萊芙特敏真菌熒光染液對(duì)216例淺部皮膚真菌病的檢出報(bào)告

桑忠強(qiáng) 沈帥帥 張馨 涂玉花 潘宏超 張?jiān)?/p>

【摘要】目的：通過(guò)新型的熒光染液對(duì)淺部皮膚真菌病的致病菌進(jìn)行鏡檢，觀察這一新型染液對(duì)真菌的檢出率；方法：先后用真菌熒光染液A和B將所刮取的鱗屑、甲屑及毛囊內(nèi)容物充分溶解后，將玻片放置在OlympusCX23熒光顯微鏡上的載玻臺(tái)上鏡檢，尋找菌絲和抱子；結(jié)果：應(yīng)用這一新型染液對(duì)常見(jiàn)皮膚淺部真菌的檢出率達(dá)到77.8%，相對(duì)于傳統(tǒng)的氫氧化鉀（KOH）溶液鏡檢法檢出率高，檢出時(shí)間短，辮識(shí)度高；結(jié)論：萊芙敏特真菌熒光染液對(duì)淺部致病真菌的檢出率高，快速簡(jiǎn)單容易操作，可以為臨床醫(yī)生對(duì)淺部真菌感染的診斷和治療提供一個(gè)快捷準(zhǔn)確的方法。

【關(guān)鍵詞】萊芙敏特真菌熒光染液；淺部皮膚真菌病；檢出報(bào)告

淺部真菌病是一種主要寄生在人體皮膚表層的常見(jiàn)真菌引起的一種感染，其致病菌包括皮膚癬菌、念珠菌、霉菌以及馬拉色菌等，臨床上常見(jiàn)的淺部真菌病有花斑癬，糠秕孢子菌毛囊炎，股癬，手癬，腳癬以及甲癬等[1，2]，傳統(tǒng)的真菌鏡檢法為KOH鏡檢法，這種方法有一定的優(yōu)勢(shì)，但存在檢出率低的問(wèn)題[3，4]，并且檢測(cè)花費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)，而真菌培養(yǎng)雖然可以準(zhǔn)確鑒定，但是操作起來(lái)較為復(fù)雜，且出報(bào)告的所需時(shí)間較長(zhǎng)，給臨床醫(yī)生的診治帶來(lái)一定的困擾。我科室從2017年5月至7月期間對(duì)門(mén)診就診的淺部真菌病患者的皮屑做真菌熒光染色鏡檢，并對(duì)鏡檢情況進(jìn)行匯總，現(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下：

1 資料和方法

1.1 資料

1.1.1 病人資料

統(tǒng)計(jì)我科2017年5月至2017年7月間的門(mén)診就診時(shí)初步診斷為淺部真菌感染的患者分別進(jìn)行真菌熒光染液鏡檢，診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《中國(guó)臨床皮膚病學(xué)[5]》，這期間鏡檢的病人數(shù)為216人次，男133例，女83例，其中臨床診斷為股癬的有59例，花斑癬的有34例，糠秕孢子菌毛囊炎有12例，手癬30例，腳癬42例，甲癬39例，鏡檢陰性患者為60例，其中12例為手癬，22例為腳癬，26例為甲癬，年齡2-75歲，平均37.3±1.2歲，病程5d-28年，平均4.2年。入選病例均確定真菌熒光檢測(cè)前1月內(nèi)未口服或外用過(guò)抗真菌藥。

1.1.2 試劑材料及儀器

萊芙敏特真菌染液試劑盒（A液和B液200T），OlympusCX23熒光顯微鏡Toupeam Industrial Digtal攝像頭，Toupview軟件，載玻片，玻片，刮刀，紅外接種滅菌器。

1.2 方法

1.2.1 染色步驟

（1）應(yīng)用滅菌過(guò)的刮刀刮取新近被侵染的組織，如癬病的邊緣性損害、新鮮的水庖、頭癬的斷發(fā)、甲真菌病的甲板深層、馬拉色菌毛囊炎的毛囊內(nèi)容物等，并用刮刀均勻涂抹在載玻片上；（2）將載玻片放置在水平位置上，直接向皮屑樣本中央滴一滴染色A液，染色液以覆蓋或淹沒(méi)整個(gè)樣品為準(zhǔn)，使其中成分與多聚物進(jìn)行充分的結(jié)合反應(yīng)，持續(xù)染色2min；（3）2min后，直接向樣本滴上一滴染色B液，染色液以覆蓋或淹沒(méi)整個(gè)樣品為準(zhǔn)，持續(xù)染色2min；（4）蓋上蓋玻片，吸去多余染液，置于熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察；

