時(shí)小艷
(江蘇食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院,江蘇淮安 223003)
昆明白56日齡雄性小鼠,體重18~22 g,購(gòu)于南京市江寧區(qū)青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)。
試劑:總膽固醇(TC)試劑盒、甘油三酯(TG)試劑盒、高密度脂蛋白(HDL)試劑盒、低密度脂蛋白(LDL)試劑盒,中生北控生物科技股份有限公司提供。
儀器:燒杯、電熱爐、電子天平、動(dòng)物電子秤、注射器、半自動(dòng)生化儀、IGL-LD16G型冷凍高速離心機(jī)(50 mL×4)、島津UV-2700型紫外分光光度計(jì)。
將40只18~22 g健康的昆明白56日齡的雄性小鼠,隨機(jī)分成空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、藥膳高濃度組、藥膳低濃度組4組,每組10只。4組小鼠經(jīng)4周造模后進(jìn)行每日1次給藥治療,連續(xù)灌胃給藥4周。
每日給藥方案如下:空白對(duì)照組,給以普通小鼠飼料和0.4 mL蒸餾水;模型對(duì)照組,給以高脂飼料和0.4 mL蒸餾水;藥膳高濃度組,給以高脂飼料和山楂天麻藥膳原液0.4 mL;藥膳低濃度組,給以高脂飼料和山楂天麻藥膳原液加等量的蒸餾水稀釋液0.4 mL。
采用SPSS13.0 軟件進(jìn)行分析,計(jì)數(shù)資料采用率表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
1.3.1 高脂飼料
高脂飼料的配方為雞蛋黃粉10%,膽酸鹽0.2%,膽固醇1%,豬油10%,普通小鼠飼料78.8%。制備的時(shí)候,在粉碎的普通小鼠飼料中加入膽固醇和雞蛋黃粉混合攪勻,再倒入加熱融化的豬油,最后一起攪拌均勻即可。
1.3.2 山楂天麻藥膳的制作
根據(jù)中醫(yī)學(xué)理論,挑選出山楂、天麻、薏苡仁、皮肚等藥物按一定量組成藥膳。將上述藥物稱(chēng)量取藥后一起粉碎混勻,然后放入燒杯中加入適量的水,浸泡1 h,放在電熱爐上加熱并攪拌煎煮3次,每次煎制時(shí)間為30 min。時(shí)間到后,把用紗布過(guò)濾后得到的濾液收集并混合在另一個(gè)燒杯之中,將獲得的混合濾液蒸發(fā)精制至100 mL,若不足100 mL則補(bǔ)水至100 mL,定容。
1.3.3 小鼠高脂血癥模型建立
將空白對(duì)照組的小鼠,用普通小鼠飼料喂養(yǎng),其他3組全部用高脂飼料喂養(yǎng),進(jìn)行人造高脂血癥模型。模型建立期間,每天觀(guān)察小鼠狀態(tài)、進(jìn)食量和飲水量并記錄,每周測(cè)1次體重,并記錄數(shù)據(jù)。于造模的第4周末,尾靜脈取血,分別測(cè)定小鼠的血清總膽固醇(TC) 含量、甘油三酯(TG) 含量、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C) 含量等指標(biāo)。
1.3.4 進(jìn)食量及飲水量測(cè)定
小鼠在空調(diào)環(huán)境下,有自然光照,溫度23~25℃,濕度控制40%~60%的環(huán)境下喂養(yǎng),均可以自由攝食和飲水。每只試驗(yàn)小鼠都單獨(dú)飼養(yǎng),在鼠籠里放置帶有刻度的飲水容器,按照試驗(yàn)要求測(cè)量記錄進(jìn)食量和飲水量。
1.3.5 指標(biāo)含量測(cè)定
血清TC含量、TG含量、HDL-C含量、LDL-C含量,根據(jù)各試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行測(cè)定。
1.3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
試驗(yàn)期間每周稱(chēng)量小鼠的體重,記錄數(shù)據(jù)并整理。
試驗(yàn)期間小鼠的體重變化見(jiàn)表1,試驗(yàn)期間小鼠的體重變化見(jiàn)圖1。
表1 試驗(yàn)期間小鼠的體重變化 /g
圖1 試驗(yàn)期間小鼠的體重變化
如圖1所示,試驗(yàn)期間各組試驗(yàn)小鼠的體重都有所提高。對(duì)每周稱(chēng)量的各組小鼠體重進(jìn)行比較,空白對(duì)照組的小鼠生長(zhǎng)良好,模型對(duì)照組的小鼠體重增長(zhǎng)明顯,藥膳高濃度組和藥膳低濃度組的小鼠造模期間體重有顯著的增加,經(jīng)過(guò)給藥治療后,小鼠體重增加趨于正常,藥膳高濃度組給藥效果比藥膳低濃度組明顯。
