劉冬霞 許偉華 龍輝 胡新年

【摘要】 目的：調(diào)查清遠地區(qū)育齡人群α地中海貧血的基因攜帶率，研究本地區(qū)血紅蛋白A2（HbA2）對診斷α地貧陽性篩查的截斷值。方法：采用法國Sebia Capillarys全自動毛細管電泳儀檢測并結合患者臨床平均紅細胞體積（MCV）、平均紅細胞血紅蛋白量（MCH）值，對2016年1-8月基層單位轉診到本院的7 234人次血細胞分析提示夫婦雙方或一方疑似為地貧表型陽性的育齡青年進行地貧篩查。把HbA2<2.5%、MCV<82 fL和HbA2值介于2.5%～2.8%、MCV<82 fL的標本之間進行比較，同時進行三種常見α缺失和非缺失型地貧基因檢測。結果：在7 234例育齡青年中HbA2<2.5%、MCV<82 fL篩查結果中為α地貧表型的1 090例，其中基因檢測確診為α地貧1 073例，符合率為98.4%（1 073/1 090），17例常見α地貧基因型檢測結果為陰性，其中5例確診為罕見α地貧，12例為缺鐵性貧血；HbA2值介于2.5%～2.8%、MCV<82 fL篩查結果只有血常規(guī)提示為α地貧表型的538例，經(jīng)基因檢測確診為α地貧的411例，檢出率為76.4%（411/538），常見α地貧基因檢測陰性的127例，其中3例確診為罕見α地貧，16例為缺鐵性貧血，108例為孕期婦女疑為孕期生理性貧血。結論：清遠地區(qū)育齡人群α地貧基因攜帶率高，HbA2檢測結果的參考值在α地貧的篩查應用中存有區(qū)域差異，應重新制定本實驗室HbA2的截斷值為2.8%，并且要聯(lián)合血常規(guī)的MCV值同時分析，預防出現(xiàn)漏診、漏防的現(xiàn)象。

【關鍵詞】 α地中海貧血； 毛細管電泳； 基因檢測； HbA2截斷值

【Abstract】 Objective：To research the α-thalassemia gene carrier rate among reproductive age population in Qingyuan area.Method：By using French Sebia Capillarys-2 automatic capillary electrophoresis combined with the patients mean corpuscular volume（MCV） and mean corpuscular hemoglobin（MCH），we checked 7 234 humans who had high risk of thalassemia sent by the grass-roots hospital from January to August 2016.The research detected the group HbA2<2.5%，MCV<82 fL and the group 2.5%

【Key words】 α-thalassemia； Capillary electrophoresis； Gene detection； Cutoff value of HbA2

First-authors address：Maternal and Child Health Hospital of Qingyuan City，Qingyuan 511500，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.18.022

