針刺對急性離心運動后大鼠骨骼肌肌糖原的影響

黃巧婷

（成都大學(xué) 四川 成都 610106）

肌糖原是機體運動時骨骼肌收縮的主要能源物質(zhì)，長時間耐力運動易引起體內(nèi)肌糖原含量劇減、運動能力下降，引起機體產(chǎn)生運動性疲勞。針刺在緩解運動性疲勞方面已得到了國內(nèi)外多位學(xué)者的證實。顧一煌等發(fā)現(xiàn)力竭運動后艾灸足三里、關(guān)元穴等穴位小鼠骨骼肌內(nèi)肌糖原及肝臟中肝糖原含量顯著提高，且小鼠的力竭時間明顯延長，運動能力顯著提高。本研究通過針刺干預(yù)一次性力竭離心運動后大鼠的左側(cè)腿腓腸肌，探討針刺對長時間離心運動后肌糖原恢復(fù)的影響，以期獲得針刺對運動性疲勞恢復(fù)的相關(guān)機制。

1、研究對象與方法

1.1、研究對象

雄性健康SD大鼠，共24只，體重為215.8±14.2g，采用國家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動物飼料分籠飼養(yǎng)，自由飲食。室溫控制在20±3℃，相對濕度維持在60%～75%，并保持12小時光照。

1.2、研究方法

1.2.1、動物分組與運動方式

大鼠先進行為期3天的適應(yīng)性喂養(yǎng)，采用隨機數(shù)表法將大鼠隨機分為4組，每組6只，為安靜對照組，運動后12h組、運動后24h組與運動后48h組。正式實驗前3天，運動后12h組、運動后24h組與運動后48h組大鼠以10米/分，坡度為0°進行適應(yīng)跑臺訓(xùn)練（跑臺采用杭州段氏制作，型號：BCPT－98型）。大鼠開始正式實驗時，將運動后12h組、運動后24h組與運動后48h組大鼠進行一次力竭性離心運動，運動后即刻對大鼠左側(cè)腿腓腸肌內(nèi)側(cè)進行針刺處理（方法：大鼠正臥位，取左側(cè)腿腓腸肌內(nèi)側(cè)進行斜刺進針，進針角度約為30°，留針5min）。運動模型參考Armstrong及田野所建立的離心運動模型，具體運動方案為：速度：25米/分、坡度：-16°，下坡跑直至力竭。

1.2.2 取樣

2%的戊巴比妥鈉按2.3 ml／kg體重進行腹腔注射麻醉，迅速分離腓腸肌內(nèi)側(cè)頭，并于冰上切取約3×3×5mm大小組織塊，投入事先放入液氮的正己烷內(nèi)，6s后迅速取出組織塊并用錫紙包好，轉(zhuǎn)至－80℃的冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 免疫組化染色測肌糖原含量

取出凍好的組織塊樣本，于恒冷切片機內(nèi)切片，厚度為6μm，并按如下免疫組化染色流程進行染色。具體實驗流程：

1）冰凍切片，吹風(fēng)機冷風(fēng)吹干，Carnoy固定劑固定10min，PBS沖洗5min×3次；

2）0.5%高碘酸水溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用）5min, PBS漂洗5 min×3次；

3）Schiff試劑（現(xiàn)配現(xiàn)用）10min；

4）亞硫酸氫鈉溶液，5min×3次；

5）Mayer蘇木精復(fù)染30s；

6）流水沖洗5min；

7）樹脂封片。

光學(xué)顯微鏡采集圖像后用IPP-6.0軟件進行分析，獲取每組圖片與其陰性對照圖片對比后的平均光密度值，進而推算出每組大鼠肌糖原含量。

1.3、數(shù)據(jù)處理

所有實驗結(jié)果均采用SPSS19.0進行統(tǒng)計學(xué)處理，組間進行獨立樣本T檢驗。結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，顯著性水平定為，非常顯著性差異為P〈0.01，顯著性差異為P〈0.05。

2、研究結(jié)果

2.1、各組大鼠腓腸肌肌糖原免疫組化結(jié)果

圖1 實驗各組腓腸肌αB-crystallin免疫組化圖例

圖注：圖中給出的是各組腓腸肌肌糖原橫切面免疫組化情況。A圖為陰性對照組；B圖為安靜對照組；C圖為運動后12h組針刺腿；D圖為運動后12h組非針刺腿；E圖為運動后24h組針刺腿；F圖為運動后24h組非針刺腿；G圖為運動后48h組針刺腿；H圖為運動后48h組非針刺腿。

實驗各組大鼠腓腸肌肌糖原含量變化見表1。急性離心運動后，隨著運動后時間的延長各組大鼠腓腸肌肌糖原含量逐漸增加。運動后24h組肌糖原含量與安靜對照組相比具有顯著差異（P〈0.05），運動后48h組肌糖原含量與安靜對照組相比具有非常顯著差異（P〈0.01）；運動后12h組針刺腿肌糖原含量顯著高于非針刺腿（P〈0.05），運動后24h組針刺腿肌糖原含量顯著高于非針刺腿（P〈0.01），而運動后48h組針刺腿肌糖原含量與非針刺腿相比無顯著性差異（P＞0.05）。

