劉桂東

【摘要】建立鹽酸氛澳索吸入劑的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。

【關(guān)鍵詞】鹽酸氨溴索吸入劑 細(xì)菌內(nèi)毒素 干擾試驗(yàn)

方法：依照《中國(guó)藥典》2015年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法試驗(yàn)和結(jié)果判斷，采用稀釋法進(jìn)行試驗(yàn)。

結(jié)果：以細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水對(duì)鹽酸氨溴索吸入劑進(jìn)行稀釋，對(duì)鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)最大不產(chǎn)生干擾的濃度為0.1mg·ml-1，本文選擇的不干擾濃度為0.025mg·ml-1，使用0.125EU·ml-1的鱟試劑可對(duì)其進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

結(jié)論：本細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法多次試驗(yàn)結(jié)果均符合規(guī)定，可用于其質(zhì)量控制。

鹽酸氨溴索為目前臨床上應(yīng)用最廣的一種黏痰溶解劑，其能刺激肺泡，減少呼吸道粘液腺分泌，降低痰液及纖毛的粘著力，并增加支氣管纖毛的運(yùn)動(dòng)，使黏痰易于咳出。

鹽酸氨溴索于1979年由德國(guó)勃林格殷格翰公司研發(fā)上市，并在日本、歐洲等較多國(guó)家上市。霧化吸入用于治療急慢性肺部疾病的效果具有局部起效，見效快，副作用小等優(yōu)點(diǎn)。本文針對(duì)鹽酸氨溴索吸入劑的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行研究。

一、實(shí)驗(yàn)材料

鹽酸氨溴索吸入劑（德國(guó)勃林格殷格翰國(guó)際有限公司，批號(hào)42207536，42207537，42207538）；細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（WSE）；鱟試劑（TAL，0.25EU·ml-1，湛江安度斯生物有限公司；0.125EU·ml-1，湛江安度斯生物有限公司；0.125EU·ml-1，湛江博康海洋生物有限公司）；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（BET，湛江安度斯生物有限公司）。

二、方法與結(jié)果

（1）細(xì)菌內(nèi)毒素限值的確定L=5EU·ml-1。

（2）鱟試劑靈敏度復(fù)核參照藥典四部細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法，進(jìn)行鱟試劑的靈敏度復(fù)核試驗(yàn)三種鱟試劑的靈敏度均在0.5λ～2λ之間，可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

（3）干擾預(yù)試驗(yàn)現(xiàn)有鱟試劑靈敏度分別為0.25，0.125，0.06EU·ml-1。MVD=cL/λ，L=5EU·ml-1，計(jì)算可得，鹽酸氨溴索吸入劑的有效稀釋濃度為0.1～0.012mg·ml-1。選取標(biāo)示靈敏度為0.25EU·ml-1的鱟試劑進(jìn)行干擾預(yù)試驗(yàn)。以BET水對(duì)供試品原液進(jìn)行稀釋，使其終濃度分別為2，1，0.1，0.05，0.025，0.0125mg·ml-1，將濃度為1，0.1，0.05，0.025，0.0125mg·ml-1系列溶液記為NPC；同時(shí)在濃度為2，1，0.1，0.05，0.025mg·ml-1溶液中添加等體積4人濃度的內(nèi)毒素溶液，使每一濃度試驗(yàn)液中均含有2λ濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素，將此系列溶液記為PPC。取靈敏度為0.25EU·ml-1，的TAL試劑，分別與上述NPC和PPC溶液進(jìn)行反應(yīng)，每一濃度重復(fù)做2管。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，最高不干擾濃度為0.1mg·ml-1。

（4）正式干擾試驗(yàn)依據(jù)上述預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可知三種靈敏度的鱟試劑均可用。選擇0.125EU·ml-1的鱟試劑進(jìn)行試驗(yàn)，相應(yīng)的濃度為0.025mg·ml-1。以BET水將三批鹽酸氨溴索吸入劑原液分別稀釋至終濃度為0.05mg·ml-1和0.025mg·ml-1，以0.025mg·ml-1溶液作為供試品對(duì)照液，試驗(yàn)重復(fù)2管。用0.05mg·ml-1的氨溴索溶液將細(xì)菌內(nèi)毒素溶液（WSE）配成濃度為2λ，λ，0.5λ和0.25λ四個(gè)系列濃度（即WSE濃度分別為0.25，0.125，0.06，0.03EU·ml-1），試驗(yàn)重復(fù)4管，此系列為氨溴索系列。用BET水將WSE配成2λ，λ，0.5λ和0.25λ四個(gè)系列濃度，試驗(yàn)重復(fù)2管，此系列為BET水系列。同時(shí)以BET水為陰性對(duì)照，試驗(yàn)重復(fù)2管。用湛江安度斯生物有限公司和湛江博康海洋生物有限公司生產(chǎn)的靈敏度為0.125EU·ml-1的TAL進(jìn)行干擾試驗(yàn)。當(dāng)供試品對(duì)照夜和BET水均為陰性時(shí)，結(jié)果按公式Eg=1g-1（∑Xs/4）和Et=1g-1（∑Xt/4）計(jì)算，其中Xs和Xt分別為BET水系列和氨溴索系列各反應(yīng)終點(diǎn)細(xì)菌內(nèi)毒素濃度的對(duì)數(shù)值。干擾試驗(yàn)結(jié)果見表1和表2。

結(jié)果表明，陰性對(duì)照為陰性且Es在0.5λ～2λ之間，試驗(yàn)有效。Et在0.5λ～2λ之間，符合規(guī)定。吸入用鹽酸氨溴索以BET水稀釋至0.025mg·ml-1濃度時(shí)對(duì)內(nèi)毒素與鱟試劑的凝集無干擾作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]閆冉，陸慧等.一種吸入用盆酸氨溴索溶液[Z].專利，2017.

[2]范倩倩，張波等.注射用鹽酸氨溴索的臨床應(yīng)用現(xiàn)狀與思考[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2015.