各組小鼠24 h之內(nèi)的飲水量,記錄整理數(shù)據(jù)。試驗(yàn)期間小鼠24 h內(nèi)飲水量的變化見(jiàn)表2,試驗(yàn)期間小鼠24 h內(nèi)飲水量的變化見(jiàn)圖2。
表2 試驗(yàn)期間小鼠24 h內(nèi)飲水量的變化 /mL
從圖2中可看出,造模期間、模型對(duì)照組、藥膳高濃度組和藥膳低濃度組的小鼠飲水量有顯著的增長(zhǎng),經(jīng)過(guò)給藥治療后,模型對(duì)照組沒(méi)有減少趨勢(shì),而藥膳高濃度組和藥膳低濃度組的小鼠飲水量趨于正常,給藥效果明顯。
記錄試驗(yàn)小鼠24 h之內(nèi)的進(jìn)食量,分析小鼠進(jìn)食量的變化。
圖2 試驗(yàn)期間小鼠24 h內(nèi)飲水量的變化
試驗(yàn)期間小鼠24 h內(nèi)進(jìn)食量的變化見(jiàn)表3,試驗(yàn)期間小鼠24 h內(nèi)飲水量的變化見(jiàn)圖3。
表3 試驗(yàn)期間小鼠24 h內(nèi)進(jìn)食量的變化/g
圖3 試驗(yàn)期間小鼠24 h內(nèi)進(jìn)食量的變化
從圖3中可看出,在造模期間,模型對(duì)照組、藥膳高濃度組和藥膳低濃度組的試驗(yàn)小鼠進(jìn)食量有明顯的增加。在經(jīng)過(guò)給藥治療后,模型對(duì)照組沒(méi)有減少的趨勢(shì),而藥膳高濃度組和藥膳低濃度組的小鼠進(jìn)食量下降,接近正常水平,給藥治療效果明顯。
在試驗(yàn)期間測(cè)量小鼠的TC含量,記錄數(shù)據(jù)。
小鼠TC含量的測(cè)定見(jiàn)表4,小鼠TC含量的測(cè)定見(jiàn)圖4。
表4 小鼠TC含量的測(cè)定/mmol·L-1
由圖4可知,空白對(duì)照組小鼠TC含量在給藥前后無(wú)明顯變化。給藥前,除空白組外的其他3組TC含量增加明顯,經(jīng)給藥治療后,模型組沒(méi)有顯著的變化,高濃度組的TC含量比低濃度組下降明顯,高濃度組的治療效果比低濃度組較好。
圖4 小鼠TC含量的測(cè)定
在試驗(yàn)期間測(cè)量小鼠的TG含量,記錄數(shù)據(jù)。
小鼠TG含量的測(cè)定見(jiàn)表5,小鼠TG含量的測(cè)定見(jiàn)圖5。
表5 小鼠TG含量的測(cè)定/mmol·L-1
圖5 小鼠TG含量的測(cè)定
由圖5可知,空白對(duì)照組小鼠TG含量在給藥前后無(wú)明顯變化。給藥前,除空白組外的其他3組TG含量增加明顯,經(jīng)給藥治療后,模型組沒(méi)有顯著的變化,而高濃度組和低濃度組TG含量有所下降,高濃度組的TG含量比低濃度組下降明顯。
在試驗(yàn)期間測(cè)量小鼠的HDL-C含量,記錄數(shù)據(jù)。小鼠HDL-C含量的測(cè)定見(jiàn)表6,小鼠HDL-C含量的測(cè)定見(jiàn)圖6。
表6 小鼠HDL-C含量的測(cè)定/mmol·L-1
圖6 小鼠HDL-C含量的測(cè)定
根據(jù)圖6可知,空白對(duì)照組小鼠HDL-C含量在給藥前后無(wú)明顯變化。給藥前,各組HDL-C含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)給藥治療后,模型組有下降趨勢(shì),而高濃度組和低濃度組HDL-C含量有所上升,高濃度組的HDL-C含量比低濃度組上升較明顯,藥膳高濃度組療效更好。
在試驗(yàn)期間測(cè)量小鼠的LDL-C含量,記錄數(shù)據(jù)。
小鼠LDL-C含量的測(cè)定見(jiàn)表7,小鼠LDL-C含量的測(cè)定見(jiàn)圖7。
表7 小鼠LDL-C含量的測(cè)定/mmol·L-1
根據(jù)圖7可知,空白對(duì)照組小鼠LDL-C含量在給藥前后無(wú)明顯變化。給藥前,除空白組外的其他3組LDL-C含量增長(zhǎng)明顯。經(jīng)給藥治療后,模型組沒(méi)有顯著變化,而高濃度組和低濃度組LDL-C含量有所下降,高濃度組的LDL-C含量比低濃度組下降較明顯,藥膳高濃度組療效比藥膳低濃度組好。
圖7 小鼠LDL-C含量的測(cè)定
血清中甘油三酯及膽固醇含量是降脂功能常用的評(píng)價(jià)指標(biāo)[5]。研究表明,在人造高脂血癥小鼠建立的試驗(yàn)階段,造模4周后,高脂飼料喂養(yǎng)的3組小鼠的TC含量、TG含量和LDL-C含量有明顯升高,HDL-C含量同空白對(duì)照組相比變化不大,經(jīng)過(guò)4周的山楂天麻藥膳的給藥治療后,藥膳高濃度組和藥膳低濃度組的TC含量、TG含量、LDL-C含量相對(duì)于模型對(duì)照組均有明顯下降,而HDL-C含量有所上升,小鼠的精神狀態(tài)良好、毛色光亮,高濃度組給藥后的效果比低濃度組好,說(shuō)明山楂天麻藥膳具有顯著改善高脂血癥小鼠的血脂狀況,有明顯的降血脂作用。