表1 實驗各組大鼠腓腸肌肌糖原含量比較（n=6）

3、分析與討論

肌糖原作為骨骼肌收縮的主要能源物質(zhì)，骨骼肌中肌糖原含量的高低對機體運動能力起著重要作用，尤其是耐力性運動項目，肌糖原儲備是決定其運動能力的重要因素之一。長期離心運動會使機體內(nèi)的糖原含量急劇減少，機能下降，導(dǎo)致運動性疲勞的發(fā)生，影響運動訓(xùn)練效果。本研究結(jié)果顯示，力竭離心運動后，隨著運動后時間的延長各組大鼠腓腸肌肌糖原含量逐漸增加。大鼠于運動后24h，腓腸肌內(nèi)肌糖原含量顯著高于安靜對照組，且以此趨勢持續(xù)至運動后48h（運動后48h組肌糖原含量顯著高于安靜對照組，P〈0.01）。提示大鼠在一次力竭離心運動后，腓腸肌肌糖原含量在運動后12h即出現(xiàn)了超量恢復(fù)。前蘇聯(lián)馬特維也夫教授于1950率先提出超量恢復(fù)理論，隨后得到了我國學(xué)者的普遍認(rèn)同，廣泛應(yīng)用到運動訓(xùn)練實踐，并產(chǎn)生了較為深遠(yuǎn)的影響。超量恢復(fù)是指機體在一定時間運動后，隨著恢復(fù)時間的延長，體內(nèi)的能源物質(zhì)如ATP、蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物等不僅恢復(fù)到運動前水平，甚至超過原有水平的現(xiàn)象。大多數(shù)研究表明長時間耐力運動后，機體于運動后48h或更長時間體內(nèi)的肌糖原才能完全恢復(fù)，若運動后采取高糖膳食（碳水化合物的攝入量：500～600g），機體內(nèi)的肌糖原和肝糖原可在24h后完全恢復(fù)。本研究結(jié)果顯示，大鼠在一次力竭性離心運動后，在給予正常飲食的條件下，腓腸肌肌糖原可在運動后24h基本恢復(fù)完全。

力竭性離心運動后12h組與24h組大鼠針刺腿肌糖原含量顯著高于非針刺腿。而運動后48h，與非針刺腿相比，針刺腿腓腸肌肌糖原含量無明顯變化。陳佩輝等早期發(fā)現(xiàn)，針刺治療運動導(dǎo)致的骨骼肌損傷及DMOS（延遲性肌肉酸疼）效果非常顯著。盧鼎厚等通過大負(fù)荷運動后施予針刺干預(yù)來觀察骨骼肌內(nèi)部的結(jié)構(gòu)變化，發(fā)現(xiàn)針刺對骨骼肌內(nèi)actin蛋白等的代謝具有顯著影響。提出針刺主要是通過調(diào)節(jié)或促進符合運動后骨骼肌收縮蛋白的變化，促使其合成代謝與分解代謝達(dá)到平衡來實現(xiàn)其加速恢復(fù)機體損傷的作用。但對于體內(nèi)肌糖原的變化，盧鼎厚老師并沒有給出相應(yīng)結(jié)論。而本實驗發(fā)現(xiàn)，大負(fù)荷離心運動后，12h針刺腿大鼠腓腸肌肌糖原含量就已顯著高于安靜對照組，且該變化一直持續(xù)到運動后24h，但12h非針刺腿腓腸肌肌糖原含量與安靜對照組相比，卻無顯著差異，提示針刺可加速機體內(nèi)肌糖原合成，使超量恢復(fù)的時間提前。謝爾曼等研究表明，有效地運用超量恢復(fù)原理可以更高效的進行運動鍛煉以達(dá)到更好的運動效果。通常在機體超量恢復(fù)階段進行下一次運動訓(xùn)練，其效果最佳，更有助于機體運動能力的提高。因為在這個階段，人體具有最豐富的能源物質(zhì)和機能水平，若適當(dāng)?shù)募哟筮\動負(fù)荷便可促進機體形成更高水平的超量恢復(fù)。但下一次訓(xùn)練時間太早或太遲，其訓(xùn)練效果均會受到影響甚至無效。因此，當(dāng)機體進行不同程度或目的的訓(xùn)練時，應(yīng)嚴(yán)格把控其間歇時間，如將下次訓(xùn)練課內(nèi)容安排在機體超量恢復(fù)階段，以期將機體超量恢復(fù)水平發(fā)揮至最高。此外，田中等研究發(fā)現(xiàn)，機體在進行100米跑后，體內(nèi)的磷酸肌酸在運動后2～5min即可恢復(fù)完全甚至高于運動前水平，而長時間耐力運動后，機體內(nèi)肌糖原含量大約在運動后15min左右出現(xiàn)超量恢復(fù)。本研究結(jié)果顯示，一次力竭性離心運動后，腓腸肌內(nèi)肌糖原于運動后24h出現(xiàn)超量恢復(fù)，而針刺干預(yù)可將機體內(nèi)肌糖原的超量恢復(fù)時間提前至運動后12h，更有利于機體恢復(fù)。本研究的完成可為實際比賽及運動訓(xùn)練時間的安排、運動性疲勞的緩解及恢復(fù)提供理論依據(jù)。

4、結(jié)論

針刺可通過內(nèi)源性作用機制促機體肌糖原的合成，使超量恢復(fù)的時間提前。