地中海貧血（簡稱地貧）是由于合成血紅蛋白的珠蛋白鏈合成不足或結構發(fā)生突變，導致人體內(nèi)α鏈和β鏈比例失調(diào)，從而不能或者生成無效血紅蛋白而導致的單基因溶血性遺傳病[1]。目前，由于政府的干預和大力宣傳的作用，人們對地貧的了解有了進一步的提升。主要通過婚前或孕期檢查對夫婦雙方進行地貧血液學篩查，若發(fā)現(xiàn)夫婦雙方均為同種類型地貧攜帶者，還需對胎兒進行地貧基因產(chǎn)前診斷[2]。國家衛(wèi)計委在全國地貧高發(fā)區(qū)推出了很多優(yōu)惠政策，并得到地方政府和醫(yī)院的大力支持。本院從2015年下半年開始免費收取清遠市管轄區(qū)內(nèi)的各基層醫(yī)院符合地貧檢測條件的育齡青年進行血紅蛋白成分分析，應用血紅蛋白電泳法進行篩查和檢測，夫婦均為地貧基因攜帶者可繼續(xù)免費進行地貧基因檢測，地貧基因檢測為同型地貧的可免費產(chǎn)前診斷[3]。臨床上一般以HbA2>3.5%作為疑似β地貧攜帶者，HbA2<2.5%為疑似輕型α地貧攜帶者，出現(xiàn)異常HbH帶的為血紅蛋白H?。ㄖ虚g型α地貧）[4]。血紅蛋白電泳檢測對α和β地貧基因攜帶者的篩查診斷起到了有效的輔助作用，但在實際應用中常因人群特點或地域不同存在一定的差異[5]。本研究采用毛細管電泳的方法檢測分析HbA2，聯(lián)合平均紅細胞體積（MCV）值對地貧患者進行初篩，通過兩組初篩結果和基因結果進行比對，探討其結合MCV值對地貧的診斷價值，并重新制定本實驗室的截斷值?，F(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象 7 234例對象來自2016年1-8月由基層單位通過廣東省婦幼信息網(wǎng)，對血細胞分析提示夫婦雙方或一方地貧表型陽性（MCV<82 fL、MCH<27 pg），符合國家政策免費檢測地貧防控項目而轉診到本院地貧防控中心的20～45歲育齡青年。本研究把HbA2<2.5%、MCV<82 fL和HbA2值介于2.5%～2.8%、MCV<82 fL的標本作為比較同步進行三種常見α缺失型地貧基因（- -SEA/，-α3.7/，-α4.2/）和我國常見的三種α非缺失型地貧基因（Hb ConstantSprimg、Hb QuongSze、Hb Westmead ）檢測。

1.2 方法

1.2.1 檢測HbA2的全自動毛細管電泳分析儀 Caplillarys型購自于法國Sebia公司和廠家提供的配套試劑。實驗條件電壓和緩沖液條件分別為9.8 kV、pH值9.4，并聯(lián)的8條石英毛細管同步進行血紅蛋白電泳，檢測HbA2的百分含量[6]。每次檢測標本前必須先測定配套的質控品，室內(nèi)質控檢測通過方可進行臨床標本HbA2的檢測。

1.2.2 基因診斷 由廣東凱普生物科技股份有限公司提供的全自動血細胞基因提取儀和地貧基因診斷試劑盒，提取儀HBNP-4801A，擴增儀為BIO RAD T100型，分子雜交儀型號為HB-2012A。采用導流雜交技術檢測三種常見的α缺失型地貧基因（- - SEA/，-α3.7/，-α4.2/）和三種α非缺失型地貧基因（Hb ConstantSprimg、Hb QuongSze、Hb Westmead）。

2 結果

2.1 HbA2檢測結果 根據(jù)廣東省地中海貧血防控流程標準制定血紅蛋白A2<2.5%、MCV<82 fL為α地貧初篩陽性的標準[7]，在7 234例育齡青年中HbA2<2.5%、MCV<82 fL，血紅蛋白電泳和血常規(guī)篩查結果都提示為α地貧表型的1 090例；HbA2值介于2.5%～2.8%且MCV<82 fL篩查結果只有血常規(guī)提示為α地貧表型的538例。

2.2 基因檢測結果 把HbA2<2.5%、MCV<82 fL和HbA2值介于2.5%～2.8%、MCV<82 fL的標本為對照比較同步進行三種常見α缺失和非缺失型地貧基因檢測。在7 234例育齡青年中HbA2<2.5%、MCV<82 fL篩查結果為α地貧表型的1 090例，其中基因檢測確診為α地貧1 073例，符合率為98.4%（1 073/1 090），17例常見α地貧基因型檢測結果為陰性，其中5例確診為罕見α地貧，12例疑為缺鐵性貧血，建議進一步臨床檢測；雖然篩查結果HbA2值介于2.5%～2.8%，但MCV<82 fL血常規(guī)提示為α地貧表型的有538例，基因檢測確診為α地貧的為411例，檢出率為76.4%（411/538），常見α地貧基因檢測陰性的127例，其中3例確診為罕見α地貧，16例為缺鐵性貧血，108例為孕期婦女疑為孕期生理性貧血。α地貧的總檢出率為20.62%[（1 073+5+411+3）/7 234]。

