黃穎 石亞玲 劉艷霞 譚明凱

（廣州市第八人民醫(yī)院 廣州 白云 510440）

近年來(lái)，D-二聚體（DD）作為體內(nèi)交聯(lián)纖維蛋白特異性降解產(chǎn)物，其定量檢測(cè)對(duì)血栓相關(guān)疾病的診斷、療效判斷及評(píng)價(jià)預(yù)后有重要的價(jià)值。目前DD檢測(cè)多使用乳膠增強(qiáng)免疫比濁法，但由于不同廠家使用不同的抗DD抗體，不同試劑測(cè)定的結(jié)果缺乏可比性[1]。鑒于當(dāng)下檢測(cè)DD的儀器和方法多種多樣，本實(shí)驗(yàn)主要針對(duì)積水D-二聚體試劑盒在STA-R型全自動(dòng)血凝分析儀上的性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)內(nèi)容包括：批內(nèi)精密度、日間精密度、準(zhǔn)確度、檢測(cè)低限和線性檢測(cè)范圍。

1.材料與方法

1.1 儀器與試劑

STA-R型全自動(dòng)血凝分析儀；D-二聚體檢測(cè)試劑（批號(hào)836RHL）、定標(biāo)液（批號(hào)804REL）及高、低值質(zhì)控品（批號(hào)805RFL），購(gòu)自積水醫(yī)療株式公社。

1.2 方法

1.2.1 批內(nèi)精密度 取低值質(zhì)控、高值質(zhì)控和混合血漿各一支，分別重復(fù)檢測(cè)10次，計(jì)算批內(nèi)精密度的CV和SD。判斷標(biāo)準(zhǔn)按照廠家要求，批內(nèi)精密度CV＜10%。

1.2.2 日間精密度 參照CLSI EP15-A2文件，使用高、低值室內(nèi)質(zhì)控物各1瓶，每瓶平均分5份，每天測(cè)4次，連續(xù)測(cè)5天，計(jì)算日間精密度的CV和SD?？山邮芊秶凑諒S家要求，日間精密度CV＜15%。

1.2.3 準(zhǔn)確度驗(yàn)證 對(duì)衛(wèi)生部檢驗(yàn)中心2017年發(fā)放的D-二聚體檢測(cè)（DDU）兩次共4個(gè)不同批號(hào)的室間控制品進(jìn)行檢測(cè)，與允許范圍進(jìn)行比對(duì)，計(jì)算絕對(duì)偏倚和相對(duì)偏倚（%）。

1.2.4 檢測(cè)低限的確認(rèn) 測(cè)定空白樣本（生理鹽水）20次，計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差。按照99.7%可能性定義檢測(cè)低限（lower limit of detection，LLD），LLD=x空白±3s空白。

1.2.5 線性測(cè)定范圍確認(rèn) 參考NCCLS EP6A文件，采用廠家專用高值試劑（H）與生理鹽水（L），按照10L、1H+9L,2H+8L、3H+7L……9H+1L、10H比例配置10個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度梯度測(cè)定2次，求均值，將實(shí)測(cè)均值與理論值作比較.計(jì)算SE%，回歸方程y=bX+a，r2，結(jié)果要求SE%≤10%，b值在1±0.03范圍內(nèi)，r2≥0.975。

2.結(jié)果

2.1 積水D-二聚體檢測(cè)試劑的批內(nèi)精密度CV＜10%，符合廠家要求。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 批內(nèi)精密度測(cè)定結(jié)果

2.2 積水D-二聚體檢測(cè)試劑的日間精密度CV＜15%，符合廠家要求。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 日間精密度測(cè)定結(jié)果

2.3 準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果

對(duì)衛(wèi)生部檢驗(yàn)中心2017年發(fā)放的D-二聚體檢測(cè)（DDU）兩次共4個(gè)不同批號(hào)的室間控制品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果均在允許范圍內(nèi)，可接受，檢測(cè)值與靶值的絕對(duì)偏倚為0.09～0.53，相對(duì)偏倚為10.11%～18.75%。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 室間質(zhì)評(píng)控制品驗(yàn)證結(jié)果

