié)果：鏡下觀察可見氣孔，平軸式，副衛(wèi)細(xì)胞兩個，莖表皮細(xì)胞細(xì)長，排列較整齊有規(guī)律，無細(xì)胞間隙。見圖5-6：

圖5 興安升麻莖表皮氣孔

圖6 興安升麻莖表皮

3 討論

本研究主要觀察了興安升麻莖葉的顯微結(jié)構(gòu)。石蠟切片旨在觀察植物橫切面的結(jié)構(gòu)特征，本研究中石蠟切片HE染色結(jié)果顯示，興安升麻莖的基本顯微結(jié)構(gòu)特征典型，木質(zhì)部和韌皮部組織分化顯著，表皮細(xì)胞層完整有規(guī)律。表面制片主要是觀察植物表皮組織的形態(tài)特征，本研究中表面制片能清晰地觀察到興安升麻的氣孔、表皮細(xì)胞的特征，方法簡單可行。粉末制片法一般采用甘油醋酸試液或水合氯醛試液處理，以清楚地觀察細(xì)胞組織的顯微結(jié)構(gòu)。本研究中粉末制片能夠清晰地觀察到針晶等細(xì)胞后含物的結(jié)構(gòu)特征；但粉末法制片時透化試劑的選擇可影響辨識效果，如本研究中水合氯醛制片的效果優(yōu)于稀甘油制片。本研究觀察到的顯微結(jié)構(gòu)特征可為興安升麻地上部分的鑒別提供依據(jù)，并能為其生藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考。

（收稿日期：2018-01-29）