3 討論

近年來，由于政府的大力宣傳和對出生缺陷干預，令人們對地貧的認識和預防有了飛躍性的進步，而做好地貧防控的工作就成為一線醫(yī)務工作者的首要任務。在廣東省α地貧的發(fā)生率明顯高于β地貧，而對地貧的初篩除了血紅蛋白電泳外，最方便有效的篩查指標是血常規(guī)中的MCV<82 fL、MCH<27 pg、RDW>14.5%等紅細胞參數(shù)[8-9]，其檢測結果在輕型地貧攜帶者外周血中出現(xiàn)明顯異常時有較高診斷意義[10]，如果RDW明顯升高時還需要考慮是否為缺鐵性貧血，缺鐵性貧血患者會出現(xiàn)紅細胞大小不均勻，而地貧患者多為小細胞低色素，紅細胞大小均勻的血象[11]。血紅蛋白電泳檢測對α和β地貧基因攜帶者的診斷起到了良好的輔助作用，但在實際應用中常因人群特異性或地域不同存在一定的差異，由于清遠為粵北偏遠地區(qū)，存在大量的群居少數(shù)民族，故此臨床實驗室如能結合不同方法和人群特點等因素設定自己的最佳臨界值，將更大程度地提高篩查指標的診斷效能[12]。本研究采用毛細管電泳的方法檢測HbA2，聯(lián)合MCV值對地貧患者進行初篩，通過兩組初篩結果和基因結果進行比對，探討其聯(lián)合MCV值對地貧的診斷價值，并重新制定本實驗室的截斷值。結果在7 234例育齡青年中HbA2<2.5%、MCV<82 fL篩查結果同時為α地貧表型的1 090例，其中基因檢測確診為α地貧1 073例，符合率為98.4%（1 073/1 090），17例常見α地貧基因型檢測結果為陰性，其中5例確診為罕見α地貧，12例為缺鐵性貧血；HbA2值介于2.5%～2.8%、MCV<82 fL篩查結果只有血常規(guī)提示為α地貧表型的538例，基因檢測確診為α地貧的411例，檢出率為76.4%（411/538），常見α地貧基因檢測陰性的127例，其中3例確診為罕見α地貧，16例為缺鐵性貧血，108例為孕期婦女，疑為孕期生理性貧血。α地貧的總檢出率為20.6%[（1 073+5+411+3）/7 234]與廣東省的基線調(diào)查數(shù)據(jù)相符[8]。由兩組實驗數(shù)據(jù)表明，如果按照臨床標準HbA2<2.5%疑似輕型α地貧的參考范圍為診斷依據(jù)，將會有414例α地貧攜帶者漏診，漏診率為27.7%，在很大程度上增加了重型地貧新生患者的出生概率。由此可見，HbA2檢測結果的參考值在α地貧的篩查應用中存有區(qū)域和種族差異[13]。

綜上所述本實驗室將重新將HbA2的值小于2.8%；血常規(guī)MCV<82 fL作為α地中海貧血篩查標準的新截斷值，以降低α地貧的漏篩率。目前，地中海貧血基因檢測的檢測方法較成熟，國內(nèi)主要以GAP-PCR、PCR-RDB和導流雜交法為主，因其具備快速、敏感、操作方法簡單，成本較低等優(yōu)點，在臨床實驗室得到了非常廣泛的應用[14]。但此方法還尚存在一定的局限性，只能檢出常見位點缺失和突變，不能檢出未知或稀有的缺失和突變位點[15]。因此，在臨床實踐中對于HbA2和MCV同時出現(xiàn)地貧篩查陽性表型且未見其他異常血紅蛋白帶而常見基因檢測未檢出異常突變的高風險人群，應考慮采用測序或其他方法檢測，預防出現(xiàn)漏診、漏防的現(xiàn)象，將重癥地貧兒的出生率降到最低。

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