1.2.2 鏡檢

先用低倍鏡下對(duì)焦（×10），打開(kāi)熒光按鈕，先在低倍顯微鏡下查看目標(biāo)視野，微調(diào)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，目標(biāo)視野對(duì)焦清晰后，換成高倍鏡（×40），微調(diào)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，觀察是否有菌絲及孢子，找到最清晰的視野后，打開(kāi)Toupview軟件，調(diào)節(jié)破片位置及細(xì)準(zhǔn)焦螺旋直至軟件視頻區(qū)出現(xiàn)一個(gè)最清晰的圖像，點(diǎn)擊捕獲，然后保存

2 結(jié)果

（1）對(duì)2017年5月至2017年7月期間的病人的初步診斷以及鏡檢結(jié)果進(jìn)行列表統(tǒng)計(jì)，其中花斑癬34例、糠秕孢子菌毛囊炎12例，股癬59例，手癬30例，腳癬42例，甲癬39例，檢出率分別位100%、100%、100%、60%、47.6%、33.3%，總的檢出率為72.2%.如表1所示。

（2）鏡檢圖片。分別選取各種皮膚淺部真菌病的一張較為典型的真菌熒光鏡檢圖片，如圖1至圖4所示。

3 討論

萊芙敏特真菌熒光染液是一款新型的快速檢測(cè)真菌病原體的產(chǎn)品，可以用于檢測(cè)皮屑、甲屑以及毛囊內(nèi)容物組織中可能存在的各類真菌。該試劑盒中配有染色A液和染色B液，A液是一種含有高純度熒光素的復(fù)合溶液，染液B是一種含特定比例背景光壓制溶液。熒光素將與組織中可能存在的細(xì)胞壁β-多糖結(jié)合，如幾丁質(zhì)和纖維素等，從而標(biāo)記熒光，在特定檢驗(yàn)波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)。相對(duì)于傳統(tǒng)的真菌鏡檢方法，這種新型熒光染液的檢測(cè)方法檢出率較KOH檢測(cè)法檢出率較高，操作起來(lái)方便、高效、快速，可以去除因?yàn)殡s質(zhì)的干擾，相當(dāng)于在真菌的細(xì)胞壁上加上了一個(gè)探針標(biāo)記，只要所刮取的皮屑、甲屑以及毛囊內(nèi)容物中存在真菌，都能被熒光標(biāo)記，從而在特定檢測(cè)波長(zhǎng)下被顯示，大大縮小了鏡下尋找真菌的視野范圍，并能大大縮短尋找時(shí)間，排除了其他因雜質(zhì)、光線折射所造成的干擾，大大提高了檢出率。但同時(shí)，該真菌熒光染液對(duì)手癬、腳癬及甲癬的檢出率較低，分析其原因可能和取材部位有較大關(guān)系，因?yàn)檎契挪科ば家约凹仔嫉慕琴|(zhì)層較厚，熒光染液要對(duì)里面的真菌進(jìn)行標(biāo)記就必須充分溶解角質(zhì)層[6]，分析有可能染液和皮屑的結(jié)合時(shí)間應(yīng)該適當(dāng)延長(zhǎng)，再者，有可能所取的皮屑里面有可能沒(méi)有真菌，比如像甲癬患者其致病菌如皮膚癬菌、酵母菌和霉菌侵犯部位較深，往往可能在甲板下，甲床上，所以當(dāng)取甲癬患者的趾甲屑時(shí)，有可能沒(méi)有刮取到到含有真菌的甲屑，所以造成了甲癬的檢出率較低[7]，而該染液在本次實(shí)驗(yàn)研究中對(duì)花斑癬、馬拉色菌毛囊炎和股癬的檢出率都達(dá)到了100%。

萊芙敏特真菌熒光染液檢測(cè)試劑盒給皮膚科醫(yī)生提供了一個(gè)很好的真菌檢測(cè)方法，對(duì)淺部真菌感染的診治提供了一個(gè)迅捷高效的通道，但同時(shí)臨床醫(yī)生在對(duì)手癬、腳癬以及甲癬患者進(jìn)行熒光染液檢測(cè)時(shí)，還是要結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)以及皮損特征確定最終的治療方案。

參考文獻(xiàn)

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