何新苗 吳培培 趙福蘭 馬曉麗

藥物代謝酶、藥物受體、轉(zhuǎn)運(yùn)體等基因多態(tài)性對(duì)于藥物療效均有一定影響, 并且基因多態(tài)性的影響在不同種族中存在很大的差異。細(xì)胞色素 P450 酶參與約 75%的藥物代謝反應(yīng)。臨床上基于代謝的藥物相互作用大多都是通過對(duì) P450酶亞型的抑制或誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)的［1］。CYP2C8是人細(xì)胞色素P450酶的重亞族, 能代謝多種臨床用藥和內(nèi)源性化合物, 具有重要的藥理和生理作用。CYP2C8的特異性底物主要有紫杉醇、胺碘酮、瑞格列奈、吡格列酮、西立伐他汀、維甲酸、阿莫地喹和氯喹等。在這些藥物的體內(nèi)清除中, CYP2C8發(fā)揮了決定性的作用［2］。查明新疆漢族和維吾爾族不同人群中藥物代謝酶CYP2C8基因多態(tài)性的分布, 對(duì)于探討安全有效的選擇CYP2C8 途徑代謝的治療藥物及確定藥物劑量有重要的意義。因此, 本課題對(duì) CYP2C8中具有功能意義位點(diǎn)的等位基因在新疆漢族和維吾爾族的分布頻率和分布特征進(jìn)行了研究。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取99例新疆漢族、維吾爾族人群作為研究對(duì)象, 其中維吾爾族人群49例(維族組), 50例漢族人群(漢族組)。

1.2 試劑與儀器 采用磁珠法提取血液DNA試劑盒；Marker D2000(J10417, 北京全式金)；Pfu DNA Polymerase(EP101, 天根 )；50×TAE buffer(SD8101-500 ml, Sangon Biotech)；DL2, 000 DNA Marker(3427A, Takara)；6×Loading buffer(9156,Takara)。

核酸蛋白定量儀(Nano-100, 杭州奧康)；凝膠成像系統(tǒng)(Tanon-2500, 上 海天能公司)；梯度PCR儀(MyCycler Thermal Cycler, Bio-Rad, USA)；水平電泳儀(DYCP-31DN型,北京市六一儀器廠)；測序儀(ABI3730xl, ABI)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 DNA提取 取150 μl全血至離心管, 采用磁珠法提取血液, DNA試劑盒提取全血中的DNA, 采用核酸定量儀測定DNA濃度, 電泳檢測DNA完整性。

1.3.2 PCR 擴(kuò) 增反應(yīng) PCR 體系總體積 30 μl, 其中 3 μl 10×Pfu Buffer, 0.6 μl dNTP Mix(10 mM), 0.6 μl 上游引物(10 μM),0.6 μl 下游引物 (10 μM), 0.6 μl Template(模板 -DNA 樣本 ), 0.3 μl Pfu DNA Polymerase Polymerase(2.5 U/μl), 24.3 μl ddH2O2。PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min, 然后95℃ 30 s, 退火溫度55℃, 30 s, 共計(jì)40個(gè)循環(huán), 再于72℃ 60 s, 72℃延伸5 min,4℃終止反應(yīng)。PCR產(chǎn)物送往測序。

1.3.3 引物序列 擴(kuò)增CYP2C8基因所用引物序列。見表1。

表1 擴(kuò)增CYP2C8基因所用引物序列

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)；。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