2.4 檢測(cè)低限驗(yàn)證結(jié)果

連續(xù)測(cè)定空白樣本（生理鹽水）20次，均值為-0.12，標(biāo)準(zhǔn)差為0.19，按照99.7%的可信限，LLD=x空白±3s空白=-0.12+0.19*3=0.45μg/mL。

2.5 積水D-二聚體檢測(cè)試劑的線性檢測(cè)范圍為0～61.66μg/mL?；貧w方程為y=0.9886x+0.0578，r2=0.9992，線性結(jié)果可接受。結(jié)果見(jiàn)表4。

3.討論

檢測(cè)系統(tǒng)或方法的分析性能評(píng)價(jià)是臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理的重要內(nèi)容。由于D-二聚體高度的敏感性和陰性預(yù)示能力，其定量結(jié)果在深靜脈血栓（DVT）和肺栓塞（PE）的排除、彌散性血管內(nèi)凝血（DIC）的診斷及溶栓治療效果檢測(cè)等方面的臨床應(yīng)用價(jià)值已得到普遍認(rèn)可?？紤]到D-二聚體檢測(cè)在定標(biāo)品、試劑等方面暫無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，本實(shí)驗(yàn)除了參照CLSI相關(guān)文件，也將廠家提供的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)納入其中，對(duì)積水D-二聚體試劑檢測(cè)結(jié)果的精密度、準(zhǔn)確度、檢測(cè)低限和線性檢測(cè)范圍進(jìn)行了評(píng)價(jià)。

表4 線性區(qū)域測(cè)定值和理論值

通過(guò)精密度驗(yàn)證可以看出，積水D-二聚體檢測(cè)試劑批內(nèi)精密度CV＜10%，日間精密度CV＜15%，符合廠家提供的標(biāo)準(zhǔn)，精密度驗(yàn)證通過(guò)。

準(zhǔn)確度也是檢測(cè)系統(tǒng)重要的分析性能之一。本科參考CLSIEP15A文件，對(duì)2017年衛(wèi)生部檢驗(yàn)中心發(fā)放的室間控制品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果與“靶值”進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果表明，4份控制品的結(jié)果均在室間質(zhì)評(píng)要求的范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果可靠。

檢測(cè)低限（LLD）為樣品單次檢測(cè)可以達(dá)到的檢測(cè)響應(yīng)量對(duì)應(yīng)的分析物量。檢測(cè)系統(tǒng)或方法對(duì)小于或等于檢測(cè)低限的分析物量只能報(bào)告為“無(wú)分析物檢出”。通常以x空白±2s空白和x空白±3s空白分別估計(jì)95.0%和99.7%兩種可能性。積水D-二聚體檢測(cè)試劑在STA-R型全自動(dòng)血凝分析儀上最低檢測(cè)限，按照99.7%的可信限為0.45μg/mL，低于積水廠家的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)檢測(cè)范圍的低限（0.5μg/mL）。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，D-二聚體的線性檢測(cè)范圍為0～61.66μg/mL，說(shuō)明書(shū)提供的線性范圍為0.5～60μg/mL。結(jié)合檢測(cè)低限和線性檢測(cè)范圍結(jié)果，廠家提供的檢測(cè)范圍0.5～60μg/mL可接受，超出60μg/mL的，直接報(bào)告濃度大于60μg/mL。

通過(guò)對(duì)積水醫(yī)療株式公社D-二聚體檢測(cè)試劑在STA-R型全自動(dòng)血凝分析儀上進(jìn)行的性能評(píng)價(jià)可以發(fā)現(xiàn)，其精密度、檢測(cè)低限和線性測(cè)量范圍都達(dá)到廠家聲明的性能要求，其準(zhǔn)確度也通過(guò)室間質(zhì)評(píng)得以驗(yàn)證，可應(yīng)用于臨床檢測(cè)。