CYP2C8*3、CYP2C8*4基因SNP新疆維吾爾族和漢族人群中的分布具有多態(tài)性。CYP2C8*3基因rs11572080位點(diǎn)檢測出G和A兩種等位基因, 漢族組檢出G/G、A/G 型的分布頻率分別為100.0%、0；G、A的等位基因分布頻率為100.0%、0。維族組G/G、A/G型的分布頻率分別為91.8%、8.2%,G、A的等位基因分布頻率為95.9%和4.1%；漢族組與維族組該位點(diǎn)的基因型分布頻率和等位基因分布頻率比較, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。CYP2C8*3基因rs10509681位點(diǎn)檢測出T和C兩種等位基因, 漢族組T/T、C/T型的分布頻率分別為100.0%、0；T、C的等位基因分布頻率為100.0%、0,維族組的T/T、C/T型的分布頻率分別為 91.8%、8.2%, T、C的等位基因分布頻率為95.9%和4.1%。漢族組與維族組該位點(diǎn)的基因型分布頻率和等位基因分布頻率比較, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。CYP2C8*4基因rs1058930位點(diǎn)檢測出G和C兩種等位基因, 漢族組的C/C、G/C型的分布頻率分別為98.0%、2.0%；C、G的等位基因分布頻率為99.0%和1.0%。維族組的C/C、G/C型的分布頻率分別為98.0%、2.0%,C、G的等位基因分布頻率為99.0%和1.0%。兩組該位點(diǎn)的基因型分布頻率和等位基因分布頻率比較, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05)。見表 2, 表 3。

表2 SNP位點(diǎn)不同基因型在維族組和漢族組中的分布情況比較［n(%)］

表3 SNP位點(diǎn)不同等位基因在維族組和漢族組中的分布及優(yōu)勢比較［n(%)］

3 討論

CYP2C8基因具有一定遺傳多態(tài)性, 其多態(tài)性是構(gòu)成某些藥物代謝個(gè)體和種族差異的基礎(chǔ)?；蛐筒煌膫€(gè)體在用藥和劑量的選擇上存在較大差別, 因而調(diào)查不同人群、不同種族中CYP2C8等位基因的分布情況具有重要意義［3］。

基于CYP2C8基因的多態(tài)性及其種族分布差異特征, 本研究首次在新疆地區(qū)的漢族和維吾爾族人群中對(duì)的CYP2C8*3基因的rs11572080、rs10509681位點(diǎn)及CYP2C8*4的rs1058930位點(diǎn)進(jìn)行基因多態(tài)性研究。相關(guān)學(xué)者等對(duì)245例中國健康志愿者CYP2C8的基因多態(tài)性研究中發(fā)現(xiàn)CYP2C8*3(rs11572080及 rs10509681)的等位基因頻率為 0［4］,并提出了CYP2C8的多態(tài)性可能不是影響中國人吡格列酮藥代動(dòng)力學(xué)差異的主要原因, 而本次研究發(fā)現(xiàn)rs11572080及rs10509681這兩個(gè)基因位點(diǎn)的2個(gè)變異雜合子均來自于維吾爾族受試者。本次研究結(jié)果提示以上結(jié)論應(yīng)該考慮民族基因多態(tài)性差異的因素。 相關(guān)學(xué)者等［5］進(jìn)行的體外實(shí)驗(yàn)表明,伊馬替尼也經(jīng)CYP2C8 酶代謝, 常見的單體型 CYP2C8* 3 由2 個(gè) SNP(rs11572080 和 rs10509681)組成, 且該突變與伊馬替尼清除率有關(guān)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)維吾爾族和漢族受試者在以上兩個(gè)位點(diǎn)等位基因的分布頻率均存在顯著差異, 為制定不同民族患者的伊馬替尼的個(gè)體化治療提供新思路。

新疆維吾爾族CYP2C8基因突變率高, CYP2C8*3基因的rs11572080、rs10509681位點(diǎn)及CYP2C8*4的rs1058930位點(diǎn)等位基因頻率分布尚未見報(bào)道, 本研究豐富了該基因在我國新疆地區(qū)、不同民族人群中的分布情況, 為進(jìn)一步的研究提供詳細(xì)的資料。為指導(dǎo)臨床制定精準(zhǔn)給藥方案, 提高治療效果和降低不良反應(yīng)提供理論依據(jù)。而CYP2C8相同基因位點(diǎn)在維吾爾族和漢族的基因型頻率和等位基因頻率分布存在顯著性差異, 提示今后在研究該基因位點(diǎn)與某些藥物或疾病的關(guān)系時(shí), 新疆地區(qū)的民族差異是不容忽視